梅毒血清固定患者趨化因子受體的研究

林世莊 蘇湘川 葉挺挺 朱海元 章承中 顏美秋

梅毒血清固定患者趨化因子受體的研究

林世莊 蘇湘川 葉挺挺 朱海元 章承中 顏美秋

目的 研究梅毒血清固定患者趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，探討梅毒患者免疫功能的變化。方法 檢測梅毒血清固定患者（血清固定組）35例外周血趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3水平，并以規(guī)范治療后梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)血清轉(zhuǎn)陰者梅毒患者（轉(zhuǎn)陰組）40例及健康體檢者（健康組）35例分別作為對(duì)照。比較3組外周血趨化因子受體水平。結(jié)果 梅毒血清固定患者CCR3表達(dá)高于健康組及轉(zhuǎn)陰組，CCR5、CXCR3表達(dá)低于健康組及轉(zhuǎn)陰組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。轉(zhuǎn)陰組與健康組比較，趨化因子受體表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論 趨化因子受體在梅毒血清固定患者的發(fā)病、發(fā)展中可能起著重要作用。

梅毒 趨化因子受體 血清固定

梅毒是由蒼白密螺旋體引起的一種慢性系統(tǒng)性性傳播疾病，早期侵犯皮膚、黏膜，晚期以侵犯心血管和神經(jīng)系統(tǒng)為主。據(jù)WHO報(bào)道，全球接受正規(guī)治療的梅毒患者有數(shù)千萬，全球梅毒的年增長率為15%～20%，而我國局部地區(qū)甚至高達(dá)30%[1]。梅毒血清固定系指梅毒患者接受規(guī)范治療6～9個(gè)月后蒼白密螺旋體滴度無明顯下降或治療2年后血清反應(yīng)仍未轉(zhuǎn)陰[2]。血清固定患者臨床癥狀易反復(fù)發(fā)作，且無有效治療方法，給患者造成沉重的心理壓力。近年研究發(fā)現(xiàn)，梅毒患者癥狀復(fù)發(fā)及梅毒血清固定均與機(jī)體的免疫系統(tǒng)有很大關(guān)系。本研究通過檢測梅毒血清固定患者外周血趨化因子受體水平，進(jìn)一步從分子水平層面上分析免疫功能對(duì)梅毒病情發(fā)展的影響，以便及時(shí)根除梅毒螺旋體，及早治愈梅毒患者，減輕梅毒對(duì)患者身體和精神的損害。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選擇2010年5月至2013年8月溫嶺市第一人民醫(yī)院及臺(tái)州市立醫(yī)院皮膚性病科門診梅毒血清固定患者（血清固定組）35例（溫嶺市第一人民醫(yī)院21例，臺(tái)州市立醫(yī)院14例），其中男15例，女20例，年齡19～52（29.6±7.9）歲；初次就診時(shí)為一期梅毒3例，二期梅毒19例，潛伏期梅毒13例，血清固定時(shí)間持續(xù)1.0～6.4（2.2±0.4）年。梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)滴度1∶1者7例, 1∶2者12例，1∶4者15例，1∶8者1例。梅毒血清固定診斷標(biāo)準(zhǔn)：梅毒血清固定前均已接受規(guī)范驅(qū)梅治療，無臨床癥狀或治療后臨床癥狀消失，并經(jīng)腦脊液常規(guī)、生化及梅毒反應(yīng)素試驗(yàn)等檢測排除神經(jīng)梅毒后，梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)仍持續(xù)陽性，持續(xù)時(shí)間1年以上定為早期梅毒，2年以上定為晚期梅毒。排除標(biāo)準(zhǔn)：女性妊娠期，確診梅毒后仍有不潔性生活史者，有其他免疫系統(tǒng)疾病以及合并嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病、感染其他性病的患者。另以規(guī)范治療后梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)血清轉(zhuǎn)陰者梅毒患者（轉(zhuǎn)陰組）40例及健康體檢者（健康組）35例分別作為對(duì)照。轉(zhuǎn)陰組男17例，女23例，年齡20～49（28.4±5.2）歲。健康組男15例，女20例，年齡20～52（27.8±4.9）歲。3組對(duì)象性別、年齡差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的CD4單抗以及相應(yīng)同型對(duì)照抗體、PE標(biāo)記的CCR3單抗、CCR5單抗及相應(yīng)的同型對(duì)照PE-IgG、PE-IG2A購于eBioscience公司。APC標(biāo)記的CXCR4、CXCR3單抗以及其同型對(duì)照APC-IG2A購于Abcam公司。流式細(xì)胞儀（型號(hào)：BDFACSCALIBUR）購于BD公司。

