FBXW7與KLF5在乳腺癌中的表達及臨床意義

王 新，周 昱，廉奇鑫

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

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FBXW7與KLF5在乳腺癌中的表達及臨床意義

王 新，周 昱，廉奇鑫

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：研究FBXW7與KLF5在乳腺癌病變組織中的表達程度及兩個因子同臨床相應(yīng)病理學(xué)特征之間的聯(lián)系以及兩者內(nèi)在聯(lián)系，并闡明其在人類乳腺癌形成過程中的作用機制。方法：選取經(jīng)佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診為乳腺癌并行手術(shù)治療的患者病理蠟塊，且再次由資深病理科醫(yī)生證實，通過采用ElivisionTM Plus/HRP免疫組化方法，分別檢測45例乳腺癌組織標本中FBXW7和KLF5兩個與癌癥相關(guān)基因的表達狀況，同時在應(yīng)用軟件SPSS17.0的幫助下，采用傳統(tǒng)的統(tǒng)計學(xué)計算方法分析上述兩因子同臨床相應(yīng)的病理學(xué)特點間的關(guān)系，最后探討FBXW7和KLF5是否存在相關(guān)的臨床指導(dǎo)意義。結(jié)果：乳腺癌中KLF5陽性表達率為82.22%，高于正常乳腺的17.78%；乳腺癌中FBXW7蛋白陽性表達為53.33%，低于正常乳腺中的100.00%；二組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：KLF5在乳腺癌中表達明顯增強，F(xiàn)BXW7在乳腺癌中表達明顯降低，提示在乳腺癌發(fā)生中KLF5和FBXW7發(fā)揮一定作用，對KLF5、FBXW7的檢測可作為重要生物學(xué)指標。

乳腺癌； FBXW7；KLF5；表達

乳腺癌是最常見的人類惡性腫瘤之一，發(fā)病部位多見乳腺外上象限，腫塊多呈卵圓形或橄欖形，腫瘤通常平滑且邊界清楚，同乳房周圍組織無黏連，腫塊在乳腺內(nèi)可以無阻推動，通常無自發(fā)痛和觸痛現(xiàn)象。根據(jù)最近世界衛(wèi)生組織對乳腺癌患者人數(shù)遞增人數(shù)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在一些發(fā)達地區(qū)由于人群醫(yī)療保障制度建設(shè)的合理，在一些常規(guī)檢查中就及時發(fā)現(xiàn)乳腺疾病。乳腺疾病發(fā)現(xiàn)的越早治療效果越好。

FBXW7也叫F框/WD-40域蛋白(F-box/WD repeat-containing protein 7，F(xiàn)BXW7)它還是是F-box蛋白家族成員[1]，又有學(xué)著給它其為CDC4、FBW7(F-盒和含蛋白7的WD重復(fù)結(jié)構(gòu)域)、hCDC4、AGO、SEL-10，是泛素SCF連接酶的靶蛋白識別組分[2]。最近幾年研究表明，F(xiàn)BXW7是一種抑癌因子，在宮頸癌、胃癌、直腸癌中都發(fā)現(xiàn)了FBXW7的缺失和突變。目前發(fā)現(xiàn)FBXW7的靶蛋白包括CyclinE，c-myc，c-jun，Notch 1 and Notch 4等多種癌蛋白，F(xiàn)BXW7可以介導(dǎo)這些癌蛋白并發(fā)生降解。當發(fā)生細胞突變不但影響FBXW7蛋白的表達，而且還會使CyclinE，c-myc，c-jun，Notch 1 and Notch 4等信號通路異常，并導(dǎo)致細胞的分裂、細胞生長、凋亡以及細胞分化等進程紊亂。

近幾年發(fā)現(xiàn)一種新的轉(zhuǎn)錄因子人類 Kruppel 樣因子 5(KLF5)，它主要起調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄水平，更進一步影響了細胞的增殖及分化[3]，從而控制細胞的發(fā)生與發(fā)展，許多學(xué)者研究KLF5參與了多種腫瘤轉(zhuǎn)錄、已經(jīng)有學(xué)者證明KLF5在胃癌組織其表達的高低與胃癌的惡性程度及預(yù)后顯著相關(guān)[3]。本課題研究通過免疫組化方法測驗45例乳腺癌、45例癌旁正常組織中FBXW7、KLF5兩因子的表達情況，并探索其臨床意義和FBXW7與KLF5在乳腺中是否有關(guān)系。

