• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    HPLC法測定蘆筍莖稈中蘆丁、槲皮素及白藜蘆醇含量

    2016-12-22 02:03:19姚紅娟周長生劉秀河孫德林韓嬌霞
    生物技術(shù)進(jìn)展 2016年6期
    關(guān)鍵詞:蘆筍白藜蘆醇莖稈

    姚紅娟, 周長生, 劉秀河*, 王 君, 孫德林, 韓嬌霞

    1.齊魯工業(yè)大學(xué), 濟(jì)南 250353;2.菏澤巨鑫源食品有限公司, 山東 菏澤 274415

    ?

    HPLC法測定蘆筍莖稈中蘆丁、槲皮素及白藜蘆醇含量

    姚紅娟1, 周長生2, 劉秀河1*, 王 君1, 孫德林2, 韓嬌霞2

    1.齊魯工業(yè)大學(xué), 濟(jì)南 250353;2.菏澤巨鑫源食品有限公司, 山東 菏澤 274415

    為了建立高效液相色譜法對蘆筍莖稈中蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇含量的測定方法。采用不同方法提取蘆筍莖稈中的蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇,得出甲醇法提取蘆丁、甲醇-HCl法提取槲皮素以及乙醇法提取白藜蘆醇得率最高;確定了高效液相色譜法對3種物質(zhì)的最佳色譜條件為流動(dòng)相:蘆丁為0.2 mol/L乙酸鈉-甲醇(Me-OH∶H2O=35∶65)溶液(用磷酸調(diào)pH 2.80)、槲皮素為無水甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45,V/V),等梯度洗脫,白藜蘆醇為水和甲醇,二元線性梯度洗脫;檢測波長分別為:254 nm、360 nm和306 nm;流速:0.8 mL/min、1.0 mL/min、0.8 mL/min。通過該方法測得蘆丁、槲皮素及白藜蘆醇的平均回收率分別為:98%、97%、98%。

    蘆筍莖稈;蘆?。婚纹に?;白藜蘆醇;高效液相色譜

    蘆筍俗稱石刁柏,含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、氨基酸,具有防癌抗癌、降血壓血脂、排毒利尿、健腎、增強(qiáng)免疫力等功效[1~3],其營養(yǎng)價(jià)值和保健價(jià)值是其他蔬菜和水果的幾倍甚至幾十倍,被世界衛(wèi)生組織定為“世界十大蔬菜之首”, 已開發(fā)出蘆筍罐頭、蘆筍酒、蘆筍茶、蘆筍飲料、蘆筍調(diào)料、蘆筍藥品、蘆筍保健品等產(chǎn)品。但大量的蘆筍莖稈被當(dāng)作廢棄物丟掉,造成了資源的極大浪費(fèi)。有資料顯示,蘆筍莖稈中含有豐富的蘆丁、槲皮素等黃酮類物質(zhì)、皂苷及白藜蘆醇等。其中,蘆丁是維生素P的重要組成部分,具有增強(qiáng)血管抵抗力、降低其通透性等作用[4],同時(shí)可以祛痰、抗炎及治療糖尿病型白內(nèi)障[5]。槲皮素多以甙的形式存在,具有較好的化痰止咳功效[6],同時(shí),對于冠心病、高血壓有一定的治療作用[7]。此外,蘆筍莖稈中含有的白藜蘆醇,屬于植物體內(nèi)用于抵抗病原侵染的多酚物質(zhì),具有多種生物活性[8],除可以保護(hù)心血管系統(tǒng)、減少血小板凝集、延緩衰老外,還是預(yù)防癌癥的天然藥物[9~11]。

    近年來,國內(nèi)外對于蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇的分析方法的研究有很多,主要有紫外分光光度法、HPLC法等[12~14],但關(guān)于蘆筍莖稈中蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇的測定方法研究鮮有報(bào)道。本文采用不同的方法提取了蘆筍莖稈中的蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇等營養(yǎng)成分,并建立了HPLC測定方法,以期為建立更精確簡便的測量方法提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    實(shí)驗(yàn)材料:蘆筍莖稈來源于菏澤巨鑫源食品有限公司蘆筍基地,經(jīng)洗滌、烘干、切斷、粉碎和過篩(40目)處理,貯存于干燥器內(nèi)待用;試劑:蘆丁對照品(東京化成工業(yè)株式公社)、槲皮素對照品(SIGMA-ALDRICH)、白藜蘆醇對照品(上海同田生物對照品)、甲醇(色譜純)、乙醇、乙酸鈉、鹽酸、磷酸均為分析純,實(shí)驗(yàn)用水為二次去離子水。

