FOXP1與Livin基因表達(dá)對淋巴瘤病理特征及臨床預(yù)后評價(jià)價(jià)值

夏靖媛，徐 薪

FOXP1與Livin基因表達(dá)對淋巴瘤病理特征及臨床預(yù)后評價(jià)價(jià)值

夏靖媛，徐 薪

目的 探討叉頭框蛋白P1(FOXP1)與Livin基因表達(dá)對淋巴瘤臨床病理特征及預(yù)后的評價(jià)價(jià)值。方法 選擇2013-08至2015-08間在我院腫瘤科住院治療的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者80例為觀察組，40例反應(yīng)性淋巴結(jié)增生患者為對照組，觀察并分析兩組FOXP1與Livin表達(dá)情況。分析淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 觀察組FOXP1及Livin高表達(dá)的比例分別為77.5%、60.0%，均顯著高于對照組比例20.0%、5.0%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原發(fā)部位(節(jié)內(nèi))、Non-GCB者FOXP1高表達(dá)比例分別為92.3%、86.2%、86.7%，比例更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，存在B癥狀、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表達(dá)的比例分別為81.2%、80.8%、73.3%，比例更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤內(nèi)FOXP1及Livin表達(dá)水平與其臨床特征、病理類型存在密切關(guān)系。

淋巴瘤；B細(xì)胞；預(yù)后；腫瘤標(biāo)記物

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤是最常見的非霍奇金淋巴瘤，約占所有非霍奇金淋巴瘤的30%～40%，它具有明顯的侵襲性，生物學(xué)行為活躍，常存在周圍浸潤及遠(yuǎn)處播散，預(yù)后差[1,2]。由于彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤具有特定的臨床特征、組織病理學(xué)特征及遺傳免疫特征，對放療及化療敏感，經(jīng)合理治療后可以提高生活質(zhì)量，延長生存時(shí)間[3]。但由于該腫瘤存在明顯的異質(zhì)性，對治療反應(yīng)性不同，目前臨床研究發(fā)現(xiàn)一些新的生物學(xué)指標(biāo)可以評判其預(yù)后。FOXP1是一種翼型螺旋轉(zhuǎn)錄因子，屬于FOXP亞家族，它在B細(xì)胞發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用，在健康人體細(xì)胞中表達(dá)，在多種腫瘤組織中也廣泛表達(dá)，關(guān)于FOXP1在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤表達(dá)及與臨床病理的關(guān)系已有研究，但存在爭議。Livin表達(dá)于人胚胎組織及腫瘤細(xì)胞，屬于凋亡蛋白，是目前免疫組化研究的熱點(diǎn)[4]。本研究中，筆者通過對照研究，探討彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中FOXP1及Livin表達(dá)情況。

1 對象與方法

1.1 對象 選擇2013-08至2015-08間在我院腫瘤科住院治療的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者80例為觀察組，包括男45例，女35例，年齡18～72歲，平均(51.8±3.6)歲。臨床分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期23例，Ⅲ期27例，Ⅳ期15例；國際預(yù)后指數(shù)評分：0～2分46例，3～4分34例。另選擇40例反應(yīng)性淋巴結(jié)增生患者為對照組，包括男23例，女17例，年齡18～71歲，平均(50.2±3.1)歲。兩組在年齡、性別等方面無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，具有可比性(P>0.05)。本研究經(jīng)院倫理委員會批準(zhǔn)，向患者介紹研究目的及方法，并均簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)根據(jù)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查及病理學(xué)檢查，符合彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)年齡≥18歲，初次確診并于我院住院治療，采用同一化療方案；(3)無其他部位惡性腫瘤，無急性感染性疾??；(4)無嚴(yán)重心臟、肝臟或腎臟功能障礙；(5)自愿接受免疫組化檢查；(6)化療方案包括利妥昔單抗、環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿及強(qiáng)的松；(7)臨床資料完整。

