中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與結(jié)腸癌肝、肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系

徐海聲 寧四清

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中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與結(jié)腸癌肝、肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系

徐海聲 寧四清

目的 探討中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neurtophil elastase，NE)與結(jié)腸癌肝、肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法選擇進(jìn)行手術(shù)切除的120例結(jié)腸癌患者為研究對(duì)象，根據(jù)癌癥是否發(fā)生轉(zhuǎn)移，分為結(jié)腸癌不轉(zhuǎn)移組(n=52)、結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移組(n=32)、結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移組(n=36)。采用ELISA法測(cè)定3組患者血清及組織上清中NE、IL-6和TNF-α水平，并進(jìn)行比較，同時(shí)進(jìn)行NE與IL-6和TNF-α相關(guān)性的分析。結(jié)果①結(jié)腸癌患者NE、IL-6及TNF-α明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)腸癌不轉(zhuǎn)移患者NE、IL-6及TNF-α明顯低于結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者NE的水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但NE、IL-6及TNF-α的水平在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。②相關(guān)性的分析結(jié)果顯示，NE與IL-6(γ=0.9919，P=0.0009)及TNF-α(γ=0.9587，P=0.01)呈明顯的正相關(guān)。結(jié)論中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的水平與結(jié)腸癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，特別是肝、肺的轉(zhuǎn)移。

中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶；結(jié)腸癌；侵襲轉(zhuǎn)移

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:1420～1422)

結(jié)腸癌是消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤。結(jié)腸癌根治性切除術(shù)在一定范圍內(nèi)能提高患者的生存率，但由于結(jié)腸癌極易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。所以，阻斷結(jié)腸癌發(fā)生轉(zhuǎn)移的途徑對(duì)于提高患者的生存率具有重要的意義[1]。中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶屬于鋅離子和鈣離子依賴性基質(zhì)降解酶，作用底物廣泛，可降解細(xì)胞外基質(zhì)中的所有蛋白，被認(rèn)為是最具破壞力的酶類之一。據(jù)報(bào)道，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與許多疾病的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)，如炎癥性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、心肌炎、類風(fēng)濕、腦損傷、肺損傷、肺氣腫等[2-3]。近年來(lái)，關(guān)于中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與疾病的相關(guān)性備受關(guān)注，而關(guān)于其與結(jié)腸癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究，特別是關(guān)于肝肺轉(zhuǎn)移的研究鮮有報(bào)道。本研究采用ELISA法測(cè)定人結(jié)腸癌組織NE、IL-6、TNF-α水平，分析NE與IL-6及TNF-α相關(guān)性，探討NE與結(jié)腸癌肝、肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2012年2月至2014年2月期間在我院普外科進(jìn)行手術(shù)切除的120例結(jié)腸癌患者為研究對(duì)象，男性64例，女性56例，其中無(wú)轉(zhuǎn)移52例，肝轉(zhuǎn)移32例，肺轉(zhuǎn)移36例(術(shù)后發(fā)現(xiàn))，平均年齡為(48±7.7)歲。住院第1天，所用患者即清晨抽取空腹靜脈血，用于血清的制備。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前經(jīng)結(jié)腸癌鏡檢及病理活檢確認(rèn)為結(jié)腸癌；無(wú)放療史、化療史；腹部未進(jìn)行手術(shù)。所有患者接受開(kāi)腹手術(shù)進(jìn)行結(jié)腸癌根治性切除術(shù)，術(shù)后將離體樣本用于組織上清的制備。對(duì)照組血清選擇同一時(shí)期在我院進(jìn)行健康體檢者40例。

1.2 組織上清及血清的制備

取患者第二部分結(jié)腸，在冰上將組織磨碎，4 ℃ 5 000 r/min離心10 min后取上清液，放于-20 ℃，盡量避免反復(fù)凍融。將預(yù)先抽取的靜脈血4 000 r/min 離心10 min，離心后，吸取血清放于-20 ℃。對(duì)制備的上清和血清將采用彈性蛋白酶定量檢試劑盒(上海勝隆實(shí)業(yè)有限公司)，ELISA法測(cè)定中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的濃度，并同時(shí)采用ELISA法檢測(cè)IL-6及TNF-α的水平(IL-6及TNF-αELISA酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)于上海優(yōu)寧維有限公司)。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析