    1.2 儀器與設(shè)備

    LC-20A高效液相色譜儀(日本島津),紫外檢測器;恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市友聯(lián)儀器研究所);pH計(jì)(上海凱達(dá)實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);FJ-200高速分散均質(zhì)機(jī)(上海標(biāo)本模型廠);TDL-40B臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);分析天平(上海精密儀器儀表公司)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 蘆丁的提取 精密稱取1.0 g蘆筍莖稈樣品于50 mL容量瓶中,加入40 mL甲醇,在50℃的水浴鍋中提取5 h,提取過程中每隔30 min振蕩一次,然后用甲醇定容至刻度,過0.45 μm濾膜,待測。

    1.3.2 槲皮素的提取 稱取約0.6 g蘆筍莖稈樣品,精確稱定,置于25 mL容量瓶中,先加4 mL 25% HCl溶液進(jìn)行溶解,再加入16 mL甲醇。最后將容量瓶放入65℃水浴鍋中,避光水解8 h。冷卻后,用甲醇定容至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,即得。

    1.3.3 白藜蘆醇的提取 精密稱取3 g左右的蘆筍莖稈樣品,置于100 mL離心管中,加入30 mL 60%乙醇提取液,于均質(zhì)機(jī)中提取2 min,再以3 000 r/min離心10 min,將上清液轉(zhuǎn)入50 mL容量瓶中,殘?jiān)儆?5 mL提取液提取1次,合并兩次濾液,用60%乙醇提取液定容至刻度,搖勻后,過0.45 μm有機(jī)濾膜,待測。

    1.4 色譜條件

    采用HPLC法對蘆筍莖稈中的蘆丁、槲皮素及白藜蘆醇含量進(jìn)行測定時(shí),為了更準(zhǔn)確地獲得其含量,分別選用了適合自身的色譜條件。

    1.4.1 蘆丁色譜條件 蘆丁色譜條件為紫外檢測器;色譜柱:Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱溫:50℃;流動(dòng)相:0.2 mol/L乙酸鈉-甲醇(Me-OH∶H2O=35∶65)溶液,用磷酸調(diào)pH 2.80;流速:0.8mL/min;檢測波長:254 nm;進(jìn)樣量:10 μL。

    1.4.2 槲皮素色譜條件 槲皮素色譜條件為紫外檢測器;色譜柱:Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);柱溫:30℃;流動(dòng)相:無水甲醇-0.4%磷酸溶液(55∶45,V/V);檢測波長:360 nm;流速:1 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。

    1.4.3 白藜蘆醇 白藜蘆醇的色譜條件是Agilent C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)的色譜柱;檢測波長:306 nm;柱溫:45℃;進(jìn)樣量:10 μL;流速:0.8 mL/min;梯度洗脫:前5 min流動(dòng)相B(甲醇)由35%變?yōu)?0%,5~11 min又變?yōu)?0%,11~15 min變?yōu)?00%,15~16 min由100%降為35%,16~30 min保持35%不變。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 提取方法的選擇

    目前關(guān)于提取蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇的方法有很多,但這些方法提取時(shí)間較長,效果不明顯。本文分別選取甲醇、甲醇-25%HCl及60%乙醇作為蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇的提取溶劑,與80%乙醇法和熱水浸提法提取蘆丁,甲醇法和水浸提取法提取槲皮素,堿提酸沉法和冷浸提取法提取白藜蘆醇的效果進(jìn)行了比較,結(jié)果表明(表1),蘆丁提取得率:甲醇法>80%乙醇提取法>熱水浸提法,槲皮素提取得率:甲醇-HCl法>甲醇法>水浸提取法,白藜蘆醇提取得率:60%乙醇法>堿提酸沉法>冷浸提取法。故本實(shí)驗(yàn)最終選用甲醇提取蘆筍莖稈中蘆丁,甲醇-25% HCl提取槲皮素,60%乙醇提取白藜蘆醇。

    2.2 各對照品的HPLC圖譜分析

    分別精確稱取一定量的蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇對照品,用甲醇配成一系列的濃度梯度。按照1.4色譜條件進(jìn)行測定,色譜圖見圖1~3。得到的回歸方程為:蘆丁A=31 604C-5 815.2(r=0.999 9),槲皮素A=49 234C-1 494.6(r=0.998 6),白藜蘆醇A=131 881C-27 249(r=0.998 4)。

    表1 不同提取方法提取營養(yǎng)成分的含量Table 1 The nutrients content of different extraction methods.

