琥珀酸索利那新對(duì)女性膀胱過度活躍癥患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及尿動(dòng)力學(xué)影響研究

黃毅 劉春曉 高虹 鄒紅東 何江波 陳定華

(1.貴陽市第四人民醫(yī)院泌尿外科，貴州 貴陽550002；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510515)

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琥珀酸索利那新對(duì)女性膀胱過度活躍癥患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及尿動(dòng)力學(xué)影響研究

黃毅1劉春曉2高虹1鄒紅東1何江波1陳定華1

(1.貴陽市第四人民醫(yī)院泌尿外科，貴州 貴陽550002；2.南方醫(yī)科大學(xué)附屬珠江醫(yī)院泌尿外科，廣東 廣州 510515)

目的 探討琥珀酸索利那新對(duì)女性膀胱過度活躍癥患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及尿動(dòng)力學(xué)影響效果。方法 選取我科收治的女性膀胱過度活躍癥患者60例，隨機(jī)分為兩組。對(duì)照組30例，予常規(guī)異搏定80 mg加生理鹽水80 mL配置的無菌溶液進(jìn)行膀胱灌注，每次保留1 h，并每15 min變換體位，2次/周，1周為1個(gè)療程，治療4個(gè)療程。實(shí)驗(yàn)組30例，予琥珀酸索利那新5 mg晚睡前口服，1周為1療程，治療4個(gè)療程。正常組30例，選取健康女性，不予任何治療手段。治療結(jié)束后，對(duì)比各組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及尿動(dòng)力學(xué)水平變化情況，并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43基因表達(dá)水平。結(jié)果 (1)經(jīng)治療，兩組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平不同程度降低，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43明顯降低(P<0.05)；(2)治療后兩組患者尿動(dòng)力學(xué)均不同程度恢復(fù)，實(shí)驗(yàn)組尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積較對(duì)照組明顯改善(P<0.05)；(3)治療后，兩組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化蛋白水平均不同程度改善，實(shí)驗(yàn)組PCR、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43、磷酸化蛋白較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)。結(jié)論 琥珀酸索利那新能夠明顯改善女性患者膀胱過度活躍癥狀，降低生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平，并抑制相關(guān)蛋白磷酸化程度，從而改善膀胱刺激癥狀，降低膀胱內(nèi)壁敏感性，改善尿動(dòng)力學(xué)水平。

琥珀酸索利那新； 女性膀胱過度活躍癥； 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43； 尿動(dòng)力學(xué)

膀胱過度活躍癥是一種常見的以尿道—膀胱功能障礙為主要表現(xiàn)的女性泌尿外科疾病[1]，尿動(dòng)力學(xué)檢查為檢測(cè)膀胱過度活躍癥的金標(biāo)準(zhǔn)?？诜晁崴骼侵委煱螂走^度活躍癥，可明顯降低生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平，從而減輕膀胱內(nèi)膜神經(jīng)突出異常興奮癥狀，并改善尿動(dòng)力學(xué)，降低殘余尿量及日排尿次數(shù)等。筆者通過觀察對(duì)比各組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平及尿動(dòng)力學(xué)狀況，并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白基因表達(dá)水平，旨在探究琥珀酸索利那新對(duì)女性膀胱過度活躍癥患者的治療效果，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年1月至2014年1月于我院以膀胱過度活躍癥為診斷住院的女性患者60例，以隨機(jī)數(shù)字表法分為實(shí)驗(yàn)組30例，平均病程(5.5±2.1)年，平均年齡(50.2±1.8)歲；對(duì)照組30例，平均病程(4.9±2.4)年，平均年齡(52.5±1.4)歲；正常組30例，平均年齡(49.9±1.9)歲。兩組患者的一般資料相仿，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中華醫(yī)學(xué)會(huì)泌尿外科分會(huì)尿控學(xué)組》[2]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，尿頻、尿急、急迫性尿失禁等癥侯，可以單獨(dú)出現(xiàn)，也可以任何復(fù)合形式出現(xiàn)；尿動(dòng)力學(xué)可見膀胱貯尿期出現(xiàn)膀胱逼尿肌不自主收縮，從而引起膀胱內(nèi)壓升高，患者感到尿意，有尿急感覺；也可以為其他形式的尿道-膀胱功能障礙；成人排尿次數(shù)達(dá)到24 h 排尿>8 次，夜間排尿>2 次，每次尿量<200 mL?；颊咦栽竻⑴c實(shí)驗(yàn)，并簽署知情同意書。方案獲得我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)并全過程跟蹤。排除標(biāo)準(zhǔn)：肝、膽嚴(yán)重疾病、惡性腫瘤、神志異?；颊?、尿路結(jié)石、梗阻等造成的膀胱刺激征者。