在統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理，各測(cè)量指標(biāo)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，各組數(shù)據(jù)間的比較采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析，相關(guān)性采用perman相關(guān)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清NE、IL-6和TNF-α水平的測(cè)定

NE、IL-6和TNF-α水平在4組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。兩兩比較的結(jié)果顯示，結(jié)腸癌無(wú)轉(zhuǎn)移組、肝轉(zhuǎn)移組和肺轉(zhuǎn)移組3組的NE、IL-6和TNF-α水平與正常對(duì)照組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.0001)；且無(wú)轉(zhuǎn)移組的NE、IL-6和TNF-α水平與肝轉(zhuǎn)移組和肺轉(zhuǎn)移組的水平均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.0001)；但3者水平在肝轉(zhuǎn)移組與肺轉(zhuǎn)移組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.8722)。

表1 血清NE、IL-6和TNF-α水平的測(cè)定(±s)

表1 血清NE、IL-6和TNF-α水平的測(cè)定(±s)

組別NE/(ng·mL-1)IL-6/(pg·mL-1)TNF-α/(pg·mL-1)正常對(duì)照組(n=40)16．31±2．590．54±0．111．03±0．28結(jié)腸癌無(wú)轉(zhuǎn)移組(n=52)21．47±5．081．35±0．231．89±0．53結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移組(n=32)25．06±2．331．58±0．492．11±0．87結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移組(n=36)24．95±7．461．49±0．362．33±1．09F26．8489．7423．51P<0．0001<0．0001<0．0001

2.2 結(jié)腸癌患者組織上清NE、IL-6和TNF-α水平的測(cè)定

在組織上清中，肝轉(zhuǎn)移組及肺轉(zhuǎn)移組NE、IL-6和TNF-α的水平明顯高于無(wú)轉(zhuǎn)移組(P<0.0001)，但肝轉(zhuǎn)移組與肺轉(zhuǎn)移組NE、IL-6和TNF-α的差異不明顯(P>0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組織上清NE、IL-6和TNF-α水平的測(cè)定(±s)

表2 各組織上清NE、IL-6和TNF-α水平的測(cè)定(±s)

組別NE/(ng·mL-1)IL-6/(pg·mL-1)TNF-α/(pg·mL-1)結(jié)腸癌無(wú)轉(zhuǎn)移組(n=52)9．31±1．051．26±0．111．44±0．09結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移組(n=32)12．96±2．581．53±0．161．63±0．24結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移組(n=36)12．77±3．111．56±0．251．58±0．18F36．1939．4014．58P<0．0001<0．0001<0．0001

2.3 結(jié)腸癌患者NE與IL-6和TNF-α的相關(guān)性分析

相關(guān)性的分析結(jié)果顯示，結(jié)腸癌患者的NE水平與IL-6、 TNF-α均呈明顯的正相關(guān)，見(jiàn)表3。

表3 NE與IL-6、TNF-α的相關(guān)性分析

3 討論

中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶由中性粒細(xì)胞釋放，其參與機(jī)體的免疫防御和炎癥反應(yīng)及其在調(diào)控中發(fā)揮著重要的作用，并能促進(jìn)病毒、細(xì)菌的侵入及癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。據(jù)有關(guān)報(bào)道，中性粒細(xì)胞是引起各種損傷的早期觸發(fā)因子，其在腸道病變部位的浸潤(rùn)是潰瘍性結(jié)腸炎急性期的標(biāo)記，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶作為中性粒細(xì)胞分泌的主要產(chǎn)物必然與潰瘍性結(jié)腸炎有關(guān)。相關(guān)的研究也證實(shí)在潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病中中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的 mRNA表達(dá)水平和免疫組織化學(xué)染色普遍升高[4]，而潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病發(fā)展成結(jié)腸癌的危險(xiǎn)性明顯增高[5]，進(jìn)而檢測(cè)結(jié)腸癌組織中的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶水平對(duì)于預(yù)防結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展具有重要的意義。由于中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與人類很多疾病的發(fā)生發(fā)展息息相關(guān)，如肺損傷、肺氣腫、肝疾病，而結(jié)腸癌常發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，特別是肝肺的轉(zhuǎn)移[2]。然而，關(guān)于NE與結(jié)腸癌肝、肺的轉(zhuǎn)移的研究甚少。

