復方丹參片丹參酮類化合物含量測定

黃思勇， 金顯平

(恩施職業(yè)技術(shù)學院，湖北恩施 445000)

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復方丹參片丹參酮類化合物含量測定

黃思勇， 金顯平

(恩施職業(yè)技術(shù)學院，湖北恩施 445000)

[目的]完善復方丹參片的質(zhì)量標準。[方法]采用高效液相色譜法(HPLC)測定復方丹參片中丹參酮類成分的含量。[結(jié)果]丹參酮ⅡA在0.10～0.50 μg時線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為100.59%，相對標準偏差為1.38%。[結(jié)論]該方法簡便快速、重現(xiàn)性好，可作為復方丹參片質(zhì)量控制的方法。

復方丹參片；丹參酮類化合物；含量測定；高效液相色譜法(HPLC)

復方丹參片由丹參、三七、冰片三味中藥組成，具有活血化瘀、理氣止痛的功效[1]?！吨袊幍洹?015年版復方丹參片含量測定中對丹參藥材的丹參酮ⅡA、丹酚酸B含量進行了測定，對三七藥材的人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1、人參皂苷Re進行了含量測定，該質(zhì)量標準對復方丹參片的主藥丹參、處方中貴重中藥材三七的含量進行了測定，符合復方制劑質(zhì)量控制指標的要求[2]。為使復方丹參片的質(zhì)量控制更加準確和全面，筆者選取丹參酮ⅡA作為對照，采用一測多評法對復方丹參片中丹參酮類化合物的含量進行了測定。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器。高效液相色譜儀：DIONEX(U3000)；色譜工作站：Chameleon；檢測器：VWD3100紫外；色譜柱：Acclaim 120 C18(5 μm，250.0 mm×4.6 mm)；分析天平：AL204 (感量0.1mg，METTLER TOLEDO)；KQ-2500超聲波清洗儀(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

1.1.2 藥劑與試劑。復方丹參片：市售品，規(guī)格為每片重0.32 g，相當于飲片0.60 g。丹參酮ⅡA對照品：批號110766-201520，含量以98.9%計，購買于中國食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，水為純凈水。

1.2 方法

1.2.1 對照品溶液的配制。稱取適量丹參酮ⅡA對照品置于棕色量瓶中，加甲醇制成濃度為20 μg/mL的溶液即為對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的配制。稱取1.0 g復方丹參片粉末(過三號篩)，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇定量，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，初濾，0.45 μm有機系微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液，即為供試品溶液。

1.2.3 色譜條件[2]。以Acclaim 120 C18柱(4.6 mm×250.0 mm,5 μm)為色譜柱；以乙腈為流動相A，以0.02%磷酸溶液為流動相B，按照表1中的規(guī)定梯度進行洗脫；柱溫為30 ℃；檢測波長為270 nm；進樣量為10 μL。

表1 流動相梯度洗脫

1.2.4 丹參酮線性關(guān)系考察。吸取丹參酮ⅡA對照品溶液5、10、15、20、25 μL，分別注入液相色譜儀，測定丹參酮ⅡA峰面積。

1.2.5 精密度試驗。吸取丹參酮ⅡA對照品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，重復進樣6次，測定丹參酮ⅡA峰面積。

1.2.6 供試品溶液的穩(wěn)定性試驗。取復方丹參片供試品溶液，于0、2、4、6、12 h分別吸取10 μL注入液相色譜儀，測定丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I峰面積。

1.2.7 重現(xiàn)性試驗。取同一批樣品6份，每份1.0 g，按照供試品溶液的制備方法和含量測定方法進行樣品制備及含量測定。

1.2.8 加樣回收率試驗。取已知含量的樣品6份，每份1.0 g，置于50 mL棕色量瓶中，分別加入適量丹參酮ⅡA對照品，按照供試品溶液的制備方法和含量測定方法進行樣品制備及含量測定。

1.2.9 樣品含量測定。取3批樣品進行含量測定，以丹參酮ⅡA對照品為參照，以其相應的峰為S峰，計算隱丹參酮、丹參酮I的相對保留時間，其相對保留時間應在規(guī)定值的±5%范圍內(nèi)[2]。相對保留時間及校正因子見表2。以丹參酮ⅡA的峰面積為對照，分別乘以校正因子，計算隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮ⅡA的含量[2]。

