丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病的防治效果研究

徐傳濤， 薛 冬， 王 川， 王李芳， 趙錦超， 屈 旭

(1.四川省煙草公司瀘州市公司， 四川 瀘州 646000；2.青島中煙種子有限責(zé)任公司， 山東 青島 266100)

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丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病的防治效果研究

徐傳濤1， 薛 冬1， 王 川1， 王李芳1， 趙錦超1， 屈 旭2*

(1.四川省煙草公司瀘州市公司， 四川 瀘州 646000；2.青島中煙種子有限責(zé)任公司， 山東 青島 266100)

通過(guò)菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌的EC50為2.19 mg·L-1。溫室盆栽試驗(yàn)表明，丁吡嗎啉600、800、1 200 mg·L-1對(duì)煙草黑脛病的防效分別為：(57.7±3.8)%、(67.7±4.8)%和(74.4±1.1)%。田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，丁吡嗎啉540、864、1 080 g·(hm2)-1灌根處理對(duì)煙草黑脛病的防效分別為(57.4±6.5)%、(66.7±4.8)% 和(71.8±2.9)%。以上研究表明，丁吡嗎啉可用于防治煙草黑脛病。

丁吡嗎啉； 煙草黑脛??； 防治效果

煙草黑脛病(Phytophthoraparasiticavar.nicotiane)是煙草生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一。1896年，Breda de Haan 在印尼爪哇煙草上首次發(fā)現(xiàn)，主要侵染煙草根和莖基部，故稱“黑脛病”，世界各主要煙區(qū)均報(bào)道過(guò)煙草黑脛病的發(fā)生。目前該病已經(jīng)遍布溫帶、亞熱帶和熱帶各煙區(qū)(朱賢朝等，2002)。該病害在我國(guó)主要產(chǎn)煙區(qū)均有不同程度的發(fā)生，其中發(fā)生較重的省(自治區(qū))有河南、山東、四川、云南，在長(zhǎng)江以南煙區(qū)由于煙草黑脛病又常與煙草青枯病混合發(fā)生，更加重了對(duì)煙草的為害。據(jù)統(tǒng)計(jì)，煙草黑脛病年發(fā)病面積約76 373 hm2，造成的產(chǎn)量損失約2 869.26 萬(wàn)kg，產(chǎn)值損失超過(guò)1.23億元，造成的經(jīng)濟(jì)損失僅次于煙草病毒病(陳瑞泰等，1997)。目前我國(guó)防治煙草黑脛病主要以化學(xué)藥劑為主,常用藥劑有甲霜靈，烯酰嗎啉(DMM)，霜霉威，甲霜靈·錳鋅等。

丁吡嗎啉(E-3-(2-氯吡啶-4)-基)-丙烯酰嗎啉)是中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、江蘇耕耘化學(xué)有限公司和中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所聯(lián)合開(kāi)發(fā)的一種具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型殺菌劑(秦維彩，2010)。有關(guān)丁吡嗎啉的抑菌譜和作用機(jī)理、作用方式已有相關(guān)的報(bào)道，丁吡嗎啉對(duì)致病疫霉(Phytophthorainfestans)、辣椒疫霉(PhytophthoracapsiciLeonian)、立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)有較好的抑菌效果(陳小霞等，2007)；溫室盆栽試驗(yàn)表明，丁吡嗎啉對(duì)番茄疫病具有很好的保護(hù)防治效果(黃雄英等，2007)；丁吡嗎啉對(duì)常見(jiàn)卵菌病害有很好的防治效果，如番茄晚疫病、黃瓜霜霉病、辣椒疫病等，還具有低毒低成本的特點(diǎn)(齊淑華等，2007)；丁吡嗎啉通過(guò)作用于線粒體復(fù)合物Ⅲ的方式，抑制辣椒疫霉的呼吸作用(李暢，2009)。為研究丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病的防治效果,尋找防治煙草黑脛病的新藥,本文開(kāi)展了丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌毒力和防效的研究, 以期為應(yīng)用丁吡嗎啉防治煙草黑脛病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

96%丁吡嗎啉原藥(Pyrimorph)，由中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院提供。96.2%烯酰嗎啉原藥(Dimethomorph)，由江蘇耕耘化學(xué)有限公司提供。供試藥劑先用二甲基亞砜溶解，再用無(wú)菌蒸餾水配成1 000 mg·L-1母液備用。

