切取活檢對(duì)裸鼠舌部Tca8113移植瘤生物學(xué)行為影響的研究

劉濟(jì)遠(yuǎn) 潘劍 華成舸 吳云龍 羅正文 唐休發(fā)

1.口腔疾病研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 華西口腔醫(yī)院牙槽外科（四川大學(xué)）；2.頭頸腫瘤外科，成都 610041

切取活檢對(duì)裸鼠舌部Tca8113移植瘤生物學(xué)行為影響的研究

劉濟(jì)遠(yuǎn)1潘劍1華成舸1吳云龍1羅正文1唐休發(fā)2

1.口腔疾病研究國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 華西口腔醫(yī)院牙槽外科（四川大學(xué)）；2.頭頸腫瘤外科，成都 610041

目的 通過建立裸鼠Tca8113移植瘤切取活檢動(dòng)物模型來了解活檢對(duì)腫瘤生物學(xué)行為的影響，并初步探討其機(jī)制。方法 將裸鼠分為兩組。舌部注射Tca8113細(xì)胞，成瘤后建立切取活檢模型。觀測(cè)裸鼠生存情況，原發(fā)灶生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況，并通過免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)腫瘤原發(fā)灶核因子κB（NF-κB）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)衍生因子-1（SDF-1）、細(xì)胞增殖抗原標(biāo)記物（Ki67）表達(dá)水平及腫瘤淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移情況。結(jié)果 移植瘤成瘤率達(dá)97.92%。切取活檢后實(shí)驗(yàn)組原發(fā)灶生長速度，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率，微血管密度，NF-κB、MMP-9及SDF-1表達(dá)均高于對(duì)照組。各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)具有一定相關(guān)性。結(jié)論 切取活檢對(duì)腫瘤的生物學(xué)行為具有一定影響，可能加速原發(fā)灶的生長及轉(zhuǎn)移。

舌癌； 活檢； 腫瘤生長； 腫瘤轉(zhuǎn)移

局部切取活檢被認(rèn)為是舌癌確診的金標(biāo)準(zhǔn)，被廣泛用于臨床[1-2]。但在臨床工作中發(fā)現(xiàn)部分舌癌患者在接受切取活檢術(shù)后，反而出現(xiàn)原發(fā)灶生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移加速。近期在對(duì)頰癌的研究中，也發(fā)現(xiàn)切取活檢可以促進(jìn)癌細(xì)胞向頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移[3]，但具體機(jī)制仍不清楚。本研究通過建立裸鼠舌部人舌鱗癌細(xì)胞株（Tca8113）移植瘤切取活檢動(dòng)物模型，觀察活檢對(duì)原發(fā)灶生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的影響，并從創(chuàng)傷愈合、術(shù)后炎癥等方面探討其機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 Tca8113細(xì)胞培養(yǎng)

將人舌鱗癌細(xì)胞株Tca8113在溫度37 ℃、5%CO2飽和濕度條件下，加入10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，后置入細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)后計(jì)數(shù)。

1.2 裸鼠舌部Tca8113移植瘤成瘤及切取活檢

選取48只雄性4～6周裸鼠（四川大學(xué)動(dòng)物中心），飼養(yǎng)于SPF級(jí)無菌動(dòng)物房，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由攝食飲水。用10%水合氯醛溶液按3 mg·kg-1劑量以腹腔注射的方式將裸鼠麻醉后，于其右舌緣注入0.05 mL含有1×105個(gè)Tca8113細(xì)胞培養(yǎng)基，3周后將舌部成瘤裸鼠（共47只）完全隨機(jī)分配為2組，實(shí)驗(yàn)組24只，對(duì)照組23只。實(shí)驗(yàn)組常規(guī)消毒鋪巾，水合氯醛麻醉。切取移植瘤組織約0.2 cm×0.2 cm×0.2 cm，4%多聚甲醛保存。對(duì)照組只行腹腔注射麻醉，未行活檢手術(shù)。之后兩組均肌肉注射青霉素鈉2 000單位以預(yù)防感染。

