肉雞用中草藥飼料添加劑的抑菌和毒理學(xué)試驗

莫勇魁，蔣遠(yuǎn)軍，韋庭江，韋金成，宋明杰，莫慢真，葛洪偉*

（1.廣西河池市南丹縣水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局，廣西南丹 547200；2.來賓市忻城縣潤華牧業(yè)有限責(zé)任公司，廣西來賓 546200；

3.廣西普大動物保健品有限公司，南寧 530004；4.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧 530004）

肉雞用中草藥飼料添加劑的抑菌和毒理學(xué)試驗

莫勇魁1，蔣遠(yuǎn)軍2,3，韋庭江2，韋金成3，宋明杰4，莫慢真4，葛洪偉2,3*

（1.廣西河池市南丹縣水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局，廣西南丹 547200；2.來賓市忻城縣潤華牧業(yè)有限責(zé)任公司，廣西來賓 546200；

3.廣西普大動物保健品有限公司，南寧 530004；4.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，南寧 530004）

為了研究中草藥飼料添加劑的的抑菌和毒理學(xué)效果，試驗設(shè)計了兩組中草藥飼料添加劑提取液的抑菌效果試驗和毒理學(xué)試驗。結(jié)果表明，中草藥飼料添加劑的抑菌效果較好，無毒副作用。在肉雞飼養(yǎng)過程中，試驗所設(shè)計的中草藥組方可以作為中藥添加劑使用。

中藥飼料添加劑；抑菌試驗；毒理學(xué)試驗

每年我國生產(chǎn)的21萬t的抗生素中，9.7萬t的都流向了畜禽養(yǎng)殖場，大約占到了年產(chǎn)量的46.15%，而這巨大的使用量中，90%的抗生素都是作為動物飼料添加劑而被消耗，致使動物的抗生素濫用現(xiàn)象十分嚴(yán)重，出現(xiàn)了大量的耐藥菌株，使得抗生素在動物疾病防治中的作用越來越小，為畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展埋下了隱患，同時也為人類的生命與健康帶來了巨大威脅。因此尋求有效的抗生素替代物，突破傳統(tǒng)肉雞養(yǎng)殖方式可持續(xù)發(fā)展的瓶頸是目前肉雞健康養(yǎng)殖領(lǐng)域的研究重點和熱點[1-13]。

中藥具有益氣養(yǎng)血、固本培元等功效，其抗氧化、抗疲勞、抗衰老、抑菌等作用明顯，本試驗依據(jù)中藥配伍的原理，配制兩組中草藥添加劑提取液，并對其進(jìn)行抑菌實驗、毒理實驗，篩選出效果最好的中草藥添加劑組方，旨在為肉雞的健康養(yǎng)殖業(yè)提供參考。

1 材料與方法

1.1 中草藥飼料添加劑提取物制備

根據(jù)單味中草藥的抑菌效果和病原菌種類，結(jié)合中醫(yī)藥理論，配制出兩組中草藥飼料添加劑提取液。兩組的中藥組方分別是A組提取液組中藥組方：按照原藥材松針、仙人掌、辣蓼、白頭翁、訶子、板藍(lán)根、淡竹葉的重量配比24∶20∶12∶15∶12∶10∶10。B組提取液組中藥組方：按照原藥材黨參、黃芪、當(dāng)歸、黃芩、梔子、淫羊藿、牛膝的重量配比22∶17.5∶10∶12.5∶10∶8∶8。

按照A組提取液和B組提取液的組方稱取各原藥材，首次水提加水量為藥材重量的10倍，提取時間為2 h，過濾，制得水提液；再次加入適量的水進(jìn)行二次水提，提取時間為1h，過濾，制得水提液；合并兩次水提液，濃縮至相對密度1.18，即可得到A組提取液和B組提取液的原液，分別為試驗A組藥液和試驗B組藥液。

1.2 試驗動物

試驗動物為體重16～18 g的成年小白鼠50只。

1.3 試驗儀器

牛津杯、培養(yǎng)皿、低速臺式水平離心機、低溫冰箱、電熱恒溫水浴箱、顯微鏡等。

1.4 抑菌實驗方法

1.4.1 藥敏性實驗

將培養(yǎng)皿滅菌后分成6個扇區(qū)，將瓊脂培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基倒入平板，在每個平皿內(nèi)均勻加入0.5mL已制備的病原菌稀釋菌液。將牛津杯內(nèi)加入100μL藥液按順序放入6個扇區(qū)中央，37℃下培養(yǎng)24h，測量抑菌直徑。

1.4.2 最小抑菌濃度和最小殺菌濃度的測定

根據(jù)水提物的抑菌結(jié)果，采用10倍稀釋法及2倍稀釋法，測定最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）。具體測定方法參考黃亞東2005年研究方法進(jìn)行[14]。

1.5 毒理學(xué)試驗方法

1.5.1 急性毒性試驗（LD50的測定）

根據(jù)此前預(yù)試驗結(jié)果，設(shè)10 000、20 000、40 000、80 000 mg·kg-14個劑量組和1個空白對照組，每組10只小白鼠，連續(xù)給藥一周，每天觀察小白鼠精神狀態(tài)、食欲和飲水情況、中毒情況，并記錄白鼠的死亡數(shù)目[15-16]。