1.2 方法 取得檢測標(biāo)本后，經(jīng)中性甲醛溶液(10%)固定，石蠟包埋切片，厚度3～4 μm。于烤片機(jī)烘烤2 h后置于60 ℃恒溫箱處理24 h，應(yīng)用二甲苯脫蠟、梯度乙醇浸泡脫水后應(yīng)用枸櫞酸修復(fù)液高壓修復(fù)2 min，將3% H2O2滴于組織上以阻斷內(nèi)源性過氧化氫酶，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)處理后加封閉用羊血清，應(yīng)用FOXP1單克隆抗體及Livin抗體(兩者均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)進(jìn)行一抗孵育，置于4 ℃冰箱過夜，而后置于37 ℃恒溫箱中復(fù)溫，PBS沖洗5 min，共3次。應(yīng)用50 μl生物素進(jìn)行二抗孵育處理，置于37 ℃恒溫箱中孵育10 min，PBS沖洗5 min，共3次。再應(yīng)用50 μl鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液，置于37 ℃恒溫箱中孵育20 min，PBS沖洗5 min，共3次。在切片中添加2滴DAB溶液，顯微鏡下觀察3～10 min控制顯色時(shí)間，其中陽性顯色為棕褐色或棕黃色，以自來水沖洗至終止發(fā)色，應(yīng)用蘇木素襯染，1%鹽酸乙醇液分化，0.5%氫氧化氨液反藍(lán)10 min，再次脫水透明，置于恒溫箱上方，干燥后應(yīng)用中性樹膠封片。FOXP1及Livin均呈棕黃色或棕褐色，前者定位于細(xì)胞核中，后者定位于細(xì)胞質(zhì)中，少量混合存在。低倍鏡觀察定位后采用高倍鏡觀察，選擇10個視野，共計(jì)數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，對FOXP1及Livin表達(dá)進(jìn)行記錄。染色強(qiáng)度包括0～3分四個等級[6]，其中0分為無染色，1分為淺黃色，2分為黃色，3分為棕黃色、棕褐色。

陽性細(xì)胞百分率包括0～3分四個等級[7]：其中0分為陽性細(xì)胞≤5%，1分為陽性細(xì)胞>5%，≤25%，2分為陽性細(xì)胞>25%，≤50%，3分為陽性細(xì)胞>50%。表達(dá)情況評價(jià)采用兩者乘積，其中0分為(-)，1～4分(+)，5～8(++)，9～12(+++)，低表達(dá)為0分(-)，1～4分(+)；高表達(dá)為5～8(++)，9～12(+++)。

1.3 觀察指標(biāo) 分析觀察組與對照組FOXP1及Livin表達(dá)情況。分析淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達(dá)與臨床病理特征[年齡、性別、IPI(國際預(yù)后指數(shù))分型、原發(fā)部位、病理類型]的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1 兩組FOXP1及Livin表達(dá)情況的比較 觀察組FOXP1及Livin以高表達(dá)為主，對照組FOXP1及Livin以低表達(dá)為主，觀察組FOXP1及Livin高表達(dá)的比例均顯著高于對照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1)。

表1 兩組淋巴瘤患者FOXP1及Livin表達(dá)情況的比較 (n;%)

2.2 淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原發(fā)部位(節(jié)內(nèi))、Non-GCB(非生發(fā)中心)者FOXP1高表達(dá)比例更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，存在B癥狀、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表達(dá)的比例更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。FOXP1表達(dá)在不同年齡、性別及B癥狀存在與否方面均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，Livin表達(dá)在不同年齡、性別及原發(fā)部位間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2)。

表2 淋巴瘤患者FOXP1、Livin表達(dá)與病理特征的關(guān)系 (n;%)

3 討 論

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤好發(fā)于老年人，男性多見，其特征性臨床表現(xiàn)為進(jìn)展迅速的無痛性腫塊，其他常見癥狀包括發(fā)熱、體重減輕等，影像學(xué)檢查有助于病變的定位和定性診斷[8]。其具體的發(fā)病機(jī)制尚不明確，可能與分子遺傳學(xué)及免疫機(jī)制有關(guān)。由于彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤侵襲性明顯，若得不到及時(shí)合理的治療，預(yù)后較差，化療及放療是其有效且常用的方法[9]。

