不同形態(tài)硒、維生素E、紫蘿卜提取物體外抗氧化協(xié)同作用研究

鄭時(shí)蓮,潘 瑤,張?jiān)讫?鄧澤元,李紅艷

(南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330047)

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不同形態(tài)硒、維生素E、紫蘿卜提取物體外抗氧化協(xié)同作用研究

鄭時(shí)蓮,潘 瑤,張?jiān)讫?鄧澤元,李紅艷*

(南昌大學(xué)食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江西南昌 330047)

本文比較了不同形態(tài)硒(包括亞硒酸鈉,SS;L-硒甲基半胱氨酸,L-Se-MSC;富硒酵母,SEY)、維生素E(VE)和紫胡蘿卜提取物(Ant)之間的抗氧化協(xié)同作用。分別建立DPPH、Fe3+和ABTS+·三種體外抗氧化模型,繪制清除率曲線,計(jì)算各物質(zhì)的半抑制濃度(IC50)。采用等輻射分析法,根據(jù)等效公式計(jì)算復(fù)配后的理論值(IC50add),將其與實(shí)際測(cè)量值(IC50 mix)進(jìn)行比較。結(jié)果顯示,SS和L-Se-MSC的體外抗氧化性較弱,而SEY在體外具有較強(qiáng)抗氧化能力。同一模型中,不同復(fù)配比例的抗氧化協(xié)同效應(yīng)不同。協(xié)同效應(yīng)最佳的組合比例在DPPH模型中為:VEmix∶Antmix∶SEYmix=4∶1∶1,在Fe3+模型中為:VEmix∶Antmix∶SEYmix=1∶4∶1,在ABTS+·模型中為:VEmix∶Antmix∶SEYmix=1∶1∶1。因此,同一物質(zhì)在不同模型中的抗氧化效應(yīng)不同,SEY、VE與Ant聯(lián)用具有抗氧化協(xié)同作用,但同一組合在不同抗氧化模型中表現(xiàn)出的效應(yīng)有所不同。

硒,維生素E,紫蘿卜提取物,抗氧化,協(xié)同作用

硒(Se)是人和動(dòng)物體內(nèi)一種重要的微量元素,在人體內(nèi)發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用,其存在形式主要有有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒兩種。其中,無(wú)機(jī)硒亞硒酸鈉(Sodium selenite,SS)中的硒元素在體內(nèi)作為多種抗氧化酶的活性中心發(fā)揮抗氧化作用[1]。有機(jī)硒L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-methylselenocysteine,L-Se-MSC)是甲基化的硒代半胱氨酸,是一種新型的硒強(qiáng)化劑,外觀為粉末狀或顆粒狀物質(zhì)[2]。有機(jī)硒富硒酵母(Se-enriched yeast,SEY)是在培養(yǎng)酵母的過(guò)程中加入無(wú)機(jī)硒,酵母生長(zhǎng)時(shí)硒與酵母體內(nèi)的蛋白質(zhì)和多糖有機(jī)結(jié)合轉(zhuǎn)化為生物硒,從而消除了化學(xué)硒對(duì)人體的毒副反應(yīng)和腸胃刺激,使硒能夠更高效、更安全地被人體吸收利用[3]。有機(jī)硒、無(wú)機(jī)硒和VE都有一定的抗氧化能力[4]。維生素E(Vitamin E,VE)又稱生育酚,是一種脂溶性維生素[5]。紫色作物中存在著大量的花色苷,具有強(qiáng)抗氧化作用。據(jù)美國(guó)《健康》雜志報(bào)道[6],紫蘿卜含有高濃度的花色苷,天然的紫蘿卜花青素是有效的抗氧化劑。研究發(fā)現(xiàn)兩種或多種有抗氧化功效的因子聯(lián)用存在抗氧化協(xié)同作用[7]。