供試菌株: 采自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所即墨實(shí)驗(yàn)基地，菌株分離方法見(jiàn)參考文獻(xiàn)(方中達(dá)，1998)，經(jīng)鑒定為煙草黑脛病菌(0號(hào)小種)(Phytophtoraparasiticavar.nicotianae)，于燕麥培養(yǎng)基培養(yǎng)保存 (28 ℃,4 d)。

燕麥培養(yǎng)基：將30 g燕麥于1 000 mL蒸餾水中煮沸，過(guò)濾，加入18 g瓊脂，于120 ℃滅菌20 min。

黑脛病菌谷制備：小米谷子加水煮開(kāi)至半數(shù)谷粒呈開(kāi)花狀，裝入500 mL三角瓶，于120 ℃滅菌30 min。無(wú)菌條件下取1 cm×1 cm的黑脛病菌菌塊轉(zhuǎn)接到含有谷子的三角瓶?jī)?nèi)，28 ℃培養(yǎng)14 d備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)影響 采用菌絲生長(zhǎng)速率法，將在燕麥培養(yǎng)基上培養(yǎng)菌齡一致的黑脛病菌株，在距菌落中心等距、菌絲生長(zhǎng)均勻處用直徑5 mm的打孔器，打取菌圓餅,移到含有丁吡嗎啉或烯酰嗎啉的燕麥平板上。其中丁吡嗎啉終濃度為0、 0.5、 1、 2、 5、10、 20 mg·L-1，烯酰嗎啉終濃度為0.05、0.1、0.25、0.5、1、5 mg·L-1，每個(gè)處理重復(fù)4次。28 ℃ 黑暗條件下培養(yǎng)5 d，用(自動(dòng)菌落分析儀)測(cè)定菌落直徑，按公式(1)計(jì)算各濃度藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制率(%),DPS統(tǒng)計(jì)軟件獲得毒力回歸方程及EC50值。

(1)

1.2.2 溫室盆栽條件下丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病的防治效果 煙苗移栽到直徑10 cm，高10 cm的花盆中，用滅菌土壤、草炭與珍珠巖培養(yǎng)(V∶V∶V=2∶2∶1)，每盆1株。移栽緩苗后于根部加入菌谷10 g·株-1，將煙苗置于人工氣候室內(nèi)培養(yǎng)，白天30 ℃，黑夜28 ℃，光照∶黑暗(12 h∶12 h),相對(duì)濕度95%。，使煙苗發(fā)病。在黑脛病發(fā)病前使用藥劑對(duì)煙苗進(jìn)行灌根處理。所用藥劑為濃度分別為600、800和1 200 mg·L-1的丁吡嗎啉，對(duì)照藥劑為濃度800 mg·L-1的烯酰嗎啉，用藥量為10 mL·株-1。0、7 d各施藥一次,共計(jì)2次，每個(gè)處理10株，重復(fù)3次，14 d后調(diào)查發(fā)病情況，計(jì)算病情指數(shù)。

病級(jí)分級(jí)方法，0級(jí)：全株無(wú)病；1級(jí)：莖部病斑不超過(guò)莖圍的三分之一，個(gè)別葉片萎蔫；3級(jí)：莖部病斑不超過(guò)莖圍的二分之一，或半數(shù)以下葉片輕度凋萎，或下部少數(shù)葉片出現(xiàn)病斑；5級(jí)：莖部病斑超過(guò)莖圍的二分之一，或半數(shù)以上葉片輕度凋萎；7級(jí)：莖部病斑環(huán)繞莖圍，或三分之二以上葉片凋萎；9級(jí)：病株全部葉片凋萎或枯死。

1.2.3 田間防治效果 供試藥劑：21%丁吡嗎啉油懸浮劑A(實(shí)驗(yàn)室自制), 50%烯酰嗎啉可濕性粉劑B(巴斯夫歐洲有限公司)。藥劑使用劑量,A1為21%丁吡嗎啉油懸浮劑540 g·(hm2)-1，A2為21%丁吡嗎啉油懸浮劑864 g·(hm2)-1，A3為21%丁吡嗎啉油懸浮劑1 080 g·(hm2)-1；B為50%烯酰嗎啉可濕性粉劑300 g·(hm2)-1； CK為清水。

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所即墨實(shí)驗(yàn)基地?zé)煵莺诿劜〔∑浴?/p>

