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    一例奶牛子宮內(nèi)膜炎的細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

    2016-12-26 02:41:48傅曉雪
    畜牧獸醫(yī)科技信息 2016年12期
    關(guān)鍵詞:新霉素氟苯尼試紙

    傅曉雪

    (肇慶農(nóng)業(yè)學(xué)校,廣東 肇慶 526000)

    一例奶牛子宮內(nèi)膜炎的細(xì)菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

    傅曉雪

    (肇慶農(nóng)業(yè)學(xué)校,廣東肇慶526000)

    從廣東省肇慶市某奶牛場采集3頭患有子宮內(nèi)膜炎的奶牛的子宮分泌物,通過細(xì)菌培養(yǎng)鏡檢及生化試驗(yàn)鑒定,初步篩查其主要致病菌為金黃色葡萄球菌。對其進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果表明新霉素及氟苯尼考具有較好的抑菌作用,可作為此次治療的選擇參考。

    奶牛;子宮內(nèi)膜炎;病原菌;藥敏試驗(yàn)

    子宮內(nèi)膜炎為奶牛常見疾病,是造成不孕癥的重要原因之一,而奶牛不孕癥又已成為一個(gè)主要的世界經(jīng)濟(jì)問題。本病若不及時(shí)治療,往往會(huì)導(dǎo)致奶牛不育而被淘汰。每年國內(nèi)外奶牛不孕癥所造成的經(jīng)濟(jì)損失都相當(dāng)大。奶牛子宮內(nèi)膜炎的直接病因是病原微生物的感染,據(jù)資料報(bào)道,已發(fā)現(xiàn)引起子宮內(nèi)膜炎的病原微生物包括細(xì)菌、真菌、支原體、霉形體、病毒及寄生蟲等,而病原性細(xì)菌在奶牛子宮內(nèi)膜炎的發(fā)生中起著最重要的作用。

    1 材料與方法

    1.1材料

    (1)主要儀器及設(shè)備。高壓滅菌鍋、冰箱、DHU-9246A型電熱恒溫培養(yǎng)箱、SW-CJ-JBu型單人單面無菌操作臺(tái)等。

    (2)培養(yǎng)基與試劑。微量生化鑒定管:北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司

    常用藥敏試紙:杭州天和微生物試劑有限責(zé)任公司。自制藥敏試紙。

    (3)病例選擇。根據(jù)奶牛臨床型子宮內(nèi)膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn),選自奶牛場病牛3頭,臨床表現(xiàn)為精神沉郁,體溫稍升高,食欲弱,產(chǎn)奶量下降,從陰門流出少量黏性或膿性分泌物,帶有污紅色,陰道開殖器打開引導(dǎo)檢查,子宮頸稍張開,從子宮頸內(nèi)有分泌物排出。

    1.2方法

    (1)病料采取。病牛陰戶用溫水清洗,0.2%新潔爾滅消毒滅菌后,按直腸把握法將事先已裝有輸精管的輸精槍插入子宮內(nèi),粘取子宮分泌物放入無菌試管中,密封后盡快送回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)鑒定。

    (2)細(xì)菌培養(yǎng)鑒定。采取病牛的子宮內(nèi)分泌物,進(jìn)行涂片或觸片用革蘭氏染色法鏡檢,觀察細(xì)菌形態(tài),同時(shí)接種于普通瓊脂培養(yǎng)基、血培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上,37℃恒溫培養(yǎng)24~48h,對細(xì)菌生長情況及菌落特征進(jìn)行觀察,并染色鏡檢。挑取單個(gè)菌落接種于鞋面培養(yǎng)基上,普通肉湯中37℃恒溫培養(yǎng)24~48h,再進(jìn)行涂片染色鏡檢,若為純培養(yǎng),則置于4℃的冰箱中保持備用。

    另取已純化的試驗(yàn)菌種,分別接種于葡萄糖半固體培養(yǎng)基、麥芽糖、蔗糖、尿素硝酸鹽,甘露醇等微量管中以及葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中,置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

    (3)藥敏試驗(yàn)。將上述分離病原菌在無菌條件下用涂布棒均勻再普通瓊脂培養(yǎng)基上,將自制藥敏試紙片(頭孢呋辛、先鋒霉素V、氧氟沙星、泰樂菌素、氟苯尼考、恩諾沙星、新生霉素、環(huán)丙沙星)以及公司生產(chǎn)的青霉素、慶大霉素、紅霉素、新霉素試紙等藥敏試紙進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn),置于置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)24~48h,根據(jù)其抑菌圈直徑的大小判定其結(jié)果。抑菌圈直徑小于10mm為耐藥,10~15mm為中度敏感,15mm以上為高度敏感。