1.3 取材及組織病理學(xué)觀察

術(shù)后1、3、5、7、14、28 d無痛處死動(dòng)物（除了術(shù)后第1天對(duì)照組為3只，其余時(shí)間點(diǎn)各組均取4只），記錄每只裸鼠體重；完整切取舌體腫瘤，測(cè)量腫瘤大小；分別取裸鼠雙側(cè)頜下淋巴結(jié)及心、肝、脾、肺、腎、腦組織，然后置于10%甲醛溶液中固定48 h，后行石蠟包埋切片，5 μm連續(xù)切片，進(jìn)行蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，光鏡下觀察是否有淋巴結(jié)及遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，并參照Takahashi的判斷標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)原發(fā)灶微血管密度（microvascular density，MVD）[4]。

1.4 原發(fā)灶生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移大體觀察

每個(gè)觀察點(diǎn)定期觀察并記錄裸鼠舌體腫瘤大小。將裸鼠舌體牽出，游標(biāo)卡尺記錄腫瘤長（a）、寬（b）、高（c），單位mm。按照公式V=∏abc/6計(jì)算并記錄腫瘤體積[5]。設(shè)定活檢手術(shù)前的原發(fā)灶體積（V1），切取活檢時(shí)取下腫瘤的體積（V2），處死動(dòng)物后腫瘤的體積（V3）。則實(shí)驗(yàn)組腫瘤原發(fā)灶體積變化可記錄為：V（實(shí)驗(yàn)）=V3+V2-V1；對(duì)照組腫瘤原發(fā)灶體積可計(jì)為：V（對(duì)照）=V3-V1。將兩組數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比并評(píng)價(jià)差異。捫診其頜下淋巴結(jié)，測(cè)量其大小。

1.5 免疫組織化學(xué)染色

應(yīng)用免疫組化染色（SP法）對(duì)腫瘤原發(fā)灶標(biāo)本行核因子κB（nuclear factor κB，NF-κB）、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、基質(zhì)衍生因子-1（stroma derived factor-1，SDF-1）、細(xì)胞增殖抗原標(biāo)記物（Ki67）染色，另對(duì)淋巴結(jié)標(biāo)本行細(xì)胞角蛋白（cytokeratin，CK）染色。NF-κB、MMP-9、SDF-1、VEGF、Ki67、CK的抗體濃度分別為1∶150、1 ∶150、1 ∶200、1 ∶150、1 ∶200、1 ∶200，PBS稀釋，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，行半定量分析[6]，分為兩方面計(jì)數(shù)，具體如下。1）對(duì)染色深淺程度的判斷：未見著色的計(jì)數(shù)為0分，淡黃色的計(jì)數(shù)為1分，棕黃色計(jì)數(shù)為2分，褐色的計(jì)數(shù)為3分。2）染色范圍的判斷：將每張切片置于光鏡下隨機(jī)選擇10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野下計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，分別計(jì)算出陽性細(xì)胞所占比率，陽性細(xì)胞率<5%計(jì)為0分，5%～25%計(jì)為1分，26%～50%計(jì)為2分，50%以上計(jì)為3分。上述兩項(xiàng)結(jié)果相加，≥1分計(jì)為陽性表達(dá)，≥4分計(jì)為高表達(dá)，＞5分計(jì)為過表達(dá)。記錄并分析兩組表達(dá)差異性及原發(fā)灶各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)相關(guān)性。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)裸鼠死亡率及原發(fā)灶生長因子表達(dá)相關(guān)性采用Fisher確切概率計(jì)算法，對(duì)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率采用卡方檢驗(yàn)，對(duì)腫瘤體積、血管密度及兩組間原發(fā)灶生長因子表達(dá)差異采用T檢驗(yàn)，P<0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 裸鼠舌部Tca8113移植瘤切取活檢動(dòng)物模型的建立