等輻射分析法評(píng)價(jià)抗氧化相互作用的優(yōu)點(diǎn)在于判斷準(zhǔn)確,直觀方便[8]。研究表明,該方法適用于不同藥物之間相互作用的評(píng)價(jià),近年來(lái)也逐漸用于評(píng)價(jià)天然產(chǎn)物的抗氧化相互作用。本實(shí)驗(yàn)在Luszczki 等[9]的等輻射法的基礎(chǔ)上略加改進(jìn),運(yùn)用等效公式對(duì)復(fù)配藥物的相互作用進(jìn)行定性分析,協(xié)同率對(duì)復(fù)配藥物的協(xié)同強(qiáng)弱進(jìn)行定量分析,研究五種抗氧化物質(zhì)(SS、L-Se-MSC、SEY、VE和Ant)之間的協(xié)同作用。分別建立三種體外抗氧化模型(DPPH法、Fe3+還原法及ABTS+·法),探討不同抗氧化模型之間的差異,研究不同形態(tài)硒的抗氧化作用,另外,參照孫玥等[10]的復(fù)配方法,研究以不同比例(1∶1∶0、1∶1∶1、1∶1∶4、4∶1∶1、1∶4∶1)與VE、Ant復(fù)配后的抗氧化協(xié)同能力。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

L-硒甲基硒代半胱氨酸(L-Se-MSC) 由江西川奇制藥有限公司提供;亞硒酸鈉(SS) 由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供;富硒酵母(SEY) 由安琪酵母股份公司提供;水溶性維生素E(VE) 1,1-二苯基-1-苦味肼基自由基(DPPH) 由美國(guó)Sigma公司提供;紫蘿卜提取物(Ant) 由江西國(guó)億生物有限公司提供;2,2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽(ABTS),過(guò)硫化鉀 來(lái)自廣東西隴化工廠。其他試劑均為分析純。

SP-1900UV紫外可見分光光度計(jì) 來(lái)自上海光譜儀器有限公司;QL-861渦流混合器 來(lái)自太倉(cāng)科教器材廠;HH-S11電熱恒溫水浴鍋 來(lái)自廣州戶瑞明儀器有限公司;AR1140電子分析天平來(lái)自?shī)W豪斯儀器有限公司。

1.2 抗氧化模型的建立

根據(jù)周瑋婧[11]等方法,加以改善,建立DPPH、Fe3+、ABTS+·三種體外抗氧化模型。

1.2.1 試劑配制 取L-Se-MSC、SS、SEY、VE和Ant所需用量,用蒸餾水溶解成濃度適合(5、10、20、40、60、100、150 μg/mL)的樣品儲(chǔ)備液,冷藏待用。注:VE為脂溶性維生素,先用少量乙醇溶解,再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 DPPH自由基清除法 DPPH配制成1×10-4mol/L,取2 mL DPPH與等體積不同濃度的受試物混合,充分搖勻。室溫暗光下反應(yīng)30 min,在517 nm處測(cè)定其吸光值,平行三次。

清除率(%)=[A0-(Ai-Aj)/A0]×100

(式中:A0為對(duì)照實(shí)驗(yàn)(蒸餾水水代替樣品溶液)的吸光度;Ai為樣品實(shí)驗(yàn)組的吸光度;Aj為樣品干擾實(shí)驗(yàn)(無(wú)水乙醇代替DPPH溶液)的吸光度)。

1.2.3 Fe3+還原法 取2 mL不同溶度的受試物與1 mL PBS(pH6.6)緩沖溶液混合后,加1 mL l%的鐵氰化鉀溶液于50 ℃水浴20 min后迅速冷卻,然后加入1 mL 三氟乙酸(10%),混勻靜置10 min。取2 mL上清液,加入3 mL水后加0.2 mL三氯化鐵(0.1%)溶液,完全顯色后以試劑空白做參比,于700 nm處測(cè)定吸光值,吸光值越強(qiáng),還原能力越強(qiáng)。

1.2.4 ABTS自由基清除法 ABTS儲(chǔ)備液的配制:取5 mL ABTS陽(yáng)離子,80 μL K2S2O8儲(chǔ)備液用PBS溶液稀釋成工作液,在734 nm處將吸光值調(diào)整至0.7±0.02。取4 mL ABTS+·工作液與10 μL不同濃度受試物混合,常溫避光靜置6 min,在734 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。

清除率(%)=[A0-Ai/A0]×100

(式中:A0為對(duì)照實(shí)驗(yàn)(蒸餾水水代替樣品溶液)的吸光度;Ai為樣品實(shí)驗(yàn)吸光度。)