    注:同一列中不同字母代表差異顯著(P<0.05)。

    圖1 蘆丁對照品色譜圖Fig.1 The chromatogram of rutin standard solution.

    2.3 精密度試驗(yàn)

    分別將濃度為8 μg/mL的蘆丁對照品、4 μg/mL的槲皮素對照品和20 μg/mL的白藜蘆醇對照品按照1.4色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次,記錄各成分的保留時(shí)間及測定量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,結(jié)果如表2。3種物質(zhì)的保留時(shí)間及含量的RSD均低于3%,表明該實(shí)驗(yàn)的精密度良好。

    2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

    將按1.3方法制備的3份蘆筍莖稈樣品溶液,于1.4色譜條件下每1 h進(jìn)一次樣,每份樣液共進(jìn)樣5次,通過峰面積計(jì)算其含量,結(jié)果測得蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇的含量見表3。樣液中蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇含量的RSD均低于3%,表明樣品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

    圖2 槲皮素對照品色譜圖Fig.2 The chromatogram of quercetin standard solution.

    圖3 白藜蘆醇對照品色譜圖Fig.3 The chromatogram of resveratrol standard solution.

    對照品名稱保留時(shí)間(min)RSD%(n=5)平均含量(μg)RSD%(n=5)蘆丁11.569±0.0710.610.0783±0.00081.09槲皮素7.621±0.0700.920.0397±0.00030.76白藜蘆醇10.506±0.0600.570.1940±0.00472.44

    表3 蘆筍莖稈中各營養(yǎng)成分的穩(wěn)定性試驗(yàn)Table 3 Stability testing of nutrients in asparagus stalk.

    2.5 方法的回收率試驗(yàn)

    選取已知蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇含量的蘆筍莖稈樣品,相應(yīng)加入各對照品0.2 mg、0.011 7 mg和0.05 mg,按1.3提取方法制備樣液,每個(gè)營養(yǎng)成分的測定做5個(gè)重復(fù),通過外標(biāo)法定量測定回收率和方法的重復(fù)性,結(jié)果見表4。樣品色譜圖見圖4~6。

    結(jié)果顯示,蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇的回收率在95%~100%之間,RSD均小于2%,表明該法的回收率和精密度可滿足蘆筍莖稈中蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇含量的測定需求。

    表4 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 4 The results of the recovery experiment.

    圖4 蘆筍莖稈中蘆丁色譜圖Fig.4 The chromatogram of rutin in asparagus stems.

    圖5 蘆筍莖稈中槲皮素色譜圖Fig.5 The chromatogram of quercetin in asparagus stems.

    圖6 蘆筍莖稈中白藜蘆醇色譜圖Fig.6 The chromatogram of resveratrol in asparagus stems.

    3 討論

    蘆筍作為“蔬菜之王”,其廢棄莖稈中含有的蘆丁、槲皮素以及白藜蘆醇成分,具有維護(hù)心血管健康、抗腫瘤以及調(diào)節(jié)脂蛋白等功效。選擇有效的提取方法以及合適的檢測方法對其含量進(jìn)行測定對以后蘆筍莖稈的開發(fā)利用具有重要的意義。

    由于蘆丁、槲皮素和白藜蘆醇難溶甚至不溶于水,而易溶于有機(jī)溶劑,因此在選取樣品提取劑時(shí),綜合考慮經(jīng)濟(jì)因素和提取率問題,本實(shí)驗(yàn)分別選擇甲醇和乙醇作為提取溶劑,尤其在槲皮素提取時(shí),由于純甲醇提取得到的槲皮素純度較低,多以甙的形式存在,因此需加入25%HCl進(jìn)行酸水解[15]。