1.1 資料與方法

選取經(jīng)佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院確診為乳腺癌并行手術(shù)治療的患者病理蠟塊，且再次由資深病理科醫(yī)生證實，病例選自佳木大學(xué)附屬醫(yī)院2012-08～2014-08的手術(shù)標本,全部病例均經(jīng)病理診斷證實。臨床診斷和病理分類依據(jù)WHO標準。其中正常乳腺組45例，年齡23～57歲，平均(45.1±4.1)歲，乳腺癌組45例，年齡26～65歲，平均(47.4±4.9)歲，兩組患者年齡無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。研究對象術(shù)前均未進行選擇的對象均無放療、化療及激素替代治療史。

1.2 主要試劑

FBXW7兔抗單克隆抗體KLF5兔抗單克隆抗體都由北京博奧森生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品生產(chǎn)，通用Elivision法試劑盒以及DAB顯色試劑都是從北京中衫金橋生物技術(shù)有限公司買入。

1.3 免疫組化

通過采用ElivisionTM Plus/HRP免疫組化方法，探討FBXW7、KLF5在乳腺癌及正常癌旁組織中的表達情況。

1.4 結(jié)果判定

FBXW7和KLF5評分標準:陽性細胞的百分率標準為：0分為0%；1分為1%～25%；2分為26%～50%；3分為51%～75%；4分為76%～100%；細胞的染色強度標準為：0分為無色；1分為淡黃色；2分為黃色；3分為棕黃色，以二者乘積為最終判定標準，1分以上為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件包處理。用卡方檢驗，兩因子與各因素相關(guān)性采用秩相關(guān)；均以α=0.05作為檢驗水準，P<0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

乳腺癌中KLF5陽性表達率為82.22%，高于正常乳腺的17.78%；組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。KLF5的表達與癌組織大小、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉(zhuǎn)移以及腫瘤TNM分期有關(guān)(P<0.05)；與患者的性別、發(fā)病年齡、病理學(xué)類型無關(guān)(P>0.05)。見表2。

表1 乳腺癌及正常乳腺中KLF5表達情況(n=45)

表2 KLF5的表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

KLF5的表達與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小和臨床分期均有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

乳腺癌中FBXW7蛋白陽性表達為53.33%，低于正常乳腺中的100.00%；組間差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。FBXW7的表達與癌組織的大小、瘤體組織分化程度、病變淋巴轉(zhuǎn)移以及腫瘤TNM分期有關(guān)(均P<0.05)；與患者的性別、發(fā)病年齡、病理學(xué)類型無關(guān)(P>0.05)。見表4。

表3 乳腺癌及正常乳腺中FBXW7表達情況(n=45)

表4 FBXW7表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

FBXW7的表達與組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫塊大小和臨床分期均有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

FBXW7(F框/WD-40域蛋白7)是一種近年來新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，很多學(xué)著在乳癌、卵巢癌、胰腺癌、直腸癌中都發(fā)現(xiàn)FBXW7的突變。并發(fā)現(xiàn)FBXW7通過介導(dǎo)泛素蛋白酶體途徑降解cyclinE蛋白、c-myc、c-jun、Notch、MCL1、KLF5和c-myb等多種癌蛋白[4～8]，在癌細胞的發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及規(guī)律性變化的過程中能夠起到一定的控制作用。他在很多腫瘤細胞內(nèi)里表達幾乎都是上升的，這是癌細胞以及潛在的癌細胞的共同結(jié)果。FBWX7與泛素連接酶E3結(jié)合作用在乳腺癌中，并且發(fā)揮生物學(xué)功能。FBWX7、SKP1/CUL1和RBX1形成SCF復(fù)合物后能夠形成泛素連接酶，并且發(fā)揮生物學(xué)功能。Mutsuko Ibusuki等[9]等人在研究FBXW7基因及其蛋白在187例乳腺癌患者中的表達水平時發(fā)現(xiàn)，在組織學(xué)分化高、ER(-)、PgP(-)的患者中，F(xiàn)BXW7mRNA的表達明顯受到抑制，這也支持FBXW7mRNA影響腫瘤細胞的細胞周期的觀點，按形態(tài)學(xué)對腫瘤細胞胞質(zhì)進行評價時，組織學(xué)分級可以反映DNA的合成和有絲分裂[10]。在激素受體陰性的亞組中,FBXW7mRNA低表達。另外,FBXW7mRNA低表達還與Ki-67有這密切的關(guān)系。Yu等認為FBXW7第二內(nèi)含子中的純和單核苷酸多態(tài)性與ER(-)和臨床分期較高的乳腺癌患者相關(guān)[2，11]。雖然現(xiàn)在還沒有更多的有關(guān)FBXW7和激素受體之間關(guān)系的報道,但在高分化類型乳腺癌患者中,有可能基因異常有增強癌細胞侵襲能力，在激素受體陰性的患者里。雖然FBXW7蛋白與mRNA的表達水平正相關(guān),并能明確的反應(yīng)患者預(yù)后,但它的臨床意義還是受到一定的束縛。為進一步了解FBXW7蛋白水平表達情況，本研究選擇了乳腺正常組織、乳腺癌組織，采用免疫組化的方法進行檢測，并結(jié)合臨床特征進行分析，結(jié)果回報：乳腺正常組織中FBXW7高表達，乳腺癌組織中FBXW7低表達，而且與乳腺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)。FBXW7與患者歲數(shù)、病理類型無關(guān)。由此推測出癌組織的惡性程度、轉(zhuǎn)移情況都與FBXW7有這密切相關(guān)，有可能成為新的乳腺癌患者判定預(yù)后的新標準。