1.2.2 檢測方法 觀察外周血CD4+T細(xì)胞趨化因子受體表達(dá)情況：流式細(xì)胞儀雙標(biāo)法檢測外周血CD4+T細(xì)胞表面CCR3、CCR5、CXCR4、CXCR3的表達(dá)。抽取空腹外周血5ml，抗凝備用。分別取用A、B、C、D、E 5個(gè)離心管，其中A管做陰性對(duì)照，B管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+PE-CCR3單抗（0.5μg），C管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+PE-CCR5單抗（0.5μg），D管加入FITCCD4單抗（0.5μg）+APC-CXCR4單抗（0.5μg），E管加入FITC-CD4單抗（0.5μg）+APC-CXCR3單抗（0.5μg）。各管分別加入100μl的新鮮抗凝全血，混勻，經(jīng)過避光孵育、裂解、離心、棄上清液后，各管加入l%多聚甲醛溶液150μl固定后，上機(jī)檢測，統(tǒng)計(jì)3組外周血CD4+T細(xì)胞CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4的表達(dá)率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示。兩兩比較方差齊者采用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊者采用Tamhane檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

3組外周血CD4+T細(xì)胞CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4表達(dá)率的比較見表1。

表1 3組外周血CD4+T細(xì)胞CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4表達(dá)率的比較（%）

由表1可見，血清固定組外周血CCR3表達(dá)高于轉(zhuǎn)陰組，CCR5、CXCR3水平低于轉(zhuǎn)陰組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=13.82、12.23、10.43，均P＜0.01）；血清固定組患者外周血CCR3表達(dá)高于健康組，CCR5、CXCR3表達(dá)低于健康組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=12.51、11.32、10.31，均P＜0.01）；轉(zhuǎn)陰組與健康組比較，外周血CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.23、1.05、1.14、1.19，均P＞0.05）。

3 討論

梅毒血清固定現(xiàn)象目前非常普遍，約占梅毒患者的15.00%～34.02%[3]。國內(nèi)外研究顯示梅毒血清固定患者體內(nèi)Th1型細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、TNF-α和IL-12的血清濃度顯著降低，低于正常對(duì)照組、梅毒未治療組和梅毒治療后陰性組，且梅毒血清固定患者體內(nèi)NK細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的吞噬殺傷能力低下，不能有效清除梅毒螺旋體[4-5]。Th1型細(xì)胞的減少使體內(nèi)Th1/Th2平衡失衡，而Th2型細(xì)胞可通過分泌細(xì)胞因子IL-10等并抑制由Th1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，造成免疫殺傷與清除能力的下降，使梅毒螺旋體逃過細(xì)胞免疫應(yīng)答的作用，引起梅毒血清抗體持續(xù)固定[6-7]。