    此外,本研究建立了高效液相色譜法對蘆筍莖稈中的蘆丁、槲皮素以及白藜蘆醇含量進(jìn)行檢測分析,并對色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。在測定蘆丁含量時(shí),選取0.2 mol/L乙酸鈉-甲醇(Me-OH∶H2O=35∶65)溶液(用磷酸調(diào)pH 2.80)作為流動(dòng)相,較朱立華等[16]采用甲醇-磷酸(60∶40,V/V)為流動(dòng)相,峰型更理想。對槲皮素流動(dòng)相進(jìn)行選擇時(shí),發(fā)現(xiàn)在甲醇中加入0.4%磷酸,較劉明月等[17]以純甲醇為流動(dòng)相,更利于改善其分離度。而采用甲醇-水的梯度洗脫,與吳向陽等[9]以甲醇-水(45∶55,V/V)的等梯度洗脫相比,不僅可以提高白藜蘆醇的分離能力,還有利于改善峰型、抑制拖尾的現(xiàn)象。本方法方便、快捷,樣品回收率和精密度高,可用于蘆筍莖稈中蘆丁、槲皮素以及白藜蘆醇含量的測定。

    [1] 周鈺珊.蘆筍廢棄秸稈的資源化利用[D].杭州:浙江大學(xué),碩士學(xué)位論文,2014.

    [2] Tabar A I, Alvarez-Puebla M J, Gomez B,etal.. Diversity of asparagus allergy: Clinical and immunological features [J]. Clin. Exp. Allergy, 2004, 34:131-136.

    [3] Suzanne H. Asparagus [J].Better Nutr., 2005:22-23.

    [4] 賈冬冬,李淑芬,楊鴻玲,等. RP-HPLC法測定桑葉中的蘆丁和異槲皮苷含量[J].食品科學(xué), 2008,29(8):499-501.

    [5] 田振坤,顧媛媛,宋成貴,等.HPLC法測定鳳仙透骨草中的蘆丁、槲皮素和山奈酚的含量[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(18):106-108.

    [6] 張曉琦,陳穎怡.高效液相色譜法測定銀杏葉提取中槲皮素的含量[J].色譜,1994,12(4):302-303.

    [7] Gansans, Faris A N, Comstock A T,etal.. Quercetin prevents pro-gression of disease in elastase/LPS-exposed mice by negatively regulating MMP expression [J]. Respir. Res.,2010,11(1):131.

    [8] 楊漢榮,李來生,陳雄泉. 高效液相色譜法測定虎杖中白藜蘆醇、白藜蘆醇苷和游離大黃素[J].理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊,2008,44(3):234-236.

    [9] 吳向陽,王彩霞,笪祖林,等. HPLC法測定花生根莖葉中白藜蘆醇的含量[J].食品科學(xué),2009,30(16):240-242.

    [11] 段朝輝.中國葡萄野生種白藜蘆醇含量分析的研究[D].陜西楊凌:西北農(nóng)林科技大學(xué),碩士學(xué)位論文,2002,1-3.

    [12] 李曉芳.紫外分光光度法測定銀杏葉提取物中蘆丁含量[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2001,12(3):204.

    [13] 蔣立娣, 宣貴達(dá), 吳好好,等. 桑葉提取物中槲皮素和山萘酚的含量測定[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào),2009,36(6):705-713.

    [14] Xiang H Y, Zhou C S, Lei Q F,etal.. Determination of resveratrol in peanut root by HPLC [J]. Nat. Prod. Res. Dev., 2005,17(2):179-181.

    [15] 施 瑛,孟 花,李加祝,等.云南野櫻桃中槲皮素提取方法的研究[J].玉溪師范學(xué)院學(xué)報(bào),2013,29(8):60-63.

    [16] 朱立華,孫 萍,曹國紅,等. 反相高效液相色譜法測定蘆筍各段蘆丁的含量[J].濟(jì)南大學(xué)學(xué)報(bào),2007,21(1):53-55.

    [17] 劉明月,薛貴平,張翠雙,等. 菟絲子中槲皮素含量的高效液相色譜法測定[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2012,23(2):269-270.