    2 結(jié)果

    2.1細(xì)菌鑒定結(jié)果

    通過細(xì)菌分離培養(yǎng)、革蘭氏染色鏡檢及生化試驗(yàn)鑒定,判斷該致病菌主要為金黃色葡萄球菌。

    2.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    本試驗(yàn)應(yīng)用常用的12種藥敏試紙測定,結(jié)果見表1。

    表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該菌對新霉素及氟苯尼考最敏感,先鋒霉素V、環(huán)丙沙星、氧氟沙星對該菌高度敏感,而該菌對慶大霉素、新生霉素中度敏感,對其他耐藥或不敏感。因此,新霉素及氟苯尼考可作為此次治療的選擇參考。

    3 討論

    3.1感染細(xì)菌

    正常奶牛子宮是一個(gè)相對無菌的環(huán)境,自凈能力很強(qiáng),只有受到強(qiáng)烈機(jī)械刺激、抵抗力下降和微生物感染時(shí)才會(huì)有大量微生物滋生,引起子宮內(nèi)膜炎。據(jù)報(bào)道,產(chǎn)后2周子宮受細(xì)菌污染極為常見,隨后多數(shù)自動(dòng)清除。本實(shí)驗(yàn)中,子宮受到單一菌金黃色葡萄球菌的感染比例較高,這可能是由于我們的采樣期大部分集中在產(chǎn)后2~3周的緣故。此期子宮菌由多種混合菌感染變成單一菌感染,其中金黃色葡萄球菌抑制了其他菌的生長。

    另外,該病的發(fā)生也與人為因素、營養(yǎng)因素和遺傳因素等有關(guān)。本試驗(yàn)受時(shí)間和條件的限制沒有進(jìn)行厭氧菌的分離培養(yǎng),但是不能排出尚有厭氧菌感染的可能。另外,值得注意的是本試驗(yàn)從患病奶牛實(shí)際分離到了多種細(xì)菌,但這并不一定意味著它們都是子宮內(nèi)膜炎的直接致病因子。它們中多數(shù)為環(huán)境中常見菌,有些可能只是繼發(fā)性感染。至于具體哪種或哪幾種細(xì)菌是子宮內(nèi)膜炎的直接致病菌,有待進(jìn)一步研究。

    3.2細(xì)菌對藥物的敏感性

    藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明,新霉素、氟苯尼考等藥物對幾種試驗(yàn)菌均高度敏感,可作為此次治療的首選藥物。慶大霉素等的抑菌效果較差,青霉素類亦產(chǎn)生耐藥或根本無效。我們所得的結(jié)論與其他研究者有一定的差別,這可能是由于臨床長期不合理使用抗生素,導(dǎo)致細(xì)菌對常用抗生素的耐藥性,降低了細(xì)菌對藥物的敏感性。如長期不合理使用青霉素,金黃色葡萄球菌對青霉素產(chǎn)生了耐藥性,同時(shí)對新生霉素也產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。因此,用藥時(shí)需要合理配伍,不隨意加大劑量,以免產(chǎn)生耐藥菌株,使藥物失去治療效果。為了減少細(xì)菌的抗藥性,提高治療效果,建議避免使用上述藥敏試驗(yàn)中對致病菌株耐藥或效果較差的抗生素。

    近年來,應(yīng)用子宮內(nèi)接種有益微生物及中西結(jié)合治療奶牛子宮內(nèi)膜炎等已有不少成功的報(bào)道,因此在治療時(shí)不妨考慮使用多種治療手段,起到有效治療。

    綜上所述,我們深刻體會(huì)到,藥敏試驗(yàn)對指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥具有十分重要的意義,不僅提高療效,而且可以節(jié)約藥物成本,增加效益。建議有條件的奶牛場可進(jìn)行定期的臨床藥敏試驗(yàn),有利于指導(dǎo)獸醫(yī)臨床用藥。

    [1]劉錫光.現(xiàn)代診斷微生物學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002∶101-105.

    [2]王奕峰,等.VITEK-AMS自動(dòng)微生物檢測系統(tǒng)的應(yīng)用[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué),2000,12(2):82-83.

    [3]賈杏林,等.奶牛子宮內(nèi)膜炎研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)雜志,2005,41(2):34-36.

    [4]岳春旺,等.奶牛子宮內(nèi)膜炎綜述[J].中國草食動(dòng)物,2009,24(2):44-46.

    [5]孔祥峰,等.南京某奶牛場子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志,2007,41(8):24-25.

    [6]陳志艷,等.奶牛子宮內(nèi)膜炎病原菌分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2013,4:47-48.

    10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.12.018

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