供試品種：小黃金

于煙草黑脛病發(fā)病前進(jìn)行灌根處理，0、7 d各施藥一次，50 mL·株-1。小區(qū)面積30 m2，隨機(jī)排列，重復(fù)4次。

藥效調(diào)查：第二次藥后14 d調(diào)查1次，記錄各煙株的病級(jí)，計(jì)算病情指數(shù)和防治效果，防治效果采用新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析

調(diào)查方法為：采用五點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)調(diào)查10株，記錄調(diào)查總株數(shù)及各級(jí)病株數(shù)，病級(jí)分級(jí)方法與溫室相同(中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所,2004)。

2 結(jié)果與分析

2.1 對(duì)煙草黑脛病菌菌絲的抑制效果

丁吡嗎啉、烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌菌絲的抑制效果見(jiàn)表1。室內(nèi)抑菌試驗(yàn)表明，丁吡嗎啉、烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌絲生長(zhǎng)抑制的EC50分別為2.19、1.32 mg·L-1。丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)抑制的EC50大于烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌菌絲生長(zhǎng)速率抑制的EC50值，表明在離體培養(yǎng)基培養(yǎng)條件下，丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌絲生長(zhǎng)的抑制作用低于對(duì)照藥劑烯酰嗎啉。

表1 丁吡嗎啉、烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌絲生長(zhǎng)抑制

Table 1 Inhibting of mycelial growth of tobacco black shank by Pyrimorph and Dimethomorph

藥劑名稱回歸方程EC50/mg·L-1相關(guān)系數(shù)r丁吡嗎啉Y=4.3457+1.9213X2.190.99烯酰嗎啉Y=4.7788+1.8465X1.320.96

2.2 溫室盆栽試驗(yàn)

溫室盆栽試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，丁吡嗎啉600、800和1 200 mg·L-1對(duì)煙草黑脛病防治效果分別為(57.7±3.8)%、(67.7±4.8)%和(74.4±1.1)%。對(duì)照藥劑烯酰嗎啉800 mg·L-1對(duì)煙草黑脛病防治效果為(64.1±2.9)%。由試驗(yàn)結(jié)果可知，隨著藥劑濃度的增加，對(duì)煙草黑脛病的防治效果逐漸升高；溫室盆栽條件下，相同濃度的丁吡嗎啉與烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛的防效差異不顯著，說(shuō)明在活體條件下丁吡嗎啉與烯酰嗎啉防治煙草黑脛病的活性相當(dāng)。

表2 丁吡嗎啉、烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病的防治效果1)

Table 2 Control efficiency of Pyrimorph and Dimethomorph against tobacco black shank

處理藥劑濃度/mg·L-1病情指數(shù)防治效果/%CK57.8烯酰嗎啉800.020.764.1±2.9BCbc丁吡嗎啉600.024.457.7±3.8Cc丁吡嗎啉800.019.367.7±4.8ABb丁吡嗎啉1200.014.874.4±1.1Aa

1)同列數(shù)據(jù)后不同大寫字母表示差異達(dá)0.01極顯著水平，不同小寫字母表示差異達(dá)0.05顯著水平。

2.3 田間防治效果

田間防治效果見(jiàn)表3。第一次施藥后14 d ，21%丁吡嗎啉油懸浮劑540 、864、1 080 g·(hm2)-1對(duì)煙草黑脛病防效分別為(57.4±6.5)%、(64.7±5.3)%、(70.4±4.8)%，50%烯酰嗎啉可濕性粉劑375 g·(hm2)-1的防效為(62.8±3.8)%；1%極顯著水平條件下各處理間差異不顯著。藥后觀察, 各處理煙株均未出現(xiàn)藥害癥狀。說(shuō)明21%丁吡嗎啉油懸浮劑對(duì)煙草植株安全。

表3 丁吡嗎啉、烯酰嗎啉對(duì)煙草黑脛病的田間防效1)

Table 3 Field control efficiency of Pyrimorph and Dimethomorph against tobacco black shank

處理藥劑濃度/g·(hm2)-1病情指數(shù)防治效果/%CK67.6烯酰嗎啉375.025.162.8±3.8Aab丁吡嗎啉540.028.557.4±6.5Ab丁吡嗎啉864.023.664.7±5.3Aab丁吡嗎啉1080.019.870.4±4.8Aa