    HPLC Determination of Rutin, Quercetin and Resveratrol Content in Asparagus Stems

    YAO Hong-juan1, ZHOU Chang-sheng2, LIU Xiu-he1*, WANG Jun1, SUN De-lin2, HAN Jiao-xia2

    1.QiluUniversityofTechnology,Jinan250353,China;2.HezeJuxinyuanFoodCompany,ShandongHeze274415,China

    In order to establish a HPLC method to determinate its content of rutin, quercetin and resveratrol. The study used different methods to extract rutin, quercetin and resveratrol from asparagus stems, the results showed that methanol, methanol-HCl and ethanol had the best extraction rate for rutin, quercetin and resveratrol extraction. And it chose the optimum chromatographic conditions of HPLC method: The mobile phases of rutin and quercetin were 0.2 mol/L sodium acetate-methanol (Me-OH∶H2O=35∶65) solution (pH 2.80 adjusted with phosphoric acid), anhydrous methanol-0.4% phosphoric acid solution (55∶45, V/V), isocratic elution, and resveratrol mobile phase was water and methanol, binary linear gradient elution, respectively. Their detection wavelength was 254 nm, 360 nm and 306 nm, and velocity of flow was 0.8 mL/min, 1.0 mL/min and 0.8 mL/min. The average recoveries of rutin, quercetin and resveratrol were 98%, 97% and 98%.

    asparagus stems; rutin; quercetin; resveratrol; HPLC

    2016-01-19; 接受日期:2016-05-24

    姚紅娟,碩士研究生,研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail:YQK0606@163.com。*通信作者:劉秀河,教授,研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail:liuxh661188@163.com