經(jīng)舌部注射后第3周48只裸鼠中有47只（97.92%）舌部成瘤（圖1、2）。

圖1 3周后裸鼠舌部成瘤 Fig 1 The Tca8113 transplanted tumor was found at 3rd week after injection

圖2 切取活檢后14 d成瘤取材情況Fig 2 The primary focus 14 days after biopsy

實(shí)驗(yàn)組術(shù)后第2周開始可見動(dòng)物消瘦，進(jìn)食困難，分別于術(shù)后第13、20及21天因惡病質(zhì)死亡各1只，而對(duì)照組于第18天死亡1只（死亡率分別為12.50%，4.35%，且死亡動(dòng)物仍取材，將其并入最近時(shí)間點(diǎn)）。經(jīng)Fisher確切概率法，P>0.05，兩組死亡率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 術(shù)后大體觀察裸鼠原發(fā)灶及淋巴結(jié)生長情況

2.2.1 原發(fā)灶生長情況 注射后第1周，裸鼠舌體形態(tài)基本正常；第2周舌體可捫及小包塊，質(zhì)韌，表面黏膜未見破潰；第3周瘤體迅速長大，最大可增至半舌。實(shí)驗(yàn)組行切取活檢術(shù)，術(shù)后分別在各觀察點(diǎn)檢測(cè)原發(fā)灶體積，第1周內(nèi)未見兩組間存在明顯差別，自第2周開始，可檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)組體積增長顯著快于對(duì)照組，至術(shù)后第3、4周，瘤體可充滿整個(gè)口腔，導(dǎo)致進(jìn)食困難（表1）。經(jīng)T檢驗(yàn)，在術(shù)后14 d及28 d，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05）。

圖3 裸鼠心、肺、肝、腎、脾、腦均未查見鱗癌轉(zhuǎn)移 HE × 100Fig 3 No metastasis was observed by slices of heart, lung, liver, kidney, spleen and brain of nude mices HE × 100

表1 兩組原發(fā)灶切取活檢后體積增長的對(duì)比Tab 1 The differences of primary focus volume growth between the experimental and control group after biopsy

2.2.2 HE染色觀察 所有裸鼠心、肝、脾、肺、腎、腦均未查見腫瘤轉(zhuǎn)移（圖3）。原發(fā)灶可見舌肌內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長，周圍與舌肌有間隙，隨著生長時(shí)間的增加，腫瘤有浸潤性生長的趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)組中24只裸鼠（48個(gè)頜下淋巴結(jié)）中有5只/5側(cè)經(jīng)HE染色可查見腫瘤轉(zhuǎn)移（圖4），而對(duì)照組中則有2只/2側(cè)查見腫瘤轉(zhuǎn)移。所有的原發(fā)灶切片均置于顯微鏡下測(cè)定MVD（表2），發(fā)現(xiàn)術(shù)后7 d和14 d，實(shí)驗(yàn)組MVD顯著高于對(duì)照組，二者間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P< 0.05）。

圖4 實(shí)驗(yàn)組裸鼠淋巴結(jié)內(nèi)見團(tuán)塊狀的腫瘤細(xì)胞，顏色較淋巴細(xì)胞淺，核分裂活躍 HE × 400 Fig 4 There were massive tumor cells observed in lymph node of experimental nude mice, the colour of tumor cell was lighter than lymphocyte, and mitotic activity HE × 400

2.3 免疫組織化學(xué)染色觀察

2.3.1 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組原發(fā)灶表達(dá)差異性 各組免疫組織化學(xué)染色結(jié)果見圖5。對(duì)腫瘤原發(fā)灶進(jìn)行檢測(cè)，NF-κB、MMP-9、SDF-1、VEGF、Ki67陽性表達(dá)均為黃色或棕色，實(shí)驗(yàn)組NF-κB、MMP-9、SDF-1表達(dá)高于對(duì)照組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而VEGF、Ki67表達(dá)無差異（表3）。

