新白膜法與富漿法制備濃縮血小板的質(zhì)量比較

楊麗美

(廣州血液中心，廣東廣州510095)

新白膜法與富漿法制備濃縮血小板的質(zhì)量比較

楊麗美

(廣州血液中心，廣東廣州510095)

目的分析新白膜法與富漿法制備濃縮血小板的質(zhì)量差異。方法將采集的40袋400ml全血隨機(jī)分為兩組：新白膜法制備組和富漿法制備組，對(duì)分離出的濃縮血小板進(jìn)行紅細(xì)胞混入量、pH值、血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)比較。結(jié)果新白膜法制備組血小板計(jì)數(shù)顯著高于富漿法制備組，二者存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異（P＜0.05），兩種制備方法的紅細(xì)胞混入量及pH值無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論新白膜法分離出的濃縮血小板質(zhì)量?jī)?yōu)于富漿法分離出的濃縮血小板。

新白膜法；富漿法；濃縮血小板；質(zhì)量

血小板的功能主要是具有生理性止血和促進(jìn)凝血，血小板輸注在預(yù)防或治療血小板減少或血小板功能障礙引起的出血方面起著重要的作用[1]，常用于治療因血小板減少或血小板功能減退導(dǎo)致的有出血傾向的患者[2]。近年來(lái)，血小板的制備方法有手工法和機(jī)采法兩種，隨著全自動(dòng)血液成分分離機(jī)的推廣應(yīng)用，機(jī)采血小板的用量明顯大于手工分離濃縮血小板[3]。通過(guò)對(duì)歐美地區(qū)目前輸血狀況的考察而知，大部分地區(qū)采用手工采集的血小板[4]，而我國(guó)大部分采血機(jī)構(gòu)放棄使用手工采集血小板，對(duì)血液資源造成浪費(fèi)。同時(shí)，國(guó)內(nèi)多數(shù)血站存在機(jī)采血小板無(wú)償捐獻(xiàn)不足的現(xiàn)象，為滿足臨床用血需求，從全血中提取濃縮血小板的制備尤為重要。最近，臨床實(shí)驗(yàn)研究表明，不同的血小板制備方法可能影響其輸注后活性[5]。而制備濃縮血小板目前國(guó)內(nèi)主要有新白膜法與富漿法。為優(yōu)選制備方法，提高濃縮血小板的質(zhì)量，我們通過(guò)實(shí)驗(yàn)將新白膜法制備濃縮血小板，與富漿法制備濃縮血小板進(jìn)行質(zhì)量比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料2016年4月選擇廣州血液中心采集的獻(xiàn)血者400ml四聯(lián)袋全血，并且血液的凈重在（456±5）g者作為研究對(duì)象，共40份，分成2組。Sorval1．RE-12BP型離心機(jī)(美國(guó)杜邦公司)，r=29．72cm；Beckman Coulter血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(美國(guó)貝克曼公司)；400ml四聯(lián)采血袋(廣州費(fèi)森尤斯公司)；血小板收集二聯(lián)袋（四川南格爾生物科技有限公司），Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)(德國(guó)費(fèi)森尤斯公司)，分血夾板。

1.2 方法

1.2.1 新白膜法制備濃縮血小板(buffy coat，BC）⑴接駁：聯(lián)接血小板收集二聯(lián)袋于400ml四聯(lián)袋全血上。⑵血液的初次離心和分離：將四聯(lián)袋采集的新鮮(4~6h內(nèi))400ml全血，以2100g、12min、22℃為離心條件，進(jìn)行重離心，離心后的血袋置于Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)上，按照預(yù)先編制的程序，自動(dòng)分離含血小板的血漿，分離完畢，機(jī)器自動(dòng)將紅細(xì)胞血漿熱合封口。⑶將分離出的含血小板的血漿袋室溫懸掛靜置1~1.5h。⑷含血小板血漿進(jìn)行第2次離心和分離：將靜置后含血小板和空轉(zhuǎn)移袋的二聯(lián)袋，以400g、8min、22℃為離心條件進(jìn)行輕離心（Sorval1．RE-12BP型離心機(jī)）。⑸用分血夾板通過(guò)虹吸法緩慢分離出上層血漿（含血小板），即為制備的濃縮血小板。