    10.3969/j.issn.2095-2341.2016.06.14

    猜你喜歡
    蘆筍白藜蘆醇莖稈
    綠蘆筍結(jié)出“綠筍情”
    歐洲“蘆筍季”
    中老年保健(2022年5期)2022-08-24 02:35:50
    水稻莖稈接觸物理參數(shù)測定與離散元仿真標(biāo)定
    白藜蘆醇研究進(jìn)展
    云南化工(2021年11期)2022-01-12 06:06:12
    谷子莖稈切割力學(xué)特性試驗(yàn)與分析
    施肥量與施肥頻率對紫花苜蓿莖稈直徑及長度的影響
    無公害蘆筍栽培技術(shù)
    沅江:俏蘆筍撐起大產(chǎn)業(yè)
    白藜蘆醇抑菌作用及抑菌機(jī)制研究進(jìn)展
    白藜蘆醇對紅色毛癬菌和煙曲霉菌抑菌作用比較
    精品熟女少妇av免费看| 少妇高潮的动态图| 欧美极品一区二区三区四区| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精华一区二区三区| 精品久久久久久久末码| 两个人视频免费观看高清| 天美传媒精品一区二区| 亚洲av熟女| 69av精品久久久久久| 美女内射精品一级片tv| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 男女国产视频网站| 亚洲内射少妇av| 国产一区二区在线av高清观看| 久久久精品欧美日韩精品| 国产视频首页在线观看| 舔av片在线| 一级二级三级毛片免费看| 久久综合国产亚洲精品| 亚洲av一区综合| 舔av片在线| 久久精品综合一区二区三区| 国产男人的电影天堂91| 91aial.com中文字幕在线观看| eeuss影院久久| 26uuu在线亚洲综合色| 久久国产乱子免费精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 日本午夜av视频| 久久这里只有精品中国| 少妇被粗大猛烈的视频| 免费电影在线观看免费观看| 国产高清视频在线观看网站| 麻豆国产97在线/欧美| 免费观看人在逋| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲美女视频黄频| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 26uuu在线亚洲综合色| 欧美日本亚洲视频在线播放| av在线观看视频网站免费| 国产一区二区三区av在线| 久久久久久久久大av| 日韩三级伦理在线观看| 成人特级av手机在线观看| av在线播放精品| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产亚洲av嫩草精品影院| 99久久精品国产国产毛片| 国产亚洲av嫩草精品影院| 最近2019中文字幕mv第一页| 午夜爱爱视频在线播放| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 久久99热这里只频精品6学生 | 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 最近手机中文字幕大全| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲国产色片| 亚洲精品456在线播放app| 国产久久久一区二区三区| 国产日韩欧美在线精品| 国产伦理片在线播放av一区| 久久久久国产网址| 全区人妻精品视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 亚洲欧美日韩东京热| 白带黄色成豆腐渣| 国产一级毛片七仙女欲春2| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲精品自拍成人| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久久成人免费电影| 长腿黑丝高跟| 99九九线精品视频在线观看视频| 国国产精品蜜臀av免费| 天美传媒精品一区二区| 毛片女人毛片| 最近2019中文字幕mv第一页| 高清毛片免费看| 国产午夜精品一二区理论片| 国产伦理片在线播放av一区| 中国美白少妇内射xxxbb| 国语自产精品视频在线第100页| 熟女电影av网| 波多野结衣高清无吗| 日韩精品有码人妻一区| 日韩大片免费观看网站 | 久久久久网色| 人妻系列 视频| 免费黄色在线免费观看| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产色爽女视频免费观看| 高清视频免费观看一区二区 | 国产av码专区亚洲av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 欧美日本亚洲视频在线播放| 久久这里只有精品中国| or卡值多少钱| 亚洲欧美清纯卡通| 久久久色成人| 国产麻豆成人av免费视频| 99久久人妻综合| 国产精品野战在线观看| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 又爽又黄无遮挡网站| 十八禁国产超污无遮挡网站| 看黄色毛片网站| 久久久久久久久久久免费av| 久久精品人妻少妇| 亚洲伊人久久精品综合 | 热99re8久久精品国产| 久久久久久久国产电影| 久久人妻av系列| 亚洲最大成人中文| av在线观看视频网站免费| 少妇的逼好多水| 六月丁香七月| 在线免费观看不下载黄p国产| 国产久久久一区二区三区| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久伊人网av| 国产精品久久久久久av不卡| 亚洲精品456在线播放app| 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜激情欧美在线| 晚上一个人看的免费电影| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| av在线观看视频网站免费| 听说在线观看完整版免费高清| 能在线免费观看的黄片| 国产免费又黄又爽又色| 日本免费在线观看一区| 日日撸夜夜添| 国产精品熟女久久久久浪| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国产精品1区2区在线观看.| www.色视频.com| 精品久久久久久久久av| 国产成人aa在线观看| 中文字幕制服av| 亚洲丝袜综合中文字幕| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲av.av天堂| 国产成人a∨麻豆精品| 中文字幕制服av| 亚洲成色77777| 免费av毛片视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 精品久久国产蜜桃| 插阴视频在线观看视频| 国产 一区 欧美 日韩| 免费av观看视频| 日韩精品青青久久久久久| 国产精品一及| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美高清成人免费视频www| 日本黄色视频三级网站网址| 美女大奶头视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩欧美精品免费久久| 少妇熟女欧美另类| 老女人水多毛片| 成人高潮视频无遮挡免费网站| av在线蜜桃| 男人舔女人下体高潮全视频| av在线天堂中文字幕| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 亚洲天堂国产精品一区在线| 欧美日韩国产亚洲二区| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 成人av在线播放网站| 超碰97精品在线观看| 日本一二三区视频观看| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲性久久影院| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久精品综合一区二区三区| 欧美色视频一区免费| 国产 一区 欧美 日韩| 波野结衣二区三区在线| 黄片wwwwww| 一个人免费在线观看电影| 久久精品夜色国产| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产午夜福利久久久久久| 免费电影在线观看免费观看| 一区二区三区免费毛片| 亚洲国产精品久久男人天堂| 女人久久www免费人成看片 | 晚上一个人看的免费电影| 