1.2.5 數(shù)據(jù)處理 本實(shí)驗(yàn)采用IC50值作為評(píng)價(jià)抗氧化能力大小的指標(biāo)。協(xié)同效果的評(píng)價(jià)采用等輻射分析法[12]。具體步驟如下:

(1)選擇合適的IC50值。運(yùn)用Probit回歸分析做各樣品(SS、L-Se-MSC、SEY、Ant和VE)的劑量-效應(yīng)曲線,求得各物質(zhì)單獨(dú)的IC50值。

(2)采用(1)中相同的方法,求得復(fù)配后各組合的IC50 mix。

(3)根據(jù)等效公式計(jì)算IC50add。

IC50add=IC50A/[P1A+R×(P2B+P3C)]

注:式中:R為A、B、C三種抗氧化劑單獨(dú)應(yīng)用時(shí)的效價(jià)比,P1為抗氧化劑A在復(fù)配組中所占的比例;P2為抗氧化劑B在復(fù)配組中所占的比例,P3為抗氧化劑C在復(fù)配組中所占的比例。

(4)采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)來(lái)檢驗(yàn)理論值與實(shí)驗(yàn)值之間的顯著性。

(5)將三種藥物的IC50 mix及95%置信區(qū)間分別繪制在三維坐標(biāo)軸上,兩兩相連成等效相加面,將VEmix∶Antmix∶SEYmix分別為1∶1∶0、1∶1∶1、1∶1∶4、4∶1∶1、1∶4∶1比例測(cè)得的IC50 mix標(biāo)在坐標(biāo)軸上,點(diǎn)的位置由以下公式?jīng)Q定:

Z=SEYC/SEYS+VEC/VES+AntC/AntS

設(shè)SEYC/SEYS,VEC/VES,AntC/AntS是配方中富硒酵母、維生素E和紫蘿卜提取物占各自IC50的分?jǐn)?shù),當(dāng)SEYC/SEYS+VEC/VES+AntC/AntS=1時(shí),為加和作用。當(dāng)SEYC/SEYS+VEC/VES+AntC/AntS>1時(shí)為拮抗作用。若當(dāng)SEYC/SEYS+VEC/VES+AntC/AntS<1時(shí),為協(xié)同作用。

協(xié)同率:組合的協(xié)同率(%)=(抗氧化理論值-抗氧化實(shí)驗(yàn)值)×100/抗氧化理論值。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同形態(tài)硒、維生素E、紫蘿卜提取物在三種模型中抗氧化能力的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)測(cè)定了不同形態(tài)硒(L-Se-MSC、SS、SEY)、VE、Ant在三種抗氧化體系(DPPH,Fe3+還原,ABTS+·)中單獨(dú)的抗氧化活性。由圖1可知,L-Se-MSC和SS表現(xiàn)出的清除DPPH·、ABTS+·和還原Fe3+的能力都較弱,說(shuō)明其體外抗氧化活性較低。這可能是由于L-Se-MSC和SS的抗氧化活性主要依賴于細(xì)胞膜上的酶,當(dāng)Se作為體內(nèi)抗氧化酶活性中心時(shí)能夠產(chǎn)生抗氧化效應(yīng),在體外不能表現(xiàn)出來(lái)[13]。而SEY在生物體內(nèi)能轉(zhuǎn)化成大量的生物硒,故能表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化效應(yīng)。因此實(shí)驗(yàn)選用SEY、VE和紫蘿卜提取物作為組合,探究其抗氧化協(xié)同作用。

圖1 不同抗氧化劑在三種模型中的抗氧化能力Fig.1 The effects of antioxidants on DPPH,Fe3+,ABTS+· models注:A:清除DPPH自由基能力；B:還原 Fe3+能力；C:清除ABTS+能力。