1.3 治療方法 對(duì)照組參照臨床用藥指南，予常規(guī)鹽酸維拉帕米緩釋片(德國 Abbott GmbH &制藥公司，注冊(cè)證號(hào)：H20080326，商品名 緩釋異搏定，0.24 g)80 mg加生理鹽水80 mL所配置的無菌溶液進(jìn)行膀胱灌注，灌注后每15 min變換體位1次，以仰臥、俯臥、左右側(cè)臥為主，每次保留1 h，膀胱容量小者可分段灌注，2次/周，1周為1療程，治療4個(gè)療程。實(shí)驗(yàn)組30例，予琥珀酸索利那新片(荷蘭 Astellas Pharma Europe B.V.生物制藥公司，國藥準(zhǔn)字J20090109，商品名 衛(wèi)喜康，5 mg)5mg晚睡前口服，正常組30例，選取健康女性，不予任何治療手段。治療結(jié)束后，對(duì)比各組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及尿動(dòng)力學(xué)水平變化情況，并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43基因表達(dá)水平。注意事項(xiàng)：治療期間禁食生冷等刺激性食物，戒煙酒，保持情緒穩(wěn)定。

1.4 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 (1)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平：治療后，采取各組患者靜脈血5～10 mL，通過生化檢驗(yàn)儀進(jìn)行化驗(yàn)，測(cè)量各組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平，記錄并比對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果。(2)尿動(dòng)力學(xué)狀況：治療前后分別囑患者飲用1 000 mL水，當(dāng)尿意最大時(shí)，測(cè)量尿動(dòng)力學(xué)各項(xiàng)參數(shù)，包括尿量、最大尿流率，采用0.9%生理鹽水灌注膀胱，檢測(cè)患者膀胱充盈感覺，并記錄殘余尿量、初始尿意容積等情況，記錄并比對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果。檢測(cè)方法：PCR擴(kuò)增反應(yīng)試驗(yàn)，采取各組患者靜脈血3 mL，加入PCV擴(kuò)容劑，通過離心機(jī)15 000 r/min離心機(jī)中離心15 min，取上清液加入0.1 mol/L pH 7.2的PBS液，后1 000 r/min離心15 min，取上清液3 μL放入PCR儀器中檢測(cè)。采用雙巢PCR擴(kuò)增反應(yīng)方法檢測(cè)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43基因表達(dá)水平，檢測(cè)所用引物由上海英駿生物有限公司合成，上游引物：TTA ATA AGTCCTA GTG TATAACT ATG AAT，下游引物：ACT ACCTGAG CAA TTCCCTG CTC TT；并應(yīng)用GAPDH管家基因作為β內(nèi)參，GAPDH內(nèi)參上游引物：AGA TCCA CAA CGGA TAC ATT，下游引物：TCC CTC AAGA TTGT CAG CAA。提取總蛋白基因并行雙巢PCR反應(yīng)，做凝膠電泳及攝影分析。用IBAS圖像分析儀對(duì)PCR雜交結(jié)果進(jìn)行光密度掃描，測(cè)得生長(zhǎng)相關(guān)蛋白基因條帶與GAPDH條帶的峰面積積分。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2方法檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)方法處理，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平 治療后兩組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平均不同程度改善，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 兩組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平比較情況