表2 兩組裸鼠腫瘤MVD的對(duì)比Tab 2 The difference of MVD between the experimental and control groups

圖5 各組原發(fā)灶免疫組織化學(xué)染色結(jié)果 免疫組織化學(xué)染色 × 400Fig 5 The results of immunohistochemistry stain of primary focus in each group immunohistochemical staining × 400

表3 兩組原發(fā)灶免疫組織化學(xué)檢測(cè)指標(biāo)的對(duì)比Ta b 3 The differences of immunohistochemical result of the two groups

2.3.2 表達(dá)相關(guān)性分析 將NF-κB、MMP-9、VEGF、SDF-1、Ki67染色結(jié)果兩兩進(jìn)行相關(guān)性分析，由于理論頻數(shù)較小，故采用Fish精確概率法計(jì)算其概率。發(fā)現(xiàn)NF-κB與MMP-9（χ2=11.1，P<0.05）、VEGF（χ2= 13.9，P<0.05）、SDF-1（χ2=10.9，P<0.05），MMP-9與SDF-1（χ2=7.6，P<0.05），VEGF與SDF-1（χ2= 10.2，P<0.05）之間具有相關(guān)關(guān)系，其表達(dá)密切相關(guān)。而Ki67與各項(xiàng)指標(biāo)均無相關(guān)性。

2.3.3 CK染色檢測(cè)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移 CK染色后，陽性細(xì)胞呈現(xiàn)棕黃色，淋巴細(xì)胞表現(xiàn)為藍(lán)色（圖6）。第2周，實(shí)驗(yàn)組淋巴結(jié)中可見染色為黃色的散在腫瘤細(xì)胞，為腫瘤的微轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)中可見散在核分裂像活躍腫瘤細(xì)胞。行CK染色后，實(shí)驗(yàn)組48枚淋巴結(jié)中可以查見腫瘤轉(zhuǎn)移5枚及微轉(zhuǎn)移8枚（共13只裸鼠被發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移），而對(duì)照組可以發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)5枚及微轉(zhuǎn)移4枚（共6只裸鼠發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移）。行卡方檢驗(yàn)后，實(shí)驗(yàn)組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率與對(duì)照組有顯著差異（χ2=4.3，P=0.04）。

圖6 各組淋巴結(jié)CK染色結(jié)果Fig 6 The results of CK stain of primary focus in each group

3 討論

切取活檢后病理診斷被認(rèn)為是腫瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。在臨床工作中可以發(fā)現(xiàn)切取活檢后腫瘤加速生長或快速出現(xiàn)頸部淋巴轉(zhuǎn)移的病例，此現(xiàn)象是由于腫瘤自身發(fā)展加速，還是由于切取活檢促進(jìn)腫瘤生長，目前尚無結(jié)論。有研究[3]表明，對(duì)倉鼠頰癌行切取手術(shù)，會(huì)促進(jìn)頸部淋巴轉(zhuǎn)移，而對(duì)其進(jìn)一步研究證實(shí)，在對(duì)倉鼠頰癌局部手術(shù)前行瘤內(nèi)注射博來霉素，可顯著降低頸淋巴轉(zhuǎn)移率[7]。而另一些研究[8]則認(rèn)為切取活檢不能促進(jìn)頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。切取活檢是否會(huì)促進(jìn)腫瘤原發(fā)灶生長及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中含有什么機(jī)制，仍有待研究。

