米邦塔仙人掌果膠對小鼠慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激所致抑郁樣癥狀的改善作用

米邦塔仙人掌果膠對小鼠慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激所致抑郁樣癥狀的改善作用

張玉寶1，李祖銘1，余玲1，羅攀2，湛進(jìn)進(jìn)2，郭蓮軍2

目的：研究米邦塔仙人掌果膠（milpa alta cactus pectin，MCP）對小鼠慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（CUMS）后體重和糖水偏好的影響。方法：健康雄性昆明種小鼠60只隨機(jī)分為5組：正常對照組、CUMS組、MCP低劑量組（50 mg/kg）、MCP中劑量組（100 mg/kg）、MCP高劑量組（200 mg/kg），各10只。采用11種應(yīng)激因子，建立CUMS模型，給予小鼠應(yīng)激6周。通過測量糖水?dāng)z入和小鼠體重變化率，評價MCP對抑郁樣癥狀的改善作用。結(jié)果：CUMS組小鼠體重增長率、糖水?dāng)z入量都顯著低于正常對照組（P＜0.05）；與CUMS組比較，MCP中、高劑量組小鼠體重變化率、糖水?dāng)z入量明顯增加（P＜0.05）。結(jié)論：MCP對CUMS所致抑郁樣癥狀具有一定的改善作用。

米邦塔仙人掌果膠；慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激；糖水偏好性；小鼠

慢性溫和應(yīng)激（chronic mild stress，CMS）誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，是抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一。抑郁癥的核心癥狀是對獎賞的反應(yīng)性下降，即快感缺乏。Willner等[1]提出以“糖水偏愛性”來衡量嚙齒目動物的快感缺乏癥狀，此方法得到同行的廣泛認(rèn)可。體重明顯減輕亦為抑郁癥診斷的一個重要指標(biāo)。慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）模型動物體重也會出現(xiàn)顯著性下降[2,3]。有研究顯示植物果膠（Pectin）有較好的抗氧化和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用[4-6]。本研究觀察米邦塔仙人掌果膠（milpa alta cactus pectin，MCP）是否對中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性應(yīng)激損傷所致的抑郁癥具有一定的防治作用，報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗動物 清潔級健康雄性昆明小鼠50只，體質(zhì)量15～20 g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物中心提供[許可證號：SCXK（鄂）2008-0007，合格證號：No：00020736]。光照12 h晝夜交替，室溫（24± 2） ，空氣濕度（50±10）%，自由進(jìn)水進(jìn)食（正常飼料）。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗。1.1.2主要試劑與材料 MCP由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)系提取，用雙蒸水溶解配置成5、10、20 mg/mL3種濃度，pH7.4；一級白砂糖，蔗糖含量≥99.6%，購于財勁食品有限公司，溶于雙蒸水配置成1%溶液；精密電子天平（MCP124S），購于德國Sartorius公司；梅特勒-托利多-DELTA320pH計購于上海梅特勒-托利多儀器有限公司。

1.2 方法

50只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為5組，各10只：正常對照組、CUMS組、MCP低劑量組（50 mg/kg）、MCP中劑量組（100 mg/kg）、MCP高劑量組（200 mg/kg）。正常對照組不進(jìn)行任何應(yīng)激處理，正常條件飼養(yǎng)；CUMS組持續(xù)給予下述慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激刺激，歷時6周。MCP低、中、高劑量組在應(yīng)激處理期間，每天上午9：00～10：00灌胃給藥，灌胃體積為0.1 ml/10g，CUMS組給予同等體積的雙蒸水。

給予小鼠以下應(yīng)激因子刺激：斷水16 h；斷食16 h；45°傾斜鼠籠4 h；潮濕墊料24 h；通宵照明；2 h/2 h晝夜交替；晝夜顛倒；陌生氣味4 h；94 °冷水游泳；45 °熱水游泳；活動限制2 h。每天隨機(jī)給予（讓動物不可預(yù)知）以上2種刺激因子，同一種應(yīng)激因子施與間隔時間≥48 h。整個應(yīng)激處理過程共歷時6周，為測定小鼠糖水偏好性，每周三不給予刺激。

