骨金散治療糖皮質激素性骨質疏松的實驗研究

宋麗娜，陸洪軍，趙錦程

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學基礎醫(yī)學院，黑龍江 佳木斯 154007)

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骨金散治療糖皮質激素性骨質疏松的實驗研究

宋麗娜1，陸洪軍1，趙錦程2

(1.佳木斯大學附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003；2.佳木斯大學基礎醫(yī)學院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：研究骨金散治療糖皮質激素性骨質疏松的效果及可能的作用機制。方法：選擇3.5月齡健康清潔級雌性SD大鼠60只，隨機分為正常對照組(A組)，模型對照組(B組)，低劑量治療組(C組)和高劑量治療組(D組)，每組15只，除A組外其余各組大鼠在左后肢臀部肌肉注射地塞米松2.5 mg/kg·d建立糖皮質激素骨質疏松模型，連續(xù)9周，低鈣飼料正常喂養(yǎng)。A組大鼠給予全價飼料喂養(yǎng)。3周后C、D兩組大鼠開始分別按1.8g/kg和3.6g/kg的骨金散配比l mL/100g生理鹽水灌服，1次/d，A、B兩組等量生理鹽水灌服，連續(xù)服用9周。檢測大鼠體質量、骨密度、括血清鈣(Ca)、磷(P)、血清雌二醇(E2)、血清骨鈣素(Osteocalcin或Bone Gla Protein，OC或BGP、血清降鈣素：(Calcitonin，CT)、血清抗酒石酸酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRACP)。結果：實驗前與實驗后各組大鼠體質量均有增加， A組平均體質量增加最明顯， B、C、D三組體質量增加幅度依次為D>C>B，表明糖皮質激素性骨質疏松大鼠模型建立成功，影響大鼠體質量增加，骨金散治療可以緩解大鼠體質量緩慢，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。各組大鼠股骨骨密度測定差異顯著，B、C、D組大鼠骨密度均低于A組，但應用骨金散治療的C、D兩組骨密度高于B組，且使用高劑量骨金散的D組更接近A組值，可見，中藥骨金散對提高糖皮質激素性骨質疏松大鼠的骨密度有效，且隨著劑量增加療效增強。糖皮質激素使B、C、D組大鼠血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成標志物骨鈣素BGP、降鈣素CT均有所下降，但C、D組在給藥骨金散后各指標數值明顯提升，且隨著劑量的增加提升明顯，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。但血清P含量變化無顯著差異(P>0.05)，血清骨吸收標志物抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP值在注射糖皮質激素后明顯升高，但給藥骨金散后數值明顯下降，且隨劑量增加，效果明顯。組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論：骨金散治療糖皮質激素性骨質疏松效果顯著，值得逐步轉向臨床，且骨金散可通過改善骨代謝生化指標，增加骨含量，拮抗骨丟失，達到防治骨質疏松的作用，這可能與其治療骨質疏松的機制有關。

骨金散；骨代謝；骨密度；糖皮質激素性骨質疏松癥(GIOP)

糖皮質激素性骨質疏松癥(glucocorticoid induced osteoporosis，GIOP)是一種因為內源或外源糖皮質激素導致的代謝性骨病[1,2]。長期使用糖皮質激素治療的患者一半以上都會發(fā)生骨質疏松癥狀，表現為骨量減少、骨微結構破壞、強度降低、骨折風險增加等。GIOP導致的骨折愈合困難，致殘率高[3]。因此，尋找預防和治療該病癥的藥物是目前醫(yī)學研究的重要課題，本研究以GIOP大鼠為研究對象，采用中藥骨金散治療，觀察骨金散的療效以及探討其作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

選擇3.5月齡健康清潔級雌性SD大鼠60只，體質量200～250g，平均(230±20)g，所有SD大鼠均在恒溫、恒濕的條件下喂養(yǎng)，實驗室溫度恒定為(24±1)℃，相對濕度50%～70% ，保持環(huán)境清潔，每12h黑白交替光照，自主進食飼料和自來水。實驗藥物為天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司購買的地塞米松磷酸鈉注射液(批號:1101264)；佳木斯大學第一附屬醫(yī)院購買骨金散，其主要成分為三七、血蝎、乳香、沒藥、龍骨、方蟲、桂枝等十余味中藥材，低劑量組用量為1.8 g/kg體質量，高劑量組用量為3.6g/kg體質量。實驗儀器為上海江萊生物科技有限公司的雌激素(E2)酶聯(lián)免疫吸附試劑盒，美國NORLAND的XR-2626型雙能X線骨密度儀，中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心的骨鈣素、降鈣素試劑盒，美國Harris的R-404A低溫冰箱，北京醫(yī)用離心機廠的LDZ4型微量離心機等[4,5]。