本實(shí)驗(yàn)采取注射成瘤的方式，成瘤率可達(dá)到97.92%，相對(duì)于化學(xué)誘導(dǎo)法，其優(yōu)勢(shì)在于：成瘤成功率高于化學(xué)誘導(dǎo)法；化學(xué)誘導(dǎo)可能同時(shí)誘發(fā)其他部位腫瘤；成瘤時(shí)間短，14 d可見，而化學(xué)成瘤常需要20～30周[9]。常見裸鼠注射成瘤部位會(huì)選擇皮下或腋下成瘤，但此移植瘤可能會(huì)被形成的纖維包裹而失去侵襲及轉(zhuǎn)移性。而對(duì)于移植瘤研究的傳統(tǒng)觀點(diǎn)則認(rèn)為，腫瘤的原位移植，能夠更好地保持腫瘤本身的生物學(xué)特性[10]。舌體組織具有充足的血供，且運(yùn)動(dòng)頻繁，易促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。本實(shí)驗(yàn)將Tca8113細(xì)胞注射入裸鼠舌部，能夠高效率地形成舌癌動(dòng)物模型，并用于舌癌生物學(xué)特性的研究中。

前期建立的舌部Tca8113移植瘤裸鼠動(dòng)物模型在接受切取活檢手術(shù)14 d后，舌部原發(fā)灶體積增長顯著快于對(duì)照組。而對(duì)腫瘤原發(fā)灶HE染色切片檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，切取活檢組的MVD要顯著高于對(duì)照組，說明實(shí)驗(yàn)組原發(fā)灶的血供要好于對(duì)照組。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，切取活檢可能促進(jìn)腫瘤原發(fā)灶血管生成，從而促進(jìn)腫瘤生長。通過HE染色及CK免疫組織化學(xué)染色，證實(shí)實(shí)驗(yàn)組淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及微轉(zhuǎn)移率要高于對(duì)照組，提示切取活檢可能促進(jìn)舌癌頸淋巴轉(zhuǎn)移。

本研究采用CK作為檢測(cè)淋巴轉(zhuǎn)移的標(biāo)記物，并得出陽性結(jié)果。CK主要分布于上皮細(xì)胞，為上皮角質(zhì)細(xì)胞的主要骨架蛋白，維持上皮細(xì)胞的完整性及連續(xù)性。其具有高度的保守性和組織特異性，對(duì)上皮組織的定性具有特定的價(jià)值，作為腫瘤免疫組織化學(xué)標(biāo)記物，近期被廣泛應(yīng)用于癌的微轉(zhuǎn)移診斷[11]。

NF-κB可由炎癥因子激活，從而對(duì)腫瘤的生物學(xué)行為產(chǎn)生影響[12]。有研究[13]證實(shí)，高表達(dá)NF-κB可以上調(diào)VEGF及金屬基質(zhì)蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMPs）的表達(dá)。VEGF是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)力的促血管生成因子，也被證實(shí)可促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移的概率[14]。而其可與SDF-1協(xié)同作用，通過SDF-1/趨化因子受體4信號(hào)軸來共同促進(jìn)血管生成[15]。MMPs可以降解細(xì)胞外基質(zhì)各種蛋白成分，破壞腫瘤侵襲屏障，在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中起重要作用[16]。為探索切取活檢促進(jìn)原發(fā)灶生長及頸淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)對(duì)原發(fā)灶行NF-κB、MMP-9、VEGF、SDF-1免疫組織化學(xué)染色，發(fā)現(xiàn)除VEGF在兩組中都呈高表達(dá)外，另外3種因子在原發(fā)灶中的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組，提示切取活檢可能促進(jìn)NF-κB、MMP-9、SDF-1表達(dá)。而對(duì)上述因子表達(dá)的相關(guān)性分析提示，NF-κB表達(dá)與MMP-9，VEGF、SDF-1表達(dá)密切關(guān)聯(lián)，VEGF與SDF-1表達(dá)也存在關(guān)聯(lián)性。