2.2 富硒酵母、維生素E和紫蘿卜提取物在三種模型中抗氧化能力的測(cè)定

由表1可知,不同的模型中,抗氧化物的抗氧化能力是不一樣的,IC50值越大,表示抗氧化能力越弱,IC50值越小,則抗氧化能力越強(qiáng)。在DPPH模型中,VE的IC50值最低,具有最強(qiáng)的抗氧化能力。在Fe3+中,Ant的抗氧化能力最強(qiáng),在ABTS模型中,SEY的抗氧化能力最強(qiáng)。這可能是由于三種模型的抗氧化方法作用機(jī)理不一樣而得到不同的結(jié)果。DPPH模型機(jī)理是在有機(jī)相中自由基接受抗氧化劑的活潑氫或電子而褪色,其抗氧化活性大小與酚羥基官能團(tuán)的數(shù)目、溶劑的極性以及物質(zhì)在溶劑中的溶解度有關(guān)[14]。在DPPH模型中,活性順序?yàn)閂E>Ant>SEY。這可能是因?yàn)閂E和Ant都有酚羥基結(jié)構(gòu),但是Ant為粗提物,花色苷主要成分含量不高,同時(shí)花色苷也是水溶性物質(zhì),在有機(jī)相中的溶解度可能會(huì)使得Ant清除DPPH自由基的能力受到一定的限制。在Fe3+模型中,Fe3+在水相中獲得由抗氧化劑提供的電子,進(jìn)而被還原成Fe2+,測(cè)定抗氧化物質(zhì)基于電子轉(zhuǎn)移的抗氧化能力。在此實(shí)驗(yàn)中VE和Ant擁有高度電子離域的苯環(huán)結(jié)構(gòu),但是SEY 沒有。因此它們的供電子能力為Ant>VE>SEY。ABTS模型機(jī)理是ABTS在適當(dāng)?shù)难趸瘎┳饔孟卵趸葾BTS+·,在抗氧化物存在時(shí)ABTS+·的產(chǎn)生會(huì)被抑制。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,抗氧化能力順序?yàn)镾EY>Ant>VE。研究表明,ABTS法更適用于水溶性抗氧化混合物的測(cè)定[15]。有機(jī)硒富硒酵母的抗氧化活性可能來(lái)自其中的硒蛋白和硒多糖[16],為混合物,而Ant也為混合物只有VE是純物質(zhì)。綜上所述,抗氧化機(jī)理不同,得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此,要通過(guò)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ凸餐u(píng)價(jià)抗氧化物的體外抗氧化能力。

表1 富硒酵母、維生素E和紫蘿卜提取物在三種模型中抗氧化效果分析

Table 1 Effects of Se-enriched yeast,Vitamin E and extract from purple carrots on three anti-oxidant models

抗氧化物DPPH·IC50(μg/mL)Fe3+IC50(μg/mL)ABTS+·IC50(μg/mL)SEY4698±076a5128±056a1502±053cVE1035±041c3667±102b9712±090aAnt2275±097b3008±091c3360±068b

注:IC50值通過(guò)Probit法進(jìn)行曲線擬合求得。a,b,c表示不同抗氧化物質(zhì)種類間的成分及抗氧化活性在0.05 水平上的存在顯著性差異。

2.3 富硒酵母、維生素E、紫蘿卜提取物在3種體外化學(xué)模型中協(xié)同作用分析

表2 3種抗氧化劑復(fù)配后在DPPH模型中協(xié)同作用效果分析

Table 2 Synergistic DPPH free radical scavenging activity of three antioxidants

FR(VEmix∶Antmix∶SEYmix)IC50mix±sVEaddAntaddSEYaddIC50add±s相互作用協(xié)同率(%)1∶1∶01435d±04051811380001655±038?<11331∶1∶12022c±01634575815662669±041??<12421∶1∶43175a±09917337931323684±064?<11384∶1∶11384d±0756903787831852±031??<12531∶4∶12294b±11217315177822472±042<172

表3 3種抗氧化劑復(fù)配后在Fe3+還原模型中協(xié)同作用效果分析

Table 3 Synergistic Fe3+reducing power of three antioxidants

FR(VEmix∶Antmix∶SEYmix)IC50mix±sVEaddAntaddSEYaddIC50add±s相互作用協(xié)同率(%)1∶1∶03393c±045163415040003138±020?>1-811∶1∶13541b±0801089100317093801±015?<1681∶1∶44081a±02654550134194464±028???<1864∶1∶13468bc±02521785018553534±018?<1191∶4∶13337c±02654420058553405±021<130