趨化因子是一類在淋巴細(xì)胞募集過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)超家族。趨化因子受體是一類介導(dǎo)趨化因子行使功能、與G蛋白相偶聯(lián)的受體，它的表達(dá)是趨化因子發(fā)揮作用的一個(gè)重要決定因素。趨化因子及其受體能精確地調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的反應(yīng)，免疫系統(tǒng)中免疫活性細(xì)胞的動(dòng)態(tài)分布、各類細(xì)胞的分化發(fā)育、活化都受到趨化因子受體的影響和調(diào)控，在機(jī)體的生理發(fā)育及疾病的病理過程中均起著重要作用。趨化因子受體在分化的Th亞群Th1/Th2上表達(dá)不同，趨化因子及其受體在趨化T細(xì)胞的同時(shí)，還能直接或間接影響T細(xì)胞分化為Th1與Th2。趨化因子受體的類型和表達(dá)量的差異是調(diào)節(jié)Th1/ Th2活化和極化狀態(tài)的重要因素[8]。我們既往研究發(fā)現(xiàn)二期、三期梅毒患者外周血CCR3升高，CCR5下降，趨化因子受體CCR3、CCR5在梅毒患者清除體內(nèi)梅毒螺旋體的免疫反應(yīng)中可能起著重要作用[9]。本研究發(fā)現(xiàn)梅毒血清固定患者與健康受試者及梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰性的患者比較，外周血CCR3水平明顯增高，CCR5、CXCR3水平明顯降低。轉(zhuǎn)陰組與健康組比較，外周血CCR3、CCR5、CXCR3、CXCR4的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示機(jī)體的正常免疫力是梅毒血清反應(yīng)素試驗(yàn)轉(zhuǎn)陰的一個(gè)重要條件。結(jié)合CCR5、CXCR3主要表達(dá)在Th1細(xì)胞上，CCR3主要表達(dá)在Th2細(xì)胞上[10]，血清固定患者中，外周血中CCR5、CXCR3降低，CCR3升高，導(dǎo)致Th1活化不充分，Th2表達(dá)相對(duì)亢進(jìn)，Th1/Th2表達(dá)失衡，機(jī)體免疫應(yīng)答不完整，部分免疫功能低下。梅毒患者的細(xì)胞免疫狀態(tài)在梅毒的發(fā)病中起著重要的作用，細(xì)胞免疫功能低下不僅可增加感染梅毒螺旋體的機(jī)會(huì)，而且影響病情的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。梅毒患者由于免疫功能低下，不能產(chǎn)生對(duì)梅毒螺旋體的正常免疫應(yīng)答，從而使一部分梅毒螺旋體逃過了機(jī)體的細(xì)胞免疫，導(dǎo)致機(jī)體未能及時(shí)徹底清除梅毒螺旋體，致使感染進(jìn)入慢性階段，最終導(dǎo)致了血清固定的發(fā)生[11]。

Th1/Th2偏移現(xiàn)象加速了梅毒螺旋體的增殖并促進(jìn)疾病向梅毒潛伏階段及血清固定方向發(fā)展，這與感染進(jìn)入慢性階段有一定的關(guān)系，但具體機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。所以筆者認(rèn)為，趨化因子受體CCR3、CCR5、CXCR3在梅毒患者清除體內(nèi)梅毒螺旋體的免疫應(yīng)答中可能起著重要作用，提示我們對(duì)梅毒患者的治療，臨床上除采用常規(guī)的抗生素驅(qū)梅治療外，可配合免疫調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，減少梅毒血清固定的發(fā)生。

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Chemokine receptor levels in peripheral T-lymphocytes of patients with seroresistance syphilis

LINShizhuang,SUXiangchuan,YETingting，et al.Department of Dermatology,Wenling First People's Hospital,Wenling 317500,China

【 Abstract】 Objective To investigate chemokine receptors levels in peripheral T-lymphocytes of patients with seroresistance syphilis. Methods The chemokine receptors CCR3,CCR5,CXCR4,CXCR3-expressing T-lymphocytes were detected in 40 patients with seroresistance syphilis,40 patients with negative results after treatment and 35 healthy adults as controls. Results The expression of CCR3 on CD4+T cells was increased,the expression of CCR5 and CXCR3 was declined in peripheral blood of seroresistance syphilis in comparison with those of the healthy subjects and patients with negative results after treatment(P＜0.01). Conclusion The chemokine receptors may be involved in the onset,development of seroresistance syphilis.

Syphilis Chemokine receptor Seroresistance

2015-04-07）

（本文編輯：楊麗）

溫嶺市科技計(jì)劃項(xiàng)目（2012WLCA0071）

317500 溫嶺市第一人民醫(yī)院皮膚科（林世莊、葉挺挺、朱海元、章承中、顏美秋）；臺(tái)州市立醫(yī)院皮膚科（蘇湘川）