反相高效液相色譜法測定硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑中沙丁胺醇的含量

劉進芳，馬艷，劉葦

(1.天津卓遠達貿(mào)易有限公司，天津300457；2.重慶市計量質(zhì)量檢測研究院，重慶401121；3.天津華北地質(zhì)勘探局，天津300181)

反相高效液相色譜法測定硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑中沙丁胺醇的含量

劉進芳1，馬艷2，劉葦3

(1.天津卓遠達貿(mào)易有限公司，天津300457；2.重慶市計量質(zhì)量檢測研究院，重慶401121；3.天津華北地質(zhì)勘探局，天津300181)

在Shim-pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm，4.6 μm)上進行分離，以0.01 mol/L的磷酸二氫鉀溶液－乙腈(體積比為85∶15)為流動相，流速為1.0 mL/min，檢測波長為225 nm，柱溫為40℃，建立了反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑中沙丁胺醇含量的方法。結(jié)果顯示：沙丁胺醇在0.5～20 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)為0.9988，RSD為3.21%(n=6),硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑的回收率分別為105.69%和91.62%。利用此方法測定硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑中沙丁胺醇的含量，具有方法簡便、快速、準確可靠的優(yōu)點，可以作為沙丁胺醇藥物制劑的含量測定和質(zhì)量控制。

反相高效液相色譜法(RP-HPLC)；沙丁胺醇；硫酸沙丁胺醇片；沙丁胺醇氣霧劑

沙丁胺醇(Salbutamol)，又名舒特靈，化學名為1-(4-羥基-3-羥甲基苯基)-2-(叔丁氨基)乙醇(1-(4-Hydroxy-3-hydroxymethylphenyl)-2-tertbutylaminol ethanol)，其結(jié)構(gòu)式如下：

沙丁胺醇是人工合成的腎上腺素β2受體興奮藥之一，屬于水楊醇類的腎上腺素激動藥。它對腎上腺素β2受體有高度選擇性，具有較強的支氣管擴張作用，臨床上多用于治療哮喘性支氣管炎、支氣管哮喘、肺氣腫引起的支氣管痙攣等疾病。制劑一般用其硫酸鹽，為白色粉末。硫酸沙丁胺醇首先由英國Allen&Hanburys公司于1969年研究開發(fā)并以Vent Olin商品名在德、法兩國上市，是臨床上治療哮喘的一線藥物[1]。目前，用于臨床的主要劑型有片劑、膠囊、注射液和噴霧劑。由于口服的沙丁胺醇在人體內(nèi)吸收速度快，半衰期為2.7～5 h，作用僅維持5 h[2]，所以近年來多用其噴霧劑和緩釋膠囊制劑。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器:日本島津（SHINADZU）LC-10A高效液相色譜儀系統(tǒng)：DGU-14A在線脫氣機，LG-10AT四元梯度泵，CTO-10A柱溫箱，SPD-M10A二極管陣列檢測器，CLASS-VP色譜工作站，SCL-10A控制器，SB2200超聲波發(fā)生器（上海必能信超聲有限公司），Milli-Q純水器（Millipore公司）；HANGPING FA2004電子天平（上海天平儀器廠）；25 μL微量進樣器（日本島津公司）；微量移液器（上海榮泰生化工程有限公司）；0.45 μm微孔過濾器。

試劑:乙腈（色譜純，天津市福晨化學試劑廠）；磷酸（分析純，天津市河東區(qū)紅巖試劑廠）；磷酸二氫鉀（分析純，天津市河東區(qū)紅巖試劑廠）；沙丁胺醇對照品（中國藥品生物制品檢定所）；硫酸沙丁胺醇片（天津力生制藥股份有限公司，產(chǎn)品批號0509006）；沙丁胺醇氣霧劑（蓬萊諾康藥業(yè)有限公司，產(chǎn)品批號071118）；配制試劑用水均為Milli-Q純水器處理的超純水。

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱為Shim-pack VP-ODS柱(150 mm×4.6 mm，4.6 μm)；保護柱為Shim-pack GVP-ODS(5 μm，4.6×10 mm)；流動相為0.01 mol/L的磷酸二氫鉀溶液-乙腈（體積比為85∶15）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為225 nm；進樣量為20 μL；柱溫為40℃。

1.2.2 應用試劑的配制

流動相的配制：精確稱取0.6805 g的磷酸二氫鉀固體于小燒杯中，用超純水溶解，引流至500 mL的容量瓶中定容，配制成0.01 mol/L的磷酸二氫鉀溶液，再用0.45 μm微孔過濾膜過濾。

