實(shí)驗(yàn)性兔根尖周炎模型的建立

雷 濤，李永峰，李鵬博

（1.西北民族大學(xué) 甘肅省口腔疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 西北民族大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州730030；2.西安長安醫(yī)院口腔科，陜西西安710100）

實(shí)驗(yàn)性兔根尖周炎模型的建立

雷 濤1，李永峰2，李鵬博2

（1.西北民族大學(xué) 甘肅省口腔疾病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地 西北民族大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州730030；2.西安長安醫(yī)院口腔科，陜西西安710100）

目的：運(yùn)用內(nèi)毒素誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性兔根尖周炎模型的建立，探討建立實(shí)驗(yàn)性兔根尖周炎模型的方法.方法：選用6只新西蘭大白兔，采用全麻后在其雙側(cè)上頜第一、第二磨牙及下頜第一磨牙咬合面開髓，置入內(nèi)毒素脂多糖后，分別于術(shù)后1周、2周、3周各處死2只，制作組織學(xué)切片，經(jīng)HE染色后觀察并分析根尖周組織變化的過程.結(jié)果：1周后，實(shí)驗(yàn)性兔根尖周組織見較明顯的炎癥細(xì)胞浸潤；2周后，炎癥細(xì)胞浸潤明顯加重；3周后進(jìn)入慢性炎癥期.結(jié)論：將內(nèi)毒素脂多糖封入實(shí)驗(yàn)性兔根管后，可成功建立根尖周炎模型，為根尖周病變的研究奠定了基礎(chǔ).

根尖周炎；兔；內(nèi)毒素

根尖周炎是指發(fā)生在根尖周圍組織的炎癥性疾病，其致病機(jī)制是眾多研究者關(guān)心的問題，常見的建模方法有：自然暴露法建?；蜃冃捂溓蚓５?，運(yùn)用不同方法建立根尖周炎的結(jié)果存在一定差異［1－5］.本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖沁\(yùn)用內(nèi)毒素誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性兔根尖周炎模型的建立，探討建立實(shí)驗(yàn)性兔根尖周炎模型的具體方法及遇到的問題，為深入研究其發(fā)病機(jī)理及根管治療奠定基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年新西蘭大白兔6只‘雄性，體重2.0～2.5kg（由蘭州大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）.

1.2 主要試劑和藥物

1）內(nèi)毒素脂多糖（LPS，Sigma公司，美國），用無菌生理鹽水將LPS稀釋至5mg／mL，過濾除菌后備用.

2）速眠新Ⅱ（吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司）.

3）氧化鋅丁香油水門汀（上海醫(yī)療器械股份有限公司）.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 手術(shù)方法

選6只成年新西蘭大白兔，每只兔選用6顆牙齒作為實(shí)驗(yàn)牙，分別為雙側(cè)上頜第一磨牙、第二磨牙及下頜第一磨牙.用速眠新Ⅱ肌注給藥（0.1mL／kg）麻醉實(shí)驗(yàn)兔，固定四肢后，75%酒精口周消毒，1%碘酊消毒術(shù)區(qū).用12號(hào)球鉆在兔磨牙咬合面開髓，暴露穿髓點(diǎn)，在露髓孔處放置飽蘸LPS液的棉球.隨后氧化鋅丁香油水門汀暫封，待動(dòng)物清醒后送回實(shí)驗(yàn)室繼續(xù)正常飼養(yǎng).

1.3.2 組織學(xué)切片制作

分別于術(shù)后1周、2周、3周處死2只實(shí)驗(yàn)兔，立即切取上下頜骨，剔除軟組織，置于40g／L甲醛溶液中固定，經(jīng)脫鈣、流動(dòng)水沖洗、乙醇梯度脫水、二甲苯透明、石蠟浸泡及包埋，進(jìn)行連續(xù)切片，經(jīng)HE染色后在光鏡下觀察.

2 結(jié)果

標(biāo)本切片經(jīng)HE染色，在光鏡下觀察.術(shù)后1周，實(shí)驗(yàn)兔根尖周組織見炎癥細(xì)胞浸潤，其中以中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞為主，同時(shí)可見極少量巨噬細(xì)胞.術(shù)后2周，炎癥細(xì)胞浸潤明顯加重，中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞多見，其中以中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主，并伴少量牙槽骨吸收，偶見小膿腫存在；術(shù)后3周，進(jìn)入慢性炎癥期，顯示出炎癥進(jìn)入相對(duì)穩(wěn)定期及修復(fù)階段.

圖1 標(biāo)本切片術(shù)后1周（HE×100）圖

圖2 標(biāo)本切片術(shù)后2周（HE×100）圖

圖3 標(biāo)本切片術(shù)后3周（HE×100）圖

3 討論

慢性根尖周炎是口腔科臨床中常見疾病之一，其致病機(jī)制是眾多研究者關(guān)心的問題.近年來，國內(nèi)外學(xué)者運(yùn)用建立根尖周炎動(dòng)物模型，研究其發(fā)病機(jī)制［6－9］，評(píng)價(jià)根管治療藥物和根充材料的療效.

在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，兔上下頜前牙呈大“C”型，髓腔較細(xì)，開髓時(shí)很容易側(cè)穿，不適宜用作實(shí)驗(yàn)牙，而磨牙牙體較直且相對(duì)粗大，便于操作.出于經(jīng)濟(jì)及操作方面的便利問題，本實(shí)驗(yàn)采用新西蘭大白兔作為研究對(duì)象.

細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁外膜上具有高度活性的大分子物質(zhì)，其主要成分為LPS［10］.Fouad［11］等發(fā)現(xiàn)：LPS可誘導(dǎo)局部體液免疫反應(yīng)參與炎癥形成.本實(shí)驗(yàn)在兔全麻妥后，磨牙咬合面開髓，封入LPS棉球感染牙髓，引起牙髓炎及根尖周炎癥的發(fā)生.病理學(xué)結(jié)果顯示：術(shù)后2周內(nèi)，隨時(shí)間的推移，病變持續(xù)加重，3周后，炎癥進(jìn)入相對(duì)穩(wěn)定期及修復(fù)階段.此結(jié)果與Graunaite、Lin［12－13］等學(xué)者的研究結(jié)果相似.

本實(shí)驗(yàn)采用此方法建立的根尖周炎模型，兔牙髓出現(xiàn)的炎癥反應(yīng)隨時(shí)間推延炎癥逐漸加重而造成根尖周組織的破壞，隨后炎癥進(jìn)入相對(duì)穩(wěn)定期及修復(fù)階段.可以在短期內(nèi)觀察到根尖周炎病變從急性到慢性炎癥的發(fā)展過程，是簡單易行且周期較短的研究方法，可用于慢性根尖周炎病變的進(jìn)一步研究，同時(shí)為臨床治療慢性根尖周炎提供參考.

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R781.34

A

1009-2102（2016）04-0080-03

2016-08-20

雷濤（1966—），女，甘肅臨夏人，主任醫(yī)師，碩士，主要從事口腔臨床醫(yī)療方面的研究.