大烏泡水提物的鎮(zhèn)痛作用研究*

毛政益， 劉 瑤， 蔡 進(jìn)， 陳 瑞， 孟 鑫， 劉珈伲， 劉麗娜， 黃 靜*

(貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng) 550025)

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大烏泡水提物的鎮(zhèn)痛作用研究*

毛政益**， 劉 瑤， 蔡 進(jìn)， 陳 瑞， 孟 鑫， 劉珈伲， 劉麗娜， 黃 靜***

(貴州醫(yī)科大學(xué) 藥學(xué)院， 貴州 貴陽(yáng) 550025)

目的： 研究大烏泡水提物對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用及血清中NO含量的影響。方法:熱板致痛法及冰醋酸扭體法兩種方法下各選擇50只小鼠，每種方法下的小鼠均分為5組，分別為大烏泡根水提物高劑量組(5.2 g/kg生藥)、中劑量組(2.6 g/kg生藥)、低劑量組(1.3 g/kg生藥)、陽(yáng)性組(2.0 mg/kg鹽酸嗎啡)以及陰性組(生理鹽水)；熱板致痛法觀察小鼠的熱板痛閾值和血清一氧化氮(NO)含量變化，冰醋酸扭體法觀察小鼠扭體發(fā)作潛伏期、扭體次數(shù)、鎮(zhèn)痛抑制率及血清NO水平。結(jié)果:與陰性組比較，熱板法中陽(yáng)性組小鼠給藥后痛閾值升高，血清NO值降低，扭體法中小鼠扭體發(fā)作潛伏期升高，扭體次數(shù)減少，鎮(zhèn)痛抑制率增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明熱板致痛法和冰醋酸扭體法中小鼠模型成功；熱板法中，與陰性組比較，大烏泡水提物高、中、低劑量組小鼠痛閾值升高,血清NO含量降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意(P<0.05)；扭體法中，與陰性組比較，大烏泡根水提物高、中劑量組小鼠扭體發(fā)作潛伏期升高，高、中、低劑量組10 min內(nèi)扭體次數(shù)減少、鎮(zhèn)痛抑制率增加，高、中劑量組小鼠血清中NO含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:大烏泡水提物具有鎮(zhèn)痛作用,其作用機(jī)制可能與降低小鼠血清中NO含量有關(guān)。

鎮(zhèn)痛； 一氧化氮； 小鼠； 大烏泡

大烏泡為薔薇科懸鉤子屬植物大烏泡(RubusmultibracteatusLevl. et Vant.),又名倒生根、黃水泡、大紅黃袍、無(wú)刺烏泡、糖泡葉、馬莓等，全國(guó)大部分地區(qū)均有分布,主產(chǎn)于廣東、廣西、四川、云南、貴州等地。大烏泡全株及根入藥，其味苦、性涼,入脾、肝二經(jīng),具清熱解毒、祛風(fēng)除濕、涼血、止血以及接骨的功效。《貴州草藥》和《全國(guó)中草藥匯編》中均有記載，記載用于感冒發(fā)熱、腸炎、痢疾、腹瀉、風(fēng)濕痹痛、婦女倒經(jīng)、骨折、咳血、風(fēng)濕骨痛。大烏泡為苗藥的常用藥,有文獻(xiàn)曾報(bào)道過(guò)其總黃酮的含量測(cè)定及GC/MS的分析[1]，但目前尚未見有關(guān)大烏泡鎮(zhèn)痛研究的報(bào)道。一氧化氮(NO)作為一種神經(jīng)遞質(zhì)和一種信息傳遞分子，在外周、中樞以及骨髓不同水平的痛覺調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性NO水平降低可表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，而在外周痛覺的調(diào)控中，認(rèn)為抑制NO的合成可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用[2]。本研究通過(guò)熱板致痛和冰醋酸扭體實(shí)驗(yàn)觀察大烏泡水提液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用及血清NO水平的影響，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、藥品及試劑