1.2.3 標準儲備液的配制

精確稱取沙丁胺醇標準品0.0205 g于10 mL的比色管中，用二次蒸餾水稀釋并定容至10 mL，配制成2 mg/mL的標準儲備液，測定時取上述標準儲備液配制成適宜濃度的標準工作溶液。

1.2.4 樣品溶液的配制

取硫酸沙丁胺醇三片(約相當于沙丁胺醇6 mg)，精密稱定0.1951 g，研細，精密稱取0.0071 g，置于10 mL比色管中，加流動相適量，振搖使硫酸沙丁胺醇溶解，用流動相稀釋并定容至10 mL刻度，搖勻，過濾，配制成23 μg/mL的樣品溶液，進行測定。

取沙丁胺醇氣霧劑100 μL于10 mL比色管中，用流動相稀釋并定容至10 mL刻度，配制成19 μg/ mL的樣品溶液，進行測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 分離條件的選擇與優(yōu)化

2.1.1 檢測波長的選擇

取20 μL 20 μg/mL的沙丁胺醇標準溶液進樣，流速為1.0 mL/min。結(jié)果顯示：當檢測波長小于225 nm時，溶劑峰較大，干擾大，影響測定的靈敏度；當檢測波長大于225 nm時，沙丁胺醇的靈敏度較低；在225 nm處，沙丁胺醇有較靈敏的響應，且干擾小、分離效果佳，便于檢測，因此選擇225 nm作為檢測波長。

2.1.2 流動相的選擇

本文分別試驗了用水-甲醇、水-乙腈、水（0.01 mol/L NH4Ac-HAc緩沖溶液）-乙腈、水（0.01 mol/L KH2PO4-H3PO4緩沖溶液）-乙腈等體系作為流動相測定沙丁胺醇的含量，結(jié)果表明：當用水-甲醇、水-乙腈及水（0.01 mol/L NH4Ac-HAc緩沖溶液）-乙腈時，沙丁胺醇色譜圖的峰形差，保留時間欠佳；但用水（0.01 mol/L KH2PO4-H3PO4緩沖溶液）-乙腈時，沙丁胺醇色譜圖的峰形好，保留時間最佳，故選擇水（0.01 mol/L KH2PO4-H3PO4緩沖溶液）-乙腈體系作為流動相。并且考察了0.01 mol/L KH2PO4-H3PO4（pH 4.0）緩沖溶液和乙腈不同配比時對沙丁胺醇保留時間的影響，結(jié)果如表1。

從表1可以看到，隨著流動相中乙腈的比例增加，沙丁胺醇的保留時間逐漸減少。當乙腈占總流動相體積的30%時，雖然沙丁胺醇的出峰時間提前，但與溶劑出峰接近，彼此有干擾；當流動相中乙腈與KH2PO4-H3PO4緩沖溶液的比例為15∶85時，沙丁胺醇的出峰時間最為理想，它受雜峰干擾少，故流動相配比可選為15∶85，如圖1所示。

表1 流動相配比和酸度對保留時間的影響

圖1 乙腈比例對保留時間的影響

反相烷基鍵合的穩(wěn)定性與使用流動相的pH值相關(guān)，通常水溶液的pH應保持在2～8之間，pH＞8.50會引起基體硅膠的溶解。本文考察了流動相的pH值對沙丁胺醇保留時間的影響，結(jié)果見表1。從表1可以看出，pH在2.80～5.00時，雖然沙丁胺醇的保留時間變化很小，但從沙丁胺醇的標準色譜圖（圖3）中顯示，在此pH范圍內(nèi)，沙丁胺醇的出峰位置隨pH減少與雜峰距離增大，受雜峰干擾減少，尤在pH為3.80時，溶劑峰的干擾最小。因此，綜合考慮，確定流動相的pH為3.80，如圖2所示。

圖2 pH值對保留時間的影響

2.2 精密度試驗

在最佳色譜條件下，用濃度為10 μg/mL的沙丁胺醇標準溶液日內(nèi)連續(xù)進樣6次，每次進樣20 μL，以峰面積計算得沙丁胺醇的相對標準偏差（RSD）為3.21%。

2.3 方法的線性關(guān)系與檢出限

取適宜濃度的標準儲備液，用流動相稀釋并定容于10 mL比色管中，配制成濃度分別為0.01 μg/ mL、0.04 μg/mL、0.1 μg/mL、0.4 μg/mL、1 μg/mL、20 μg/mL的沙丁胺醇標準溶液，每種溶液分別進樣3次，以峰面積對濃度作沙丁胺醇的標準工作曲線，用稀釋法測定沙丁胺醇的檢出限。沙丁胺醇的標準工作曲線如圖3，其線性范圍、線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限列于表2，其中X表示沙丁胺醇的質(zhì)量濃度，Y表示沙丁胺醇的峰面積。