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床特征、分子遺傳學(xué)特征存在很強(qiáng)的異質(zhì)性，因此臨床治療及預(yù)后的個體化差異很大。雖然IPI評分可以指導(dǎo)臨床治療和評估預(yù)后，但存在一定的誤判和差異[10]，因此采用一種易獲得且準(zhǔn)確的生物學(xué)標(biāo)記是目前臨床研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)。本研究通過觀察FOXP1及Livin表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，與反應(yīng)性淋巴結(jié)增生患者比較，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的FOXP1及Livin高表達(dá)的比例均顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示淋巴瘤中FOXP1及Livin表達(dá)更高，與以往研究結(jié)果相似。且淋巴瘤患者中，高中危+高危IPI、原發(fā)部位(節(jié)內(nèi))、Non-GCB者FOXP1高表達(dá)比例更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，存在B癥狀、高中危+高危IPI、Non-GCB者Livin高表達(dá)的比例更高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示FOXP1及Livin表達(dá)與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的臨床特征及病理特征存在明顯的關(guān)系。FOXP1屬于FOX家族，參與人體多個正常的生理過程，其表達(dá)異常與惡性腫瘤、代謝異常及畸形病變有關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)，健康人體中存在FOXP1表達(dá)，在惡性腫瘤組織中，F(xiàn)OXP1表達(dá)升高，且不同的腫瘤中其表達(dá)存在差異[11]。也有學(xué)者通過臨床病理分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXP1表達(dá)與腫瘤患者臨床特征及預(yù)后存在密切關(guān)系[12]。Livin屬于凋亡抑制蛋白家族，包括兩個亞型，其作用為通過抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白酶等途徑抗細(xì)胞凋亡。Livin可以存在于人體胚胎組織中，但在健康人體不表達(dá)或低表達(dá)。在多數(shù)腫瘤患者中，Livin呈明顯高表達(dá)[13]。這與Livin正常凋亡機(jī)制受損而導(dǎo)致惡性潛能積累導(dǎo)致腫瘤發(fā)生有關(guān)。本研究結(jié)果說明通過對FOXP1和Livin的檢測可以對彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤的臨床特征及病理特征進(jìn)行推測和評判，但兩者存在一定差異，F(xiàn)OXP1表達(dá)在原發(fā)部位(節(jié)內(nèi))間存在差異，而Livin表達(dá)在B癥狀存在與否間存在差異。彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤內(nèi)FOXP1高表達(dá)說明腫瘤細(xì)胞存在免疫逃逸現(xiàn)象，主要FOX家族蛋白表達(dá)密切相關(guān)。而彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤內(nèi)Livin高表達(dá)則提示細(xì)胞凋亡機(jī)制存在障礙而反應(yīng)性導(dǎo)致Livin表達(dá)升高[14]。腫瘤微環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞、細(xì)胞間質(zhì)及周圍組織間存在復(fù)雜而密切的關(guān)系，通過檢測FOXP1及Livin的表達(dá)，可以對腫瘤預(yù)后進(jìn)行評估[15]。

總之，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤內(nèi)FOXP1及Livin表達(dá)升高，且FOXP1及Livin表達(dá)水平與其臨床特征、病理類型存在密切關(guān)系。

[1] 陳 敏,楊桂芳.彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤兩種亞型中多藥耐藥蛋白的表達(dá)差異及臨床意義[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2016,37(2):232-235.

[2]ChuanHe,ZhigangLiu,JieJi,et al.Prognosticvalueofsurvivininpatientswithnon-Hodgkin’slymphoma:ameta-analysis[J].IntJClinExpMed,2015,8(4): 5847-5854.

[3] 齊 彥,廖 斌,楊麗英,等.非霍奇金淋巴瘤中MCM2、Cx43、Skp2蛋白的表達(dá)[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,24(6):958-961.

[4]Bo-YoungOh,Ryung-AhLee,KwangHoKim.siRNAtargetingLivindecreasestumorinaxenograftmodelforcoloncancer[J].WorldJGastroenterol,2011,17(20): 2563-2571.