昆明種小鼠由重慶騰鑫生物技術(shù)有限公司提供,合格證號(hào)為SCXK(渝) 2007-0006，實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d。大烏泡根莖藥材于2011年7月購(gòu)于貴州省貴陽(yáng)市藥材公司，經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)龍慶德教授鑒定為薔薇科懸鉤子屬大烏泡干燥根。冰醋酸(重慶川東化工集團(tuán)有限公司)，阿司匹林原料藥(天津科密歐化學(xué)試劑有限公司,批號(hào)20100918) ，鹽酸嗎啡注射液(沈陽(yáng)第一制藥廠,批號(hào)20110922) ，NO含量測(cè)定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)20130104)。

1.2 儀器

DFT-200手提式高速中藥粉碎機(jī)(溫嶺市大得中藥機(jī)械有限公司)，EL204電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司 )，RB-200智能熱板儀(成都泰盟軟件有限公司)，SHB-Ⅲ循環(huán)式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)易有限公司)，N-1100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛郎儀器有限公司)，UV-1750紫外分光光度計(jì)(島津儀器有限公司)，TGL-16G高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.3 方法

1.3.1 藥材提取與制備 取大烏泡粗粉200 g，加水2 000 mL，回流提取2次，每次2 h,合并提取液，過(guò)濾，將濾液液濃縮制成浸膏24.4 g。

1.3.2 熱板致痛閾值及血清NO水平 取雌性昆明種小鼠，體重在18～22 g，置于(55±0.5)℃熱板上,記錄小白鼠自開始放置于熱板至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間作為該鼠的痛閾值,凡舔后足時(shí)間<5 s或>30 s或跳躍者棄之不用,重復(fù)測(cè)正常痛閾值,取兩次正常痛閾平均值作為該鼠給藥前痛閾值[3-7]。將合格的小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只, 分為大烏泡水提物高劑量組(5.2 g/kg生藥)、中劑量組(2.6 g/kg生藥)、低劑量組(1.3 g/kg生藥)、陽(yáng)性組(鹽酸嗎啡2.0 mg/kg)以及陰性組(生理鹽水)。除陽(yáng)性組第7天皮下注射鹽酸嗎啡(每只小鼠0.1 mL/10 g體重)外,其余各組分別灌胃相應(yīng)濃度大烏泡水提物或生理鹽水,每天1次,連續(xù)7 d,末次給藥后15、30、60、90以及120 min分別測(cè)定小鼠痛閾值,如60 s仍無(wú)反應(yīng),痛閾以60 s計(jì)算。小鼠眼球取血，分離血清，-20 ℃冰箱保存。采用硝酸還原酶法測(cè)定血清中NO的含量,具體步驟參照NO檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行[8-9]。

1.3.3 鎮(zhèn)痛抑制率 取昆明種小鼠50只，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為5組，分組與給藥同“1.3.2”項(xiàng)，各組于末次給藥30 min后,給每只小鼠腹腔注射0.7%冰醋酸(0.1 mL/10 g體重)，記錄各組扭體發(fā)作的潛伏期和20 min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)，并計(jì)算鎮(zhèn)痛抑制率，鎮(zhèn)痛抑制率(%)=(模型組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù)) /模型組平均扭體次數(shù)×100%。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中室溫維持在(18±1)℃。 小鼠眼球取血，分離血清[10-13]。采用硝酸還原酶法測(cè)定血清中NO的含量,具體步驟參照NO檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 致痛閾值及血清NO值

與陰性組比較，大烏泡水提物高、中、低劑量組分別在給藥后15、30、60、90 和120 min痛閾值提高,并且大烏泡根水提物高、中、低劑量組小鼠血清中NO含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1和表2。

Tab.1 Pain threshold of hot plate before and after administration of mice in each group

與陰性組比較, (1)P<0.05,(2)P<0.01

Tab.2 NO content in serum of each group of mice in hot plate test

與陰性組比較, (1)P<0.05,(2)P<0.01

2.2 鎮(zhèn)痛作用及血清NO值

陰性組比較，大烏泡水提物高、中劑量組小鼠扭體發(fā)作潛伏期提高，高、中、低劑量組10 min內(nèi)扭體次數(shù)減少、鎮(zhèn)痛抑制率增加，高、中劑量組小鼠血清中NO含量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3和表4。