1)同列數(shù)據(jù)后不同大寫字母表示差異達(dá)0.01極顯著水平，不同小寫字母表示差異達(dá)0.05顯著水平。

3 結(jié)論與討論

煙草黑脛病菌是半水生的兼性腐生菌，喜高溫高濕，主要分布于土表0-5 cm處，在莖基部和根系上發(fā)生侵染，且現(xiàn)蕾前為感病階段，根據(jù)這些特點(diǎn)，結(jié)合我國(guó)煙草生產(chǎn)實(shí)際，防治煙草黑脛病的主要方法是在移栽后3-6周，采用向莖基部及土表澆灌，實(shí)施局部保護(hù)(朱賢朝等，2002)。

甲霜靈是我國(guó)目前使用最為廣泛的煙草黑脛病防治藥劑，但其對(duì)病原菌的作用位點(diǎn)單一，容易造成病原菌抗性升高(袁宗勝等，2001)。目前研究表明，連續(xù)使用甲霜靈及其復(fù)配制劑后，已導(dǎo)致煙草黑脛病菌對(duì)甲霜靈的抗藥性升高(馬國(guó)勝等，2001)。烯酰嗎啉(DMM)是一種肉桂酸類化合物的衍生物,是一種新的防治霜霉屬(Peronosporales)病原真菌病害的高效內(nèi)吸性殺菌劑,在實(shí)際應(yīng)用中, 烯酰嗎啉是繼甲霜靈之后防治卵菌病害的又一種理想的殺菌劑, 特別適合于苯酰胺類殺菌劑抗性病原個(gè)體占優(yōu)勢(shì)的田間進(jìn)行抗藥性治理。雖然烯酰嗎啉作用方式獨(dú)特, 但因其作用位點(diǎn)單一仍不可避免易使病原菌產(chǎn)生抗藥性(黃青春等，2000)。

目前烯酰嗎啉已經(jīng)成為煙草農(nóng)藥使用推薦目錄上的推薦產(chǎn)品，但由于其應(yīng)用成本較高，煙農(nóng)接受程度較低。丁吡嗎啉是我國(guó)自主研發(fā)，擁有完全自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新型殺菌劑，其作用位點(diǎn)特殊，制造成本低廉，通過(guò)丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌絲生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)、盆栽試驗(yàn)和田間試驗(yàn)表明，丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病菌具有很好的抑制效果，生產(chǎn)上可以與甲霜靈、烯酰嗎啉等藥劑交替使用，以便延緩藥劑抗性，提高防治效果。

陳瑞泰,朱賢朝,王智發(fā),等,1997.全國(guó)16個(gè)主產(chǎn)煙省(區(qū))煙草侵染性病害調(diào)研報(bào)告[J].中國(guó)煙草科學(xué),4:1-7.

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(責(zé)任編輯：陳曉雯)

Control efficiency of Pyrimorph against tobacco black shank

XU Chuan-Tao1, XUE Dong1, WANG Chuan1, WANG Li-Fang1, ZHAO Jin-Chao1, QU Xu2*

(1.LuzhouTobaccoCompany,LuZhou,Sichuan646000,China;2.QingdaoZhongyanTobaccoSeedCo.Ltd.,Qingdao,Shandong266101,China)

Pyrimorph could strongly inhibit mycelial growth of tobacco black shank, with the EC50value of 2.19 mg·L-1. The greenhouse tests showed that the control efficiency of Pyrimorph with concentration of 600, 800, 1200 mg·L-1against tobacco black shank was (57.7±3.8)%, (67.7±4.8)% and (74.4±1.1)% respectively. While the field control efficiency of Pyrimoph with concentration of 540, 864,1 080 g·(hm2)-1was (57.4±6.5)%, (66.7±4.8)% and (71.8±2.9)% respectively. The results indicated that Pyrimorph could be used to control tobacco black shank disease.

Pyrimorph； tobacco black shank； control efficiency

2016-04-06; 發(fā)表日期： 2016-10-31

徐傳濤(1984-)，碩士。研究方向：植物保護(hù)。Email：chuantao.x@gmail.com。*

S482.2

A

1001-4276-(2016)01-0078-05

徐傳濤,薛冬,王川,等,2016.丁吡嗎啉對(duì)煙草黑脛病的防治效果研究[J].武夷科學(xué)，32：78-82.