欧美人与善性xxx| 午夜福利在线在线| 成人特级av手机在线观看| 水蜜桃什么品种好| 国产激情偷乱视频一区二区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 99久久成人亚洲精品观看| 中文资源天堂在线| 午夜福利在线在线| 激情 狠狠 欧美| 99热全是精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲国产精品专区欧美| 精品久久久久久久末码| 亚洲久久久久久中文字幕| 女人久久www免费人成看片 | 亚洲久久久久久中文字幕| 少妇高潮的动态图| 精品国产三级普通话版| 午夜亚洲福利在线播放| 婷婷色av中文字幕| 内射极品少妇av片p| 美女高潮的动态| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 黄色日韩在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产v大片淫在线免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 深夜a级毛片| 一个人免费在线观看电影| 免费看日本二区| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产一区二区在线观看日韩| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲av不卡在线观看| 看免费成人av毛片| 久久久久精品久久久久真实原创| 丝袜美腿在线中文| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 欧美激情国产日韩精品一区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 久热久热在线精品观看| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美bdsm另类| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲色图av天堂| 99久久精品热视频| 一本久久精品| 日韩视频在线欧美| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91久久精品国产一区二区三区| 久久人人爽人人片av| 亚洲无线观看免费| 少妇人妻一区二区三区视频| 深爱激情五月婷婷| 超碰97精品在线观看| 看免费成人av毛片| 精品久久久久久电影网 | 欧美三级亚洲精品| 一边亲一边摸免费视频| 免费黄色在线免费观看| 欧美日韩国产亚洲二区| eeuss影院久久| 好男人视频免费观看在线| 国产综合懂色| 日本黄大片高清| 国产精品三级大全| 国产麻豆成人av免费视频| 尾随美女入室| 亚洲成人中文字幕在线播放| 成人午夜高清在线视频| 亚洲久久久久久中文字幕| .国产精品久久| 国产成人免费观看mmmm| 成人无遮挡网站| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 全区人妻精品视频| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产v大片淫在线免费观看| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 久久久精品94久久精品| 久久人人爽人人片av| 伦精品一区二区三区| 日韩中字成人| 丰满少妇做爰视频| 一级爰片在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 久久久久久久午夜电影| 日韩一区二区三区影片| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 日本色播在线视频| 天天躁日日操中文字幕| 国产大屁股一区二区在线视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 亚洲自拍偷在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲中文字幕日韩| 有码 亚洲区| 青春草国产在线视频| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲av成人精品一二三区| 国产男人的电影天堂91| 国产av在哪里看| 精品久久久久久电影网 | 欧美极品一区二区三区四区| 国内精品一区二区在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 春色校园在线视频观看| 免费黄网站久久成人精品| 欧美激情国产日韩精品一区| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产精品精品国产色婷婷| 在线免费十八禁| 欧美97在线视频| 午夜福利网站1000一区二区三区| 亚洲av福利一区| 久久久色成人| 老女人水多毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 国产成人免费观看mmmm| 日本欧美国产在线视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 99久久人妻综合| 在线a可以看的网站| 少妇丰满av| 免费黄网站久久成人精品| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲伊人久久精品综合 | 欧美高清性xxxxhd video| 欧美最新免费一区二区三区| 美女国产视频在线观看| 久久午夜福利片| 在线播放国产精品三级| av天堂中文字幕网| 精品一区二区免费观看| 99久久精品国产国产毛片| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久欧美精品欧美久久欧美| 最近视频中文字幕2019在线8| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产免费男女视频| www.色视频.com| 国产精品熟女久久久久浪| 99热这里只有是精品50| 中文天堂在线官网| 床上黄色一级片| 免费黄色在线免费观看| 国产午夜精品一二区理论片| 亚洲真实伦在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲av电影不卡..在线观看| av福利片在线观看| 亚洲自偷自拍三级| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产成人freesex在线| 久久精品国产自在天天线| 国产精品久久久久久av不卡| 免费人成在线观看视频色| 波多野结衣高清无吗| 日本免费a在线| 青春草国产在线视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 热99在线观看视频| 亚洲精品国产av成人精品| 麻豆一二三区av精品| 久久久午夜欧美精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文在线观看免费www的网站| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 中国国产av一级| 一级av片app| 免费av不卡在线播放| 亚洲av男天堂| 老司机影院成人| 欧美人与善性xxx| 精品一区二区免费观看| 毛片一级片免费看久久久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 99久久人妻综合| 亚洲av日韩在线播放| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产精品国产三级国产专区5o | 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲欧美精品综合久久99| 免费av不卡在线播放| 日韩三级伦理在线观看| 99热全是精品| 国产高清不卡午夜福利| 亚洲国产欧美人成| 婷婷色av中文字幕| 九九在线视频观看精品| 国产精品三级大全| 精品久久久久久成人av| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 一级毛片aaaaaa免费看小| 精品人妻偷拍中文字幕| 一级毛片久久久久久久久女| 老司机福利观看| 欧美区成人在线视频| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 我要看日韩黄色一级片| 少妇人妻精品综合一区二区| 亚洲成色77777| 长腿黑丝高跟| 在现免费观看毛片| 欧美高清性xxxxhd video| 大话2 男鬼变身卡| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日本爱情动作片www.