注：治療后，與對(duì)照組比較，△P<0.05。

2.2 兩組尿動(dòng)力學(xué)情況比較 治療后兩組患者尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積均不同程度恢復(fù)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 兩組尿動(dòng)力學(xué)比較情況

注：治療后，與對(duì)照組比較，△P<0.05。

2.3 各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白基因表達(dá)情況及PCR試驗(yàn)擴(kuò)增結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，各組均有不同程度的生長(zhǎng)相關(guān)蛋白基因表達(dá)，與對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白離心產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增試驗(yàn)后，試驗(yàn)樣本均顯示出不同的特異性條帶，于對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組PCR反應(yīng)結(jié)果與正常組水平接近，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖1。

表3 各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白基因表達(dá)比較情況

注：實(shí)驗(yàn)后，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。

注：M.試驗(yàn)β內(nèi)參；1.模型組 1967 bp；2.正常組 261 bp ；3.實(shí)驗(yàn)組 391 bp；4.對(duì)照組 1531 bp。圖1 各組PCR反應(yīng)擴(kuò)增結(jié)果比較

3 討 論

膀胱過度活躍癥的病因較為復(fù)雜，并因人體生理構(gòu)造多發(fā)于女性患者，是一種常見的急性尿路綜合征疾病。臨床上可見尿頻、尿急、夜尿增多、膀胱殘余量增加、尿意容積降低等表現(xiàn)為主[3]。經(jīng)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全世界尿路疾病患者中有反復(fù)發(fā)作性膀胱過度活躍癥病史的占47.2%，并呈逐年上升趨勢(shì)[4]。女性由于其尿道短粗直等特征，有高發(fā)的尿路感染疾病，容易導(dǎo)致膀胱炎癥而造成膀胱內(nèi)壁敏感性增強(qiáng)，膀胱括約肌及逼尿肌緊張度異常，從而導(dǎo)致尿動(dòng)力學(xué)改變等情況[5]。并且多數(shù)膀胱過度活躍癥患者由膀胱感染等尿路刺激征所引起，臨床治療后復(fù)發(fā)幾率較高，且藥物灌注膀胱治療方法對(duì)患者影響較大、痛苦較重，往往療效不理想。目前主要應(yīng)用琥珀酸索利那新口服，其可明顯降低機(jī)體生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平[6]。研究[7]證實(shí)，其蛋白為神經(jīng)突出激發(fā)沖動(dòng)及增殖修復(fù)的主要引物。通過降低相關(guān)蛋白水平，抑制蛋白基因在體內(nèi)的合成及表達(dá)，可降低膀胱內(nèi)壁神經(jīng)細(xì)胞及肌細(xì)胞的沖動(dòng)敏感性，降低貯尿期患者逼尿肌異常收縮，并加強(qiáng)尿路括約肌的收縮力，從而改善膀胱尿動(dòng)力學(xué)水平[8]。筆者為此做了相關(guān)研究，主要通過觀察對(duì)比各組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平及尿動(dòng)力學(xué)狀況，并通過PCR逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)各組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白基因表達(dá)水平，來探究琥珀酸索利那新對(duì)女性膀胱過度活躍癥患者的治療效果。