糖水消耗測定：用2支改制的10 mL塑料移液管用作小鼠飲水的水瓶，實(shí)驗開始前小鼠適應(yīng)飲水裝置1周。隨后進(jìn)行糖水?dāng)z取訓(xùn)練：第1～7天，建立糖水偏好性基線：①首先每籠小鼠給予2瓶1%蔗糖溶液，適應(yīng)12 h；②隨后隨機(jī)將2瓶糖水中的1瓶換成雙蒸水，適應(yīng)12 h；③斷水?dāng)嗍? h后，將已稱重的1%糖水和雙蒸水給予小鼠，同時給予足夠的食物；④12 h后，稱量剩余糖水和雙蒸水重量；⑤計算每籠小鼠的糖水和雙蒸水消耗重量及糖水偏好性；⑥以上過程完成24 h后，重復(fù)步驟③～④并再次測量各籠小鼠糖水偏好性。重復(fù)測量直至各籠小鼠糖水偏好性值基本穩(wěn)定后，進(jìn)行CUMS損傷。造模過程中，每周三21：00～周四9：00給以1%蔗糖溶液和雙蒸水，檢測各組糖水?dāng)z入量，以用于評價小鼠糖水偏好性，糖水偏好性/%={（糖水消耗量/g）/（[糖水消耗量/g）+（雙蒸水消耗量/g）]}×100%

體重變化率測定：小鼠體重記錄從糖水?dāng)z取訓(xùn)練開始，隔天1次，CUMS開始后改為每周稱量1次。糖水偏好性測試過程中，斷水?dāng)嗍? h后，稱得小鼠體重，并依此計算小鼠體重變化率。造模前體重即指最后一次測量糖水偏好性基線過程中所測小鼠體重。體重變化率/%={[（每周體重/g）－（造模前體重/g）]/（造模前體重/g）}×100%

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 MCP對CUMS小鼠模型糖水偏好性的影響

CUMS前，各組糖水偏好性差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。從CUMS后第2周起，CUMS組糖水偏好性低于正常對照組（P＜0.05）。MCP中、高劑量組分別從CUMS后第3、4周起，其糖水偏好性高于CUMS組（P＜0.05或0.01），見表1。

2.2 MCP對CUMS小鼠體重的影響

CUMS前，各組小鼠體重變化率無明顯差異（P＞0.05）。CUMS后1周開始，CUMS組體重變化率始終低于正常對照組（P＜0.05）；MCP中、高劑量組分別從CUMS后第5、6周起，其體重變化率高于CUMS組（P＜0.05或0.01），見表2。

表1 MCP對CUMS小鼠模型糖水偏好性的影響（%，±s）

表1 MCP對CUMS小鼠模型糖水偏好性的影響（%，±s）

注：與正常對照組比較，①P＜0.05；與CUMS組比較，②P＜0.05，③P＜0.01

組別 例數(shù) 應(yīng)激前應(yīng)激后正常對照組CUMS組MCP低劑量組MCP中劑量組MCP高劑量組10 10 10 10 10 71.74±7.80 73.28±1.69 72.68±9.15 74.90±7.18 76.04±6.93 1 w 81.41±6.09 69.78±8.45 69.22±10.19 66.24±9.12 73.11±5.06 2 w 90.43±3.62 65.59±5.29①72.09±7.21 76.74±8.11 69.48±5.11 3 w 86.08±4.60 62.20±1.86①72.80±11.12 78.07±5.98②71.90±7.65 4 w 85.44±2.70 65.47±4.22①68.78±12.99 85.75±5.18②73.92±2.75②5 w 85.34±3.91 55.57±4.15①63.43±11.95 81.68±4.88③75.80±5.60②6 w 89.58±2.55 54.05±1.76①71.77±6.44 82.61±5.61③77.92±8.64③

3 討論

CUMS是將動物長時間置于一系列不可預(yù)知的、溫和的應(yīng)激性情境中，模擬人們在日常生活中長期經(jīng)歷各種不可預(yù)知的、慢性的、低強(qiáng)度的應(yīng)激事件，而導(dǎo)致人的精神與情感發(fā)生障礙。目前研究顯示，環(huán)境因素在抑郁癥的發(fā)病過程中占有舉足輕重的作用，環(huán)境誘發(fā)抑郁癥的動物模型更接近人類抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，亦可用于抗抑郁癥藥物的篩選。

本研究發(fā)現(xiàn)，小鼠給予CUMS1周后即出現(xiàn)體重增長速度明顯減慢及糖水?dāng)z入量明顯減少，該變化一直維持到損傷的第6周，這與文獻(xiàn)[7,8]報道一致。表明動物經(jīng)歷慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激后，表現(xiàn)出對獎賞興趣的喪失和快感缺乏，提示該模型的復(fù)制成功。而小鼠在進(jìn)行慢性應(yīng)激刺激的同時給予不同劑量的MCP進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果顯示，100 mg/kg和200 mg/kg劑量的MCP能有效改善小鼠慢性應(yīng)激所致的體重降低和快感缺乏，提示MCP可能存在潛在的抗抑郁作用，可用以治療慢性神經(jīng)系統(tǒng)方面的疾病。