2 結(jié)果與分析

2.1 丹參酮線性關(guān)系 以丹參酮ⅡA的進樣量C(μg)為橫坐標、參酮ⅡA的峰面積A為縱坐標繪制標準曲線，計算得到線性回歸方程：A=606.84.34C-1.106，r=0.999 6(n=5)。結(jié)果表明，在0.10～0.50 μg范圍內(nèi)參酮ⅡA的進樣量與峰面積線性關(guān)系較好。由圖1可知，丹參酮類化合物的峰與其相鄰的成分峰分離效果好，滿足測定要求。

注：1.丹參酮ⅡA;2.丹參酮I;3.隱丹參酮。Note: 1. Tanshinones ⅡA; 2. Tanshinones I; 3. Cryptotanshinone. 圖1 供試品種和對照品的HPLC圖譜Fig.1 HPLC of tested substances and reference substances

2.2 精密度 結(jié)果表明，6次測得丹參酮ⅡA峰面積的相對標準偏差為1.37%，儀器的精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性 結(jié)果表明，測得丹參酮ⅡA峰面積的相對標準偏差為1.02%，隱丹參酮峰面積的相對標準偏差為0.88%，丹參酮I峰面積的相對標準偏差為1.02%。表明復方丹參片供試品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重現(xiàn)性 結(jié)果表明，該批樣品中丹參酮類化合物含量的平均值為1.12 mg/片，相對標準偏差為1.70%(n=6)。

表2 各待測成分相對保留時間及校正因子

Table 2 Relative retention time and correction factor of tested components

待測成分(峰)Testedcomp?onents(peak)相對保留時間Relativeretentiontime∥min校正因子Correctionfactor隱丹參酮Cryptotanshinone0．751．18丹參酮ITanshinonesI0．791．31丹參酮ⅡATanshinonesⅡA1．001．00

2.5 加樣回收率 結(jié)果表明，丹參酮ⅡA的平均加樣回收率為100.89%，相對標準偏差為1.44%。表明該試驗方法準確可靠。

2.6 樣品含量測定 結(jié)果表明，3批樣品的丹參酮類化合物含量為1.13、1.11、1.13 mg/片。

3 結(jié)論與討論

《中國藥典》2015年版一部對復方丹參片的含量測定中[2]對丹酚酸B和丹參酮ⅡA進行了含量測定；金樟照等[3-10]采用高效液相色譜技術(shù)對不同產(chǎn)地的丹參藥材、丹參飲片進行了指紋圖譜研究，結(jié)果表明不同產(chǎn)地的丹參藥材、丹參飲片的共性成分有差別，但都含有脂溶性成分丹參酮ⅡA、隱丹參酮、丹參酮I，以及水溶性成分丹酚酸B。因此，《中國藥典》2015年版對復方丹參片中的丹參選擇丹參酮ⅡA、丹酚酸B作為含量測定的指標性成分較合理。但丹參酮類成分僅選用丹參酮ⅡA作為指標性成分不能夠全部反映不同產(chǎn)地丹參藥材生產(chǎn)的復方丹參片的質(zhì)量?！吨袊幍洹?015年版一部對丹參藥材的質(zhì)量控制也選取了丹參酮類成分，因此，該研究認為選取丹參酮類成分控制復方丹參片的質(zhì)量更合理。參照《中國藥典》2015年版一部丹參藥材的測定方法，采取高效液相色譜技術(shù)對丹參酮類成分進行含量測定，方法可行，簡單，重現(xiàn)性好，可以作為復方丹參片中丹參酮類成分的含量測定方法。以丹參酮類化合物的含量作為復方丹參片中丹參含量測定的控制指標，可以減少或避免因丹參產(chǎn)地不同而影響復方丹參片的質(zhì)量。參考文獻

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Determination of Tanshinones Content in Danshen Tablets

HUANG Si-yong, JIN Xian-ping

(Enshi Technical College, Enshi, Hubei 445000)

[Objective] To improve the quality standard of Danshen tablets. [Method] Tanshinones content in Danshen tablets was detected by HPLC method. [Result] Tanshinones ⅡA showed good linear relationship within the range of 0.10-0.50 μg; the average recovery rate was 100.59%(RSD=1.38%). [Conclusion] This method is simple, rapid and reproducible, it can be used as a method for quality control of Danshen tablets.

Danshen tablets; Tanshinones; Content determination；HPLC

黃思勇(1982- )，男，湖北建始人，講師，從事藥品質(zhì)量控制研究。

2016-09-18

S 567.5+3

A

0517-6611(2016)33-0121-02