1.2 實驗方法

所有實驗大鼠依據隨機數字表法分為正常對照組(A組)，模型對照組(B組)，低劑量治療組(C組)和高劑量治療組(D組)，每組15只。除A組外其余各組大鼠在左后肢臀部肌肉注射地塞米松2.5mg/kg·d建立糖皮質激素骨質疏松模型，連續(xù)9周，低鈣飼料正常喂養(yǎng)。A組大鼠給予全價飼料喂養(yǎng)。3周后C、D兩組大鼠開始分別按1.8g/kg和3.6g/kg的骨金散配比1mL/100g生理鹽水灌服，1次/d，A、B兩組等量生理鹽水灌服，連續(xù)服用9周。于取材前24h終止給藥，各組大鼠麻醉摘眼球取血，收集血液離心(3000 r/min，10min)，分離血清，-80℃冰箱凍存?zhèn)涔巧笜藴y定，處死大鼠；取大鼠右側股骨剔除肌肉等組織，用生理鹽水紗布包裹，浸透于生理鹽水中-20℃冰箱保存，備作骨密度測定[6,7]。

1.3 檢測指標

實驗前后稱量大鼠體質量，對大鼠離體股骨上1/3處骨采用雙能X線骨密度儀測定骨密度，實驗結果骨密度采用單位面積內的骨礦物質含有量表示(g/cm2)[8,9]。取血清進行下列血生化指標檢測，具體檢測步驟按試劑盒說明書進行，包括血清鈣(Ca)、磷(P)、血清雌二醇(E2)、血清骨鈣素(Osteocalcin或Bone Gla Protein，OC或BGP、血清降鈣素：(Calcitonin，CT)、血清抗酒石酸酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRACP)。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 各組大鼠體質量及骨密度變化

實驗前與實驗后各組大鼠體質量均有增加， A組平均體質量增加最明顯， B、C、D三組體質量增加幅度依次為D>C>B，表明GIOP大鼠模型建立成功，影響大鼠體質量增加，骨金散治療可以緩解大鼠體質量緩慢，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。各組大鼠股骨骨密度測定差異顯著，B、C、D組大鼠骨密度均低于A組，但應用骨金散治療的C、D兩組骨密度高于B組，且使用高劑量骨金散的D組更接近A組值，可見，中藥骨金散對提高GIOP大鼠的骨密度有效，且隨著劑量增加療效增強。見表1。

表1 各組大鼠體質量及骨密度變化±s，n=15)

2.2 各組大鼠骨生化指標的變化

糖皮質激素使B、C、D組大鼠血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成標志物骨鈣素BGP、降鈣素CT均有所下降，但C、D組在給藥骨金散后各指標數值明顯提升，且隨著劑量的增加提升明顯，組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。但血清P含量變化無顯著差異(P>0.05)，血清骨吸收標志物抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP值在注射糖皮質激素后明顯升高，但給藥骨金散后數值明顯下降，且隨劑量增加，效果明顯。組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠骨生化指標的變化±s，n=15)

3 討論

骨質疏松癥(osteoporosis)是一種骨強度受損、骨密度下降、骨的微細結構破壞的系統(tǒng)性骨病，骨質疏松患者骨折的發(fā)生率和危險性都會增加，且骨折不易愈合，易反復骨折，致殘率極高。近年骨質疏松的發(fā)病率明顯上升，已躍居世界常見病第六位，這可能與飲食習慣及食品安全有關。骨質疏松分原發(fā)性和繼發(fā)性，繼發(fā)性骨質疏松多為疾病或藥物副反應引起，GIOP使發(fā)病率較高的繼發(fā)性骨質疏松，系長期服用糖皮質激素類藥物引起機體代謝異常，導致骨流失，骨密度下降等[10]。本研究為應用中藥骨金散對GIOP進行治療，觀察療效及探討可能的作用機制，通過對實驗大鼠骨密度、血清Ca、血清P、血清雌二醇E2、血清骨形成標志物骨鈣素BGP、降鈣素CT、抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP等指標的檢測發(fā)現骨金散可以使GIOP大鼠的骨密度、血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成標志物骨鈣素BGP、降鈣素CT含量增加，使抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP含量下降，且隨骨金散劑量變大這種作用在增強，因此可以判斷骨金散治療GIOP效果顯著，值得逐步轉向臨床，且骨金散可通過改善骨代謝生化指標，增加骨含量，拮抗骨丟失，達到防治骨質疏松的作用，這可能與其治療骨質疏松的機制有關。

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黑龍江省教育廳科學技術研究項目，編號：12541820。

宋麗娜(1973～)女，黑龍江佳木斯人，本科，主管護師。

趙錦程(1964～)男，黑龍江伊春人，碩士，教授，碩士研究生導師。E-mail：zhjch1110@163.com。

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1008-0104(2016)06-0029-02

2016-06-19)