KLF 家族實質(zhì)上可以說是蛋白質(zhì)家族，它的家族中的因子基本結(jié)構(gòu)域差不多，每個結(jié)構(gòu)域的主要作用幾乎都是調(diào)節(jié)因子轉(zhuǎn)錄的，它們含有特定的鋅結(jié)構(gòu)，鋅結(jié)構(gòu)在表達過程中起了承上啟下作用，KLF家族共同特點作用在加入與調(diào)控生物內(nèi)主要的細胞的生長及病理生理過程。國內(nèi)外學(xué)者研究KLF家族與很多腫瘤都存在著一定關(guān)系，并且KLF5還在許多腫瘤(結(jié)腸、前列腺、胰腺、肺、乳腺等)的發(fā)生進展過程中都發(fā)揮了重要作用。大量研究結(jié)果表明，KLF5參加激活了PKC、MAPK通路等很多細胞增殖信號，并調(diào)節(jié)了許多細胞周期蛋白的表達，例如上調(diào)細胞周期正調(diào)節(jié)本周蛋白 D1,下調(diào)細胞周期 P21、P15 并加速了細胞分裂增殖以及細胞周期進程。KLF5也主動參加LPS介導(dǎo)的腸道腺上皮細胞炎癥病理反應(yīng)[12]。在胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌等[13]胃腸道腫瘤等其他腫瘤組織中，均可檢測到 KLF5 表達水平增高。然而在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中KLF5 的表達尚不十分清楚。因此對 KLF5在乳腺癌等其他相關(guān)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展以及治療、預(yù)測預(yù)后等方面的研究逐漸廣泛[3]。

本研究結(jié)果顯示，正常乳腺全部表達為陽性，而45例乳腺癌中有24例FBXW7蛋白的表達為陽性，考慮可能為FBXW7基因突變或缺失所致，或FBXW7蛋白合成減少或分解旺盛所致。而KLF5蛋白在乳腺癌中陽性表達率為82.22%，明顯高于正常組的17.78%，說明KLF5蛋白參與乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展。KLF5在乳腺癌中表達明顯增強，F(xiàn)BXW7在乳腺癌中表達明顯降低，提示在乳腺癌發(fā)生中KLF5和FBXW7發(fā)揮一定作用，對FBXW7、KLF5的檢測可作為重要生物學(xué)指標。乳腺癌在產(chǎn)生時是取決癌細胞的增長和細胞死亡之間的平衡性喪失導(dǎo)致的。因此當乳腺癌組織出現(xiàn)細胞生長和死亡失去控制的時候，或者細胞出現(xiàn)突變等，則表示細胞生存狀態(tài)高于細胞的死亡率，則表明癌細胞有所發(fā)展?？梢愿鶕?jù)FBXW7、KLF5的檢測判斷腫瘤惡性程度情況。

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1.黑龍江省青年基金項目，編號：QC2013C013；2.佳木斯大學(xué)青年基金項目，編號：sq2013-013。

王新(1962～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

周昱(1969～)男，黑龍江集賢人，學(xué)士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:zhouyu731@126.com。

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1008-0104(2016)06-0049-03

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