根據(jù)上述結(jié)果，推測(cè)出可能機(jī)制：切取活檢可能導(dǎo)致局部創(chuàng)傷及炎癥，分泌的炎癥因子使NF-κB表達(dá)增加，從而上調(diào)VEGF及SDF-1表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)原發(fā)灶血管生成，為腫瘤的生長提供充足的血供，從而加速原發(fā)灶的生長。而另一方面，NF-κB的上調(diào)也促進(jìn)了MMP-9的分泌，破壞腫瘤的侵襲屏障，加速腫瘤的轉(zhuǎn)移。Ki67是一種與細(xì)胞增殖相關(guān)的抗原，可顯示細(xì)胞分裂的活性[17]。本實(shí)驗(yàn)中兩組原發(fā)灶Ki67表達(dá)均呈高表達(dá)且與其他因子表達(dá)無關(guān)聯(lián)，證實(shí)腫瘤細(xì)胞生長活躍。最新的研究[18]對(duì)活檢與腫瘤生長的關(guān)系提供了新的方向?；顧z確診腫瘤可能導(dǎo)致患者心理壓力增加，給患者帶來慢性壓力。研究表明慢性壓力可能通過交感神經(jīng)系統(tǒng)，促進(jìn)腫瘤內(nèi)建立新的淋巴通道，加速淋巴液的流動(dòng)，從而促進(jìn)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移，此機(jī)制可以通過β受體阻滯劑來初步抑制。

綜上所述，切取活檢可能促進(jìn)舌癌的原發(fā)灶生長及頸淋巴轉(zhuǎn)移。但在臨床工作中，切取活檢仍是腫瘤診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。針對(duì)其機(jī)制進(jìn)行預(yù)防，成為以后研究的方向。而在目前臨床工作中，針刺活檢、CT等影像學(xué)檢查，腫瘤標(biāo)志物檢查成重要的診斷方式，而術(shù)中冰凍快速活檢也不失為一種更好的替代方式。

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（本文編輯 杜冰）

Exploratory study on influence of biopsy to biological behavior of Tca8113 transplanted tumor

Liu Jiyuan1, Pan Jian1, Hua Chengge1, Wu Yunlong1, Luo Zhengwen1, Tang Xiufa2. (1. State Key Laboratory of Oral Diseases, Dept. of Oral and Maxillofacial Surgery, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, China; 2. State Key Laboratory of Oral Diseases, Dept. of Head and Neck Oncology, West China Hospital of Stomatology, Sichuan University, Chengdu 610041, China)

Supported by: Sichuan Department of Science Project (2014SZ0204). Correspondence: Tang Xiufa, E-mail: Tangxf1963@ 163.com.

Objective We established an animal model of nude mice with Tca8113 tumor and cut some tissue for biopsy. We also determined the biological behavior and mechanisms of the tumor. Methods The mice were divided into two groups randomly. Mice in both groups were injected with Tca8113 cells into their tongues. The survival condition, growth of primary focus, and metastasis were observed. Hematoxylin and eosin staining and immunohistochemistry were performed on nuclear factor κB (NF-κB), matrix metallopeptidase 9 (MMP-9), vascular endothelial growth factor (VEGF), stromal cell-derived factor 1 (SDF-1), and Ki67 to determine their distributions within the tumor. Cytokeratin staining was also performed to detect micrometastasis in the submandibular lymph nodes. Results The emerging rate of tumor was 97.92%. The weight and survival time of the experimental group were lower than that of the control group, whereas the metastasis ratio was higher. The expression of NF-κB, MMP-9, SDF-1, and MMP-9 in tumors was higher in the experimental group than that in the control group. The expression of NF-κB, MMP-9, VEGF, and SDF-1 was relevant. The microvessel density of the experimental group was higher than that in the control group. Conclusion Biopsy can affect the biological behavior of tongue tumor and can promote growth of primary focus and metastasis.

tongue cancer; biopsy; tumor growth; tumor metastasis

R 739.8

A

10.7518/hxkq.2016.06.015

2016-04-13；

2016-09-10

四川省科技廳項(xiàng)目（2014SZ0204）

劉濟(jì)遠(yuǎn)，講師，博士，E-mail：20532465@qq.com

唐休發(fā)，教授，博士，E-mail：Tangxf1963@163.com