[5] 王健超,張文燕,丁文雙，等.異常表達(dá)CD56的彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤臨床病理觀察[J].中華病理學(xué)雜志,2016,10(2):78-82.

[6] 范小紅,孟亞紅,鄒健等.乙肝表面抗原陽性的非霍奇金淋巴瘤患者化療前后T淋巴細(xì)胞亞群的變化[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2016,25(9):920-922.

[7] 李貽陽,牛紹清,溫 戈,等.基于GELOX方案誘導(dǎo)化療的Ⅰ-Ⅱ期結(jié)外鼻型K/T細(xì)胞淋巴瘤根治性放療的預(yù)后分析[J].中華放射腫瘤學(xué)雜志,2016,25(2):140-145.

[8] 張亞楠.FOXP1蛋白在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義[J].重慶醫(yī)學(xué),2015,44(17):2368-2370.

[9] 朱 丹,王瑛堅(jiān).原發(fā)性卵巢上皮性惡性腫瘤中Livin和Fas的表達(dá)及相關(guān)性分析[J].中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),2014,18(8):1312-1314.

[10] 陳廷玉,盧春鳳,關(guān)寶生,等.宮頸癌中Livin和COX-2蛋白的表達(dá)及相關(guān)性研究[J].解剖學(xué)研究,2015,37(5):398-400.

[11] 胡成如,王靖華,耿懷成,等.叉頭框轉(zhuǎn)錄蛋白1在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)及預(yù)后意義[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2012,17(4):339-342.

[12] 沈 琳,陳波斌,陳 字,等.原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤FOXPl和CyclinE的表達(dá)及其意義[J].中華血液學(xué)雜志,2012,33(8):648-652.

[13]IAbd-Elrahman,VDeutsch,MPick, et al.DifferentialregulationoftheapoptoticmachineryduringmegakaryocytedifferentiationandplateletproductionbyinhibitorofapoptosisproteinLivin[J].CellDeathDis,2013,4(11):e937.

[14] 李 蓉,潘湘濤,陸 曄,等.Livin和Smac蛋白在非霍奇金淋巴瘤中的表達(dá)及其臨床意義[J].白血病.淋巴瘤,2010,11(8):494-496.

[15] 李文琦,李曉林.Livin和Survivin基因在成人急性淋巴細(xì)胞白血病中的表達(dá)及臨床意義[J].中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志,2011,19(4):921-925.

(2016-05-23收稿 2016-08-25修回)

(責(zé)任編輯 岳建華)

Value of FOXP1 and Livin in evaluation of prognosis of lymphoma

XIA Jingyuan and XU Xin.Department of Pathology, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100039,China

Objective To explore the significance of FOXP1 and Livin expressions in the evaluation of clinicopathological characteristics and prognosis of lymphoma.Methods Eighty patients with diffuse large B cell lymphoma treated at our hospital between August 2013 and August 2015 were selected as observation group, with 40 cases of reactive lymph node hyperplasia patients as control group. The expressions of FOXP1 and Livin in the two groups were observed and analyzed. The relationships between the expressions of FOXP1 and Livin in patients with lymphoma and the clinicopathological features were analyzed.Results The percentage of high expressions of FOXP1 and Livin in the observation group was 77.5% and 60% respectively, which was significantly higher than that in the control group (20%, 5%), and the difference was statistically significant (P<0.05). Among the high-risk IPI and non-GCB patients of lymphoma or those with primary lymphoma, high expression rates of FOXP1 were 92.3%, 86.2%, 86.7% respectively, the proportion was higher, and the difference was statistically significant (P<0.05). In the presence of B-symptom, the expression rates of Livin were 81.2%, 80.8%, 73.3% respectively, the proportion was higher, and the difference was of statistic significance (P<0.05).Conclusions The expression level of FOXP1 and Livin in patients with diffuse large B cell lymphoma is closely related to its clinical features and pathological types.

lymphoma; B cell; prognosis; tumor marker

夏靖媛，碩士研究生。

100039 北京，武警總醫(yī)院病理科

徐 薪，E-mail:xxblueflower@163.com

R365