1.5.2 蓄積毒性試驗

設(shè)4個劑量組和1個對照組，按1 000、2 000、4 000、8 000 mg·kg-1的劑量進(jìn)行灌胃給藥，連續(xù)給藥3周，在給藥期間每天觀察小白鼠精神狀態(tài)、食欲和飲水情況、體重情況以及中毒情況，并記錄白鼠的死亡數(shù)目。給藥停止后觀察1周內(nèi)小白鼠的死亡情況[17]。

1.6 統(tǒng)計分析

試驗結(jié)果采用SPSS10.0軟件One Way ANOVA進(jìn)行統(tǒng)計，并進(jìn)行Duncan's多重比較，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 試驗結(jié)果

2.1 抑菌試驗效果

2.1.1 抑菌直徑

中草藥提取物對抑菌直徑的影響見表1。

表1 中草藥提取物對抑菌直徑的影響 mm

由表1可知，兩組提取液均有一定的抑菌作用，A組提取液組在大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌和副嗜血桿菌抑菌直徑分別比B組提取液組高出3.85、2.4、0.3和2.7 mm，表明A組提取液的抑菌效果強于B組提取液。

2.1.2 最小抑菌濃度和最小殺菌濃度

最小抑菌濃度和最小殺菌濃度濃度見表2。

由表2可知，兩組中藥提取液的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度都較為理想，但是相比較而言，試驗A組的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度比試驗B組更為理想。

2.2 急性攻毒實驗

試驗小白鼠在急性攻毒后7 d，小白鼠的食欲、精神狀態(tài)、飲水采食等情況正常，與對照組相比無異常。小白鼠在灌服中草藥提取液80 000 mg· kg-1后，沒有出現(xiàn)中毒死亡。按毒理學(xué)評價標(biāo)準(zhǔn)，無需測定半數(shù)致死量即LD50＞80 000 mg·kg-1。急毒性試驗結(jié)果表明，本試驗所設(shè)計的肉雞中草藥飼料添加劑是無毒的。

2.3 蓄積毒性實驗

蓄積毒性實驗見表3。

試驗A組和試驗B組在給藥3周后，兩組小白鼠的食欲、精神、飲水等均表現(xiàn)正常，也未出現(xiàn)死亡情況，停止給藥一周后，小白鼠表現(xiàn)正常。由表3可知，給藥3周后，試驗A組與B組相比，在試驗初始重、試驗結(jié)束重和平均增重方面無明顯差異。

表2 最小抑菌濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC）濃度mg·ml-1

表3 蓄積毒性試驗

3 討論

3.1 中藥的抑菌效果

唐艷等用金銀花等中草藥對大腸桿菌、葡萄球菌、沙門氏菌進(jìn)行抑菌效果試驗，結(jié)果表明，中草藥能對上述細(xì)菌有很好的抑菌效果，尤其能夠破壞大腸埃希氏菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物外泄，最終細(xì)胞死亡[18]。本試驗結(jié)果表明，兩組中草藥飼料添加劑提取液的抑菌效果和殺菌效果都較好。

3.2 中藥的毒理學(xué)效果

吳永魁等對抗疲勞中藥復(fù)方制劑的安全性進(jìn)行毒理學(xué)試驗，結(jié)果表明，抗疲勞中藥復(fù)方制劑屬于無毒、無致突變性的中藥制劑[19]。本試驗結(jié)果表明，所設(shè)計的兩組中草藥飼料添加劑提取液屬于無毒類中藥制劑，可以安全使用。

4 結(jié)論

本試驗所設(shè)計的提取液具有較好的抑菌殺菌作用，無毒副作用，在肉雞飼養(yǎng)過程中可以作為中草藥添加劑使用。

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表2 泰樂欣對母豬繁殖性能和哺乳仔豬生長性能的影響

3 結(jié)論

泰樂欣能緩減妊娠母豬便秘的發(fā)生，提高哺乳仔豬的生長速度，提高仔豬的成活率和健康水平。

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Inhibition and Toxicity Test of Chinese Herb Feed Additive for Broiler

MO Yongkui1,JIANG Yuanjun2,3,WEI Tingjang2,WEI Jincheng3,SONG Mingjie4, MO Manzhen4,GE Hongwei2,3*

（1.Bureau of Animal Husbandry of Nandan County Hechi City,Nandan 547200,Guangxi China;
2.Xincheng County of Laibin City Runhua Animal Husbandry Co.,Ltd.,Laibin 546200,Guangxi China;
3.Guangxi Puda Animal Health Products Co.,Ltd.,Nanning 530004,Guangxi China;
4.College of Animal Science and Techlogy,Guangxi University Nanning 530004,Guangxi China）

This test was conducted to evaluate the effect of traditional Chinese medicine.The results showed that the antibacterial effect of traditional Chinese medicine feed additive was good with no toxic and side effects.Chinese medicine prescription designed in this experiment could be used as a traditional Chinese medicine additive in broiler breedingprocess.

Chinese medicine feed additive;inhibition test;toxicology test

S816.7；R286

A

1001-0084（2016）11-0027-04

2016-10-15

2016年來賓市科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計劃（來科攻162917）

莫勇魁（1974-），男，廣西南丹人，獸醫(yī)師，主要研究方向為動物疫病防控。

*通訊作者：E-mail:ghwxyl@163.com。