1.2.2 富漿法制備濃縮血小板（platelet rich plasma，PRP）⑴血液的初次離心和分離：將四聯(lián)袋采集的新鮮(4~6h)400ml全血，以1076g、10min、22℃為離心條件，進(jìn)行輕離心，離心后的血袋置于Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)上，按照預(yù)先編制的程序，自動(dòng)分離含血小板的血漿，分離完畢，機(jī)器自動(dòng)將紅細(xì)胞、血漿熱合封口，進(jìn)行2次離心。⑵富含血小板血漿的2次離心和分離：將含血小板和空轉(zhuǎn)移袋的二聯(lián)袋，以4036g、8min、22℃為離心條件進(jìn)行重離心，離心后的二聯(lián)袋置于Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)上，按照預(yù)先編制的程序，進(jìn)行自動(dòng)分離，分去上層血漿（血小板在袋子下層中），分離完畢，機(jī)器自動(dòng)熱合含血小板的袋子，待血小板靜置1h，此袋內(nèi)容物即為制備的濃縮血小板。

1.2.3 血小板產(chǎn)品的檢測(cè)按Beckman Coulter血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀說(shuō)明書(shū)提供的方法和配套試劑對(duì)血小板產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)內(nèi)容包括：血小板計(jì)數(shù)，紅細(xì)胞混入量、pH值等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用t檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 新白膜法與富漿法手工制備血小板的方法比較（見(jiàn)表1）

表1 兩組制備血小板的方法比較

2.2 新白膜法與富漿法手工制備血小板的質(zhì)量比較（見(jiàn)表2）

表2 兩組制備血小板的質(zhì)量比較

3 討論

從表1及1.2方法中可看出，新白膜法是先重離心、用Compomat G4全血自動(dòng)分離機(jī)分離白膜層、后輕離心，分離出血小板和剩下白膜，即第一次重離心后，由G4全血自動(dòng)分離機(jī)按程序分出含血小板血漿的白膜層，血小板絕大部分集中在白膜層中，這是新白膜法血小板含量高的主要原因；第二次輕離心用分血夾板通過(guò)虹吸法緩慢分離出上層血漿（含血小板），主要是控制紅細(xì)胞的混入。富漿法是先輕離心、再重離心分離出上層血漿，剩下血小板在血小板袋子下層中，即第一次輕離心后由用G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)按程序分出含血小板血漿，因?yàn)檩p離心，只分離出部分血小板在富含血小板的血漿中，還有一小部分仍留在紅細(xì)胞中，分離不出來(lái)，這是富漿法法血小板含量較少的主要原因。

血小板計(jì)數(shù)是濃縮血小板質(zhì)量評(píng)價(jià)的一個(gè)基本指標(biāo)[6]，從表2可以看出，新白膜法分離的血小板計(jì)數(shù)明顯高于富漿法的血小板計(jì)數(shù)，兩者存在顯著性差異（P<0.05）。新白膜法分離血小板與富漿法分離血小板相比，紅細(xì)胞混入量無(wú)顯著性差異（P>0.05）。保存期末期pH值的差異無(wú)顯著性差異（P>0.05），即兩種分離法的保存期末期pH值無(wú)差異【2012年國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)：濃縮血小板質(zhì)量控制項(xiàng)目和要求：⑴儲(chǔ)存期末pH6.4~7.4。⑵血小板含量≥4.0× 1010個(gè)（來(lái)源于400ml，全血）。⑶紅細(xì)胞混入量≤2.0×109個(gè)（來(lái)源于400ml，全血）】。