表2 沙丁胺醇的回歸分析結(jié)果及線性范圍

圖3 沙丁胺醇標準曲線

2.4 加標回收試驗

移取三份硫酸沙丁胺醇片樣品溶液100 μL于三支10 mL的比色管中，分別向其中加入2 mg/mL沙丁胺醇標準溶液50 μL、100 μL和200 μL，用流動相稀釋并定容至10 mL刻度線。

移取三份沙丁胺醇氣霧劑樣品溶液100 μL于三支10 mL的比色管中，分別向其中加入2 mg/mL沙丁胺醇標準溶液各50 μL、100 μL和200 μL，用流動相稀釋并定容至10 mL刻度線。在最佳色譜條件下進樣(進樣量為20 μL),做加標回收試驗，回收率見表3，圖4和圖5分別為硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑樣品的加標色譜圖。

2.5 樣品測定

取硫酸沙丁胺醇三片(約相當于沙丁胺醇6 mg)，精密稱定0.1951 g，研細，精密稱取0.0071 g，置于10 mL比色管中，加流動相適量，振搖使硫酸沙丁胺醇溶解，用流動相稀釋并定容至10 mL刻度。

取沙丁胺醇氣霧劑100 μL于10 mL比色管中，用流動相稀釋并定容至10 mL刻度。

表3 硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑樣品中沙丁胺醇的回收率試驗

圖4 硫酸沙丁胺醇片加標色譜圖（加標20 μg/mL）

圖5 沙丁胺醇氣霧劑加標色譜圖（加標20 μg/mL）

在最佳色譜條件下操作，依據(jù)峰面積與濃度成正比用單點校正法計算硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑樣品中沙丁胺醇的含量，結(jié)果見表4。圖6和圖7分別為硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑樣品色譜圖。

表4 硫酸沙丁胺醇片和氣霧劑中沙丁胺醇含量測定結(jié)果

3 結(jié)語

沙丁胺醇作為短效的腎上腺素β2受體激動藥，是較理想的控制哮喘急性發(fā)作的藥物，同時它在皮膚、婦科等方面的應用也越來越引起人們的注意。隨著制劑技術(shù)的發(fā)展，緩釋、噴霧技術(shù)相繼用于沙丁胺醇的制劑，使它克服了由于吸收快速而引起的震顫、惡心、心率增快或心搏異常強烈等不良反應，因而臨床應用越來越廣泛。目前，沙丁胺醇的檢測方法以酶聯(lián)免疫吸附法（FLISA）為主流，但高效液相色譜法（HPLC）由于具有靈敏度高、選擇性好、分析時間短、樣品用量少和易于實現(xiàn)自動化等優(yōu)點，適合于沙丁胺醇制劑的含量測定和質(zhì)量控制，現(xiàn)階段仍作為沙丁胺醇最可靠的檢測方法。

圖6 硫酸沙丁胺醇片樣品色譜圖

圖7 沙丁胺醇氣霧劑樣品色譜圖

［1］徐德琴,汪駿,徐學君,臧志和.武警醫(yī)學院學報,2008,19(2): 179-180.

Determination of salbutamol in salbutamol sulfate tablets and要salbutamol aerosol by RP-HPLC

Liu Jin-fang1,Ma Yan2,Liu Wei3
(1.Tianjin Zhuo Yuan Da Trading Co.,Ltd,Tianjin 300457,China; 2.Chongqing Academy of Metrology and Quality Inspection,Chongqing 401121,China; 3.Tianjin North China Geological Exploration Bureau,Tianjin 300181,China)

The method employed a shim-pack VP-ODS column(150mm×4.6mm，4.6μm)and a mobile phase of 85 volumes of potassium dihydrogen phosphate and 15 volumes of acetonitrile at a flow rate of 1.0mL/min.The detection wavelength was set at 225nm;The temperature of column was 40℃.A reversed-phase high performance liquid chromatographic method for salbutamol of salbutamol sulfate tablets and salbutamol aerosol was established. The results show that the liner range of salbutamol was 0.5～20μg/mL,r=0.9988,and RSD was less than 3.21%(n= 6).The average recover was 99.73%and 91.62%.This method was found to be simple,quick and accurate for simultaneous determination of salbutamol in salbutamol sulfate tablets and salbutamol aerosol.It can be used as the content determination and quality control of pharmaceutical preparations of salbutamol.

reversed-phase high performance liquid chromatographic method(RP-HPLC);salbutamol; salbutamol sulfate tablets;salbutamol aerosol

10.3969/j.issn.1008-1267.2016.06.014

O657.7+2

A

1008-1267（2016）06-0033-04

2016-7-10