在线观看| 免费看日本二区| 成年女人看的毛片在线观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 麻豆av噜噜一区二区三区| 一级黄色大片毛片| 有码 亚洲区| 91精品国产九色| 大话2 男鬼变身卡| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 日本欧美国产在线视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲av不卡在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 亚洲18禁久久av| 国产v大片淫在线免费观看| 久久热精品热| 一区二区三区乱码不卡18| 岛国毛片在线播放| 激情 狠狠 欧美| 成人一区二区视频在线观看| 国产精品久久久久久精品电影| 最近的中文字幕免费完整| 99视频精品全部免费 在线| 精品免费久久久久久久清纯| 麻豆一二三区av精品| 国产一区亚洲一区在线观看| 欧美极品一区二区三区四区| 久久热精品热| 亚洲精品国产av成人精品| 国产毛片a区久久久久| 九九热线精品视视频播放| 亚洲在线观看片| 特大巨黑吊av在线直播| www.av在线官网国产| 久久久精品欧美日韩精品| 丝袜喷水一区| 亚洲美女视频黄频| 国产精品国产三级国产专区5o | 亚洲va在线va天堂va国产| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 97在线视频观看| 日韩视频在线欧美| 国产私拍福利视频在线观看| 中文字幕制服av| 村上凉子中文字幕在线| 久99久视频精品免费| 精品国产露脸久久av麻豆 | 我的女老师完整版在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 波多野结衣高清无吗| 成人性生交大片免费视频hd| 国产av码专区亚洲av| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美日韩国产亚洲二区| 欧美精品国产亚洲| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品成人久久久久久| 色视频www国产| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 国产亚洲av嫩草精品影院| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 亚洲av成人精品一二三区| 久热久热在线精品观看| 久久99精品国语久久久| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 午夜福利高清视频| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 级片在线观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 亚洲精品456在线播放app| 亚洲自拍偷在线| 久久精品国产亚洲网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 免费观看的影片在线观看| 在线观看66精品国产| 嫩草影院入口| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲av一区综合| 亚洲无线观看免费| 97在线视频观看| 久久这里有精品视频免费| 高清av免费在线| 日韩视频在线欧美| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 午夜福利在线观看吧| 看十八女毛片水多多多| 免费搜索国产男女视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 免费观看人在逋| 国产成人一区二区在线| 欧美性猛交黑人性爽| 国产精品野战在线观看| 九色成人免费人妻av| 一级爰片在线观看| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 在线观看一区二区三区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产精品福利在线免费观看| 精品无人区乱码1区二区| 日韩人妻高清精品专区| 精品人妻熟女av久视频| 国产爱豆传媒在线观看| 春色校园在线视频观看| 国产极品精品免费视频能看的| 五月玫瑰六月丁香| 国产大屁股一区二区在线视频| 七月丁香在线播放| av线在线观看网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产久久久一区二区三区| 久久久久久久久大av| 国产高清三级在线| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 我的女老师完整版在线观看| 午夜久久久久精精品| 免费av毛片视频| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产高清视频在线观看网站| 一级毛片aaaaaa免费看小| 亚洲av.av天堂| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 免费av毛片视频| 国产 一区 欧美 日韩| 我的女老师完整版在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲av免费在线观看| 免费观看精品视频网站| 久久久久久久久久黄片| 一级爰片在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 青春草视频在线免费观看| 亚洲国产欧美人成| 国产激情偷乱视频一区二区| 成年女人永久免费观看视频| 国产欧美日韩精品一区二区| 综合色av麻豆| av在线亚洲专区| 18禁在线播放成人免费| 国产伦在线观看视频一区| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久久国产网址| 91精品伊人久久大香线蕉| av福利片在线观看| 亚洲国产最新在线播放| 日本免费在线观看一区| 国产真实乱freesex| 日韩一本色道免费dvd| 国产亚洲一区二区精品| 免费观看a级毛片全部| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 草草在线视频免费看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲av.av天堂| 精品久久久噜噜| 国产精品一区二区三区四区久久| 青春草视频在线免费观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日本与韩国留学比较| 国产精品蜜桃在线观看| 国产成人免费观看mmmm| av专区在线播放| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲,欧美,日韩| av卡一久久| 人体艺术视频欧美日本| 精品欧美国产一区二区三| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 免费在线观看成人毛片| 亚洲国产精品sss在线观看| 免费黄网站久久成人精品| 亚洲美女视频黄频| 亚洲在线自拍视频| 麻豆国产97在线/欧美| 国产亚洲精品av在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美最新免费一区二区三区| 午夜精品在线福利| 午夜日本视频在线| 美女高潮的动态| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产综合懂色| 国产一区二区在线av高清观看| 尾随美女入室| 色播亚洲综合网| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 精品不卡国产一区二区三区| 在现免费观看毛片| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲精品456在线播放app| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国产午夜精品论理片|