本實(shí)驗(yàn)中：(1)兩組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43水平比較：經(jīng)治療，兩組患者生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平不同程度降低，且實(shí)驗(yàn)組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43、磷酸化生長(zhǎng)相關(guān)蛋白較對(duì)照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示琥珀酸索利那新可明顯改善膀胱過度活躍癥而引起的膀胱內(nèi)壁及相關(guān)局部肌細(xì)胞神經(jīng)突出異常增殖、分化，抑制神經(jīng)突出的生長(zhǎng)，降低神經(jīng)遞質(zhì)的釋放水平，從而改善膀胱活躍程度；(2)兩組尿動(dòng)力學(xué)情況比較：治療后兩組患者尿動(dòng)力學(xué)均不同程度恢復(fù)，且實(shí)驗(yàn)組尿量、最大尿流率、殘余尿量、初始尿意容積較對(duì)照組尿量明顯改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，琥珀酸索利那新可明顯降低膀胱興奮水平，從而改善患者尿頻、尿急、尿緊迫等癥狀，降低逼尿肌緊張度，提高膀胱及尿路括約肌緊張程度，從而增加膀胱容積及初始尿意容積，減少尿量殘留，改善尿動(dòng)力學(xué)水平；(3)兩組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化蛋白水平比較：治療后，兩組生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43及磷酸化蛋白水平均不同程度改善，且實(shí)驗(yàn)組PCR391 bp、生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(0.24±0.17) bp、磷酸化蛋白、較對(duì)照組水平明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，PCR產(chǎn)物通過凝膠電泳試驗(yàn)，可明確顯示機(jī)體生長(zhǎng)相關(guān)蛋白水平狀況及含量，從而反應(yīng)出膀胱內(nèi)神經(jīng)突出及沖動(dòng)傳到遞質(zhì)生成分泌水平，并且檢測(cè)特異性較高，可更精確的反應(yīng)膀胱尿動(dòng)力學(xué)水平，PCR的試驗(yàn)方法快速、敏感、準(zhǔn)確、特異性高，對(duì)基因水平表達(dá)研究可精確試驗(yàn)結(jié)果，為臨床研究及應(yīng)用，提供良好基礎(chǔ)。

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Research of the effect of solifenacin succinate on growth-associated protein 43 and urodynamics of female patients with overactive bladder

HuangYi1,LiuChunxiao2,GaoHong1,ZouHongdong1,HeJiangbo1,ChenDinghua1.

1.DepartmentofUrology,theFourthPeople'sHospitalofGuiyang,Guiyang550002,China. 2.DepartmentofUrology,AffiliatedofZhujiangHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510515,China.

Objective To investigate the clinical effect of solifenacin succinate on growth-associated protein 43 (GAP-43) and urodynamics of female overactive bladder. Methods 60 female patients with overactive bladder were chosen and randomly divided into control group (CG) and trial group (TG), each groupn=30. CG received intravesical instillation of sterile solution (verapamil 80 mg and normal saline 80 ml), which retaining one hour in each time and changing posture per 15 minutes in this time, twice per week. TG received oral administration of solifenacin succinate (5 mg，once before bed-time). Treatment lasted for 4 weeks in both groups. 30 healthy women were chosen as normal group (NG) and no treatment was given. Changes of GAP-43 and urodynamics in three groups were compared on the end of treatment, and gene expressions of GAP-43 in three groups were detected by using reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). Results There were differently degree of depression of level of GAP-43 and phosphorylation GAP-43 (p-GAP-43) in both group patients after treatment, and level of GAP-43 in TG was markedly lower than CG, there were statistical significantly differences (P<0.05). Urodynamics in both TG and CG had different degree of recovery on the end of treatment. Urine volume, maximum urinary flow rate, residual urine volume and initial urine volume in TG showed more obviously improved and there were statistical significantly differences (P<0.05). Levels of protein expression of GAP-43 and p-GAP-43 in both groups improved in differently degree, and there were statistical significantly differences (P<0.05). Conclusion Solifenacin succinate can improve the symptoms of female overactive bladder and ameliorates urodynamics by reduced the level of GAP-43 and inhibited the degree of phosphorylation.

Solifenacin succinate； Femal overactive bladder； Growth-associated protein 43； Urodynamics

R699.7

A

1000-744X(2016)09-0919-03

2016-05-20)