表2 MCP對CUMS損傷小鼠體重變化率的影響（%，±s）

表2 MCP對CUMS損傷小鼠體重變化率的影響（%，±s）

注：與正常對照組比較，①P＜0.05；與CUMS組比較，②P＜0.05，③P＜0.01

組別 例數(shù) 應(yīng)激前應(yīng)激后正常對照組CUMS組MCP低劑量組MCP中劑量組MCP高劑量組10 10 10 10 10 100 100 100 100 100 1 w 30.63±3.19 16.99±1.57①23.03±2.51 17.48±2.35 25.39±1.07 2 w 37.66±3.69 19.68±2.16①22.61±3.95 21.04±4.75 26.19±3.76 3 w 46.41±4.13 23.65±2.37①30.29±3.79 27.61±3.98 30.36±4.61 4 w 48.11±4.05 28.47±2.09①34.64±3.95 30.97±2.84 35.31±3.06②5 w 52.44±2.43 28.86±2.93①34.89±4.70 38.63±5.13②43.39±4.29②6 w 53.35±2.10 31.68±2.75①38.71±3.60 44.89±4.35②49.01±3.78③

果膠具有降低脂質(zhì)過氧化、提高機(jī)體抗氧化能力的作用[9,10]，從而降低氧化應(yīng)激損傷對心腦血管系統(tǒng)的損傷。氧化應(yīng)激損傷同時也會誘發(fā)多種精神疾病[11]，如抑郁、焦慮及精神分裂癥等。而慢性應(yīng)激誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷是介抑郁癥的發(fā)病機(jī)制之一。有抗氧化活性的藥物如維生素E、枸杞汁、熟地黃和姜黃[12-14]等能較好的改善抑郁樣癥狀；臨床有效抗抑郁藥氟西汀、丙咪嗪、曲舍林、地昔帕明等在治療抑郁癥過程中也表現(xiàn)出明顯的抗氧化應(yīng)激作用[14-16]。本研究發(fā)現(xiàn)，MCP對CUMS小鼠抑郁樣癥狀有良好的改善作用，其作用可能與其抗氧化的作用有關(guān)，但尚需后續(xù)試驗證明。此外，我們在實(shí)驗中并未觀察到慢性應(yīng)激小鼠和給藥小鼠進(jìn)食量出現(xiàn)較大的差異，且在實(shí)驗中所用1%的糖水試驗只是評價動物對獎賞水平變化敏感性的指標(biāo)，其所含微量卡路里對實(shí)驗影響不大，所以排除MCP的作用與改善胃腸道或血糖因素相關(guān)。

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（本文編輯：唐穎馨）

Effects of Milpa Alta Cactus Pectin on Depression-like Symptoms Induced by Chronic Unpre?dictable Mild Stress in Mice

ZHANG Yu-bao1,LI Zu-ming1,YU Ling1,LUO Pan2,CHAN Jin-jin2,GUO Lian-jun2.1.YiChang Maternal and Child Health Care Hospital,Hubei 430030,China；2.Department of Pharmacology,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China

Objective：To investigate the effect of milpa alta cactus pectin(MCP)on body weight and the sucrose preference in mice suffered from a chronic unpredictable mild stress(CUMS).Methods：Sixty male Kunming mice were randomly divided into 5 groups：Control,CUMS,CUMS+MCP 50 mg/kg,CUMS+MCP 100 mg/kg,CUMS+MCP 200 mg/kg,10 in each group.Mice were exposed to CUMS for 6 weeks.During every week of CUMS,the weight and sucrose preference of mice were measured.Results：The weight increasing rate and the sucrose preference of CUMS mice were significant lower compared with the control group(P＜0.05). While treated with MCP at dose of 100 mg/kg and 200 mg/kg can significantly increase the weight increasing rate and sucrose preference compared with the CUMS group(P＜0.05).Conclusion：MCP can ameliorate the depression-like symptoms induced by chronic unpredictable mild stress in mice.

Milpa alta cactus pectin；chronic unpredictable mild stress；sucrose preference；Mice

R741；R749

ADOI10.16780/j.cnki.sjssgncj.2016.05.003

1.湖北省宜昌市夷陵區(qū)婦幼保健院湖北宜昌 443100 2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥理教研室武漢430030

中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項資金資助（No.2011TS073）；國家重大創(chuàng)新平臺重點(diǎn)資助新藥研發(fā)項目（No.2009ZX09301 -014）

2014-09-27

郭蓮軍glj1518@126.com