近年來(lái)，來(lái)自國(guó)外不同實(shí)驗(yàn)室的研究發(fā)現(xiàn)新白膜法制備手工血小板有很大的優(yōu)勢(shì)，其中Levin[7]等發(fā)現(xiàn)，新白膜法制備的手工血小板較富漿法有優(yōu)勢(shì)，Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)分離血小板可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化，并可以降低全血保存后微聚物的形成，降低了受血者發(fā)生肺部、腦部檢塞的危險(xiǎn)性，減少非溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生[8，9]，同時(shí)Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)制備濃縮血小板，是全血離心后，將其從離心桶中輕輕取出，把主袋固定在血液分離機(jī)的懸掛板上，利用上下擠壓板，通過(guò)探頭B控制擠壓速度（先快后慢），在多達(dá)16個(gè)探測(cè)器的探頭A的探測(cè)識(shí)別血液分層界面下，把富含血小板的白膜層精確地分離開(kāi)來(lái)。另外，獨(dú)特設(shè)計(jì)的中隔板位于上下擠壓板之間，啟動(dòng)后可以非常有效地隔離白膜層-紅細(xì)胞界面，從而達(dá)到減少紅細(xì)胞混入與血小板流失的雙重效果[10]。

通過(guò)本次有限數(shù)量實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示：采用Compomat G4全自動(dòng)血液成分分離機(jī)用新白膜法制備濃縮血小板是提高血小板計(jì)數(shù)的一種優(yōu)化方法，值得血站系統(tǒng)推廣應(yīng)用，既能保證血小板質(zhì)量，又可減少血液資源浪費(fèi)，同時(shí)可緩解國(guó)內(nèi)多數(shù)血站存在機(jī)采血小板無(wú)償捐獻(xiàn)不足的現(xiàn)象，以滿足臨床用血需求[11]。

[1]趙鳳綿，王毅，張愛(ài)紅，等．白膜層方法制備的匯集血小板和單采血小板對(duì)比研究[J]．河北醫(yī)藥，2013，35(1)：123-126．

[2]Smelov V，Krylova T，et al．Azithmmyein treatment follow-up：antibacterial susceptibilityof Chlamydia trachomatis in patients with chronic prostatitis[J].Ins Antimicrob Agents，2004，23：79-82．

[3]袁小玲，李文斌，熊春梅，等．優(yōu)化手工制備濃縮血小板方法的應(yīng)用[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，28(5)：493-494．

[4]Vassallo RR，Wagner SJ，Einarson M，et al.Maintenance of in vitro properties of leukoreduced whole blood-derived pooled platelets after a 24 hour interruption of agitation[J].Transfusion，2009，49 (10)：2131-2135.

[5]Heddle NM，Blajchman MA，Meyer RM，et al．A randomized Controlled trial comparing the frequency of acute reactions to plasmaremoved platelets and prestorage WBC-reduced platelets[J]. Transfusion，2002，42（5）：556-566．

[6]秦艷蘭，劉景春，劉仁強(qiáng)，等．自動(dòng)和手工制備濃縮血小板的質(zhì)量評(píng)價(jià)[J]．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，27(1)：33-34.

[7]Levin E，Culibrk B，Gyongyossy-Issa M，et al.Implementation of buffy coat platelet component production：comparison to plateletrichplasma platelet production[J].Transfusion，2008，48(11)：2331-2337.

[8]歐陽(yáng)錫林，劉景漢，黃寧，等．懸浮紅細(xì)胞保存過(guò)程中高濃度血小板一白細(xì)胞聚合物的形成及其預(yù)防措施[J]．解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2002，27(12)：1096-1097．

[9]Li N，Goodall AH，Hjemdahl P．Efficient flow cytometric assay for platelet-leukocyte aggregates in wholeblood using fluorescence signal triggering[J]．Cytometry，1999，35(2)：154-161．

[10]趙曉霞，沈莉，李建民，等.Compomaster G4血液分離儀制備血小板質(zhì)量評(píng)估[J]．河北醫(yī)藥，2010，32(16)：2276-2277.

[11]董長(zhǎng)征，韋麗娟.兩種不同方法制備混合少白手工血小板的比較[J]．醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2008，21（10）：1024.

R457.1+2，R193.3

A

1674-1129(2016)06-0804-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.06.039

2016-07-04；

2016-11-16)