本研究通過(guò)對(duì)結(jié)腸癌不轉(zhuǎn)移、結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移及結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者的血清及癌變組織的上清進(jìn)行中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶水平的檢測(cè)，探討中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與結(jié)腸癌發(fā)生肝轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果顯示，結(jié)腸癌患者血清中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的水平明顯高于健康人群的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的水平，且結(jié)腸癌不轉(zhuǎn)移患者的NE水平與結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者的中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，但中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的水平在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者之間無(wú)明顯的差異(P>0.05)，提示中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶水平的升高與結(jié)腸癌的發(fā)生有關(guān)，同時(shí)其也參與了結(jié)腸癌向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的過(guò)程。中性粒細(xì)胞彈性蛋白引起的炎癥反應(yīng)進(jìn)一步引發(fā)相關(guān)炎癥細(xì)胞因子的釋放，如IL-6和TNF-α[6-7]。IL-6和TNF-α等炎癥因子在結(jié)腸癌組織中大量存在，是結(jié)腸癌診斷和檢測(cè)的不可缺少的指標(biāo)[8-9]?；诖?，本研究同時(shí)檢測(cè)了IL-6和TNF-α的水平，結(jié)果顯示，結(jié)腸癌患者IL-6和TNF-α的水平明顯高于健康人群的IL-6和TNF-α的水平，與研究報(bào)道一致[10]，且結(jié)腸癌不轉(zhuǎn)移患者的IL-6和TNF-α的水平與結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移患者和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者的IL-6和TNF-α的水平比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示IL-6和TNF-α均促使結(jié)腸癌向遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移，但I(xiàn)L-6和TNF-α的水平在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移和結(jié)腸癌肺轉(zhuǎn)移患者之間無(wú)明顯的差異(P>0.05)。相關(guān)分析結(jié)果顯示，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與IL-6、TNF-α均呈明顯正相關(guān)，進(jìn)一步說(shuō)明中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶與結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

綜上所述，中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶的水平與結(jié)腸癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，特別是肝、肺的轉(zhuǎn)移，此外，調(diào)節(jié)NE的水平是否有可能成為減少結(jié)腸癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的一個(gè)方向仍有待進(jìn)一步研究。

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(編輯：甘 艷)

Relationship between Neutrophil Elastase and Metastasis of Colorectal Cancer

XUHaisheng，NINGSiqing.XiangyangCentralHospital，Xiangyang，441021

Objective To explore the relationship between neutrophil elastase(NE) and metastasis of colorectal cancer.Methods 120 cases of colorectal cancer patients underwent surgery were selected.According to whether happen cancer metastasis，the patients were divided into 3 groups，colorectal cancer without metastasis group(n=52)，colorectal cancer with liver metastases group(n=32) and colorectal cancer with lung metastasis group(n=36).The levels of NE，IL-6 and TNF-α in serum and supernatant of cancer tissue were detected by ELISA method and then compared among the 3 groups.Simultaneously，the correlation of NE with IL-6 and TNF-α were analyzed.Results ① The levels of NE，IL-6 and TNF-α in patients with colorectal cancer were all significantly higher than those of the normal control group (P<0.05).The levels of NE，IL-6 and TNF-α in colorectal cancer without metastasis were markedly lower than those in colorectal cancer with liver and lung metastasis，there had statistically significant difference(P<0.05).There had no statistically difference in levels of NE，IL-6 and TNF-α between colorectal cancer with liver and lung metastasis(P>0.05).② Correlation analysis showed that NE displayed a significant positive correlation with IL-6(γ=0.9919，P=0.0009) and TNF-α(γ=0.9587，P=0.01).Conclusion The level of NE is related with the invasion and metastasis of colorectal cancer，especially the liver and lung metastasis.

Neutrophil elastase(NE)；Colorectal cancer；Invasion and metastasis

441021 湖北省襄陽(yáng)市中心醫(yī)院

寧四清

10.3969/j.issn.1001-5930.2016.09.010

R735.3+5

1001-5930(2016)09-1420-03

A

2015-10-08

2016-04-05)