3 討論

大烏泡作為常用的苗藥，在民間應(yīng)用廣泛，有清熱解毒、祛風(fēng)除濕、涼血，止血以及接骨等作用。本課題組根據(jù)民間用藥經(jīng)驗(yàn)，取大烏泡地上部分常溫干燥后，對(duì)藥材進(jìn)行水提得到浸膏，分別用高、中、低三個(gè)劑量對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃，采用熱板鎮(zhèn)痛法

Tab.3 The incubation period, the frequency of twisting body and the analgesic inhibition rate of the mice in each group

與陰性組比較, (1)P<0.05,(2)P<0.01

Tab.4 Serum NO content in acetic acid writhing method in each group of mice

(1)與陰性組比較，P<0.05

和冰醋酸扭體法觀察其鎮(zhèn)痛效應(yīng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明大烏泡水提物有良好的鎮(zhèn)痛效果，而且高劑量與陰性組比較差異非常顯著，對(duì)于臨床應(yīng)用有重大的意義。

NO是迄今為止在體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)氣體信息分子,已成為生物學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和前沿之一。NO作為一種神經(jīng)遞質(zhì)和信息傳遞分子,在外周、中樞以及脊髓不同水平的痛覺調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)源性NO水平的降低表現(xiàn)出一定的鎮(zhèn)痛效應(yīng);而在外周痛覺的調(diào)控中,認(rèn)為抑制NO的合成可產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。本課題組采用硝酸還原酶法分別檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組小鼠的血清中NO的含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大烏泡水提物高劑量和中劑量組的NO含量與陰性對(duì)照組比較有顯著差異，高劑量組和陰性對(duì)照組比較有顯著性差異。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明大烏泡的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制可能是抑制NO的合成有關(guān)。

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(2016-07-23收稿，2016-10-28修回)

中文編輯： 文箐潁； 英文編輯： 劉 華

An Study on Analgesic Effect of the Water Extract ofRubusmultibracteatusLevl.et Vant

MAO Zhengyi, LIU Yao,CAI Jin, CHEN Rui, MENG Xin, LIU Jiani, LIU Lina, HUANG Jing

(CollegeofPharmacy,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550025 ,Guizhou,China)

Objective: To investigate the analgesic effect of the water extract ofRubusmultibracteatusLevl.et Vant and observe the level of the nitric oxide content in the rat serum. Methods: Acetic acid writhing method and Hot-plate method were used to study the analgesic activities. Under the two methods, the mice were randomly divided into 5 groups: high dose group (5.2 g/kg crude drug), middle dose group (2.6 g/kg crude drug), low dose group (1.3 g/kg crude drug), positive control group (2.0 mg/kg morphine hydrochloride) and negative control group(normal saline). Hot plate induced pain threshold and changes of serum nitric oxide (NO) content in mice were observed under Hot-plate method while the latent period, the times of twisting, the inhibition rate of analgesia and the level of serum NO in mice were observed under Acetic acid twisting method. Results: Compared with the negative control group, the pain threshold was increased after treatment in positive group and NO level was decreased under Hot-plate method while the writhing body seizure latency was increased, writhing times were reduced and analgesic inhibition rate was increased under Acetic acid writhing method. The differences were statistically significant (P<0.05), which showed that the mouse model of Hot plate method and Acetic acid writhing were successfully established. In Hot plate method, compared with the negative control group, in high, middle and low dose group, the mice pain threshold was increased, serum NO content was reduced, and the difference was statistically significant (P<0.05). In Acetic acid writhing method, compared with the negative control group, the writhing body seizure latency was increased in high and low dose group, writhing times were reduced and analgesic inhibition rate was increased in high, middle and low dose group, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: The water extract ofRubusmultibracteatusLevl.et Vant shows significant analgesic effect, whose mechanism may be related to its power to reduce NO conten in serum.

analgesic effect; nitric oxide； mice;RubusmultibracteatusLevl.et Vant

**[基金項(xiàng)目]貴州省科技廳中藥攻關(guān)項(xiàng)目[黔科合ZY(2011)3005]

E-mail:huangjgy@sohu.com

時(shí)間：2016-11-15 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161115.1757.012.html

R285.1

A

1000-2707(2016)11-1285-03

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.11.010

**貴州醫(yī)科大學(xué)2012級(jí)碩士研究生