表4 3種抗氧化劑復(fù)配后在ABTS+·模型中協(xié)同作用效果分析

Table 4 Synergistic ABTS free radical scavenging activity of three antioxidants

FR(VEmix∶Antmix∶SEYmix)IC50mix±sVEaddAntaddSEYaddIC50add±s相互作用協(xié)同率(%)1∶1∶0583a±012486168000656±020??<11721∶1∶1204c±006324112051487±005???<15811∶1∶4330b±017162056100319±008>1﹣344∶1∶1597a±015647056025729±006???<11811∶4∶1312b±013162224025414±021<1246

注:在表2～表4中,IC50值通過(guò) Probit 法進(jìn)行曲線擬合求得。表中的單位均為μg/mL,采用one-way ANOVA分析,a、b、c表示在0.05 水平上的有顯著性差異;理論值和實(shí)際值采用非配對(duì)T檢驗(yàn),***p<0.001,**p<0.01,*p<0.05;VEadd、Antadd、SEYadd 為復(fù)合配方中單一組分抗氧化劑理論上應(yīng)該產(chǎn)生的效果;IC50 mix、IC50add分別為實(shí)驗(yàn)值和理論值;FR為配方質(zhì)量比。

由表2～表4可知,不同比例的復(fù)配組合在同一抗氧化模型中存在差異。協(xié)同效應(yīng)最佳的組合比例分別為:VEmix∶Antmix∶SEYmix=4∶1∶1(DPPH模型)、1∶4∶1(Fe3+模型)、1∶1∶1(ABTS+·模型)。同一模型中,以不同比例復(fù)配后,相同抗氧化因子的抗氧化協(xié)同作用也不同。比如:在DPPH實(shí)驗(yàn)中,5種比例配方的實(shí)際產(chǎn)生的抗氧化協(xié)同效應(yīng)低于理論上所產(chǎn)生的抗氧化協(xié)同效應(yīng)。不同比例混合的抗氧化因子的抗氧化活性不同,可能與各混合物中的植物化學(xué)物含量的不同有關(guān)。例如:阿魏酸、根皮素和維生素E以不同比例混合,其抗氧化相互作用也不同[17]。ABTS模型中,VEmix∶Antmix∶SEYmix為1∶1∶4的IC50 mix值(3.30±0.17)μg/mL,Fe3+還原模型中,VEmix∶Antmix∶SEYmix為1∶1∶0的IC50 mix值(33.93±0.45) μg/mL,兩組的IC50 mix值均大于理論值,表現(xiàn)出抗氧化拮抗作用。ABTS模型中,SEY含量高時(shí)表現(xiàn)出拮抗作用,原因可能是抗氧化物AOH與另外的抗氧化物BOH反應(yīng)生成AOH-BOH,使兩種抗氧化劑的抗氧化活性雙雙降低,導(dǎo)致其從協(xié)同作用向拮抗作用轉(zhuǎn)變,從而表現(xiàn)出拮抗作用。Fe3+還原模型中,當(dāng)樣品中含有還原電位比Fe3+低的抗氧化成分時(shí),會(huì)影響它們的抗氧化相互作用,Ant為混合物,有可能會(huì)產(chǎn)生這樣的結(jié)果。同時(shí),相同的復(fù)配組合在不同模型中存在差異。在DPPH模型中,VE的含量越高,Ant含量越低,其復(fù)配后的抗氧化效應(yīng)越強(qiáng)。這可能是因?yàn)閂E的烷醇環(huán)第六位的羥基是活性基團(tuán),該羥基上的活潑氫可以捕獲活性氧自由基,進(jìn)而能切斷自由基的連鎖反應(yīng),表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗氧化能力,從圖1中也能得到相同的結(jié)論。而在ABTS+·模型中,結(jié)果有所不同。

SEY、VE和Ant聯(lián)合使用后,具有一定的抗氧化協(xié)同作用,且協(xié)同作用的強(qiáng)弱受復(fù)配比例的影響?？寡趸瘏f(xié)同作用機(jī)理的主要核心理論為抗氧化功效因子之間的相互再生作用。大多數(shù)理論認(rèn)為,復(fù)合抗氧化功效因子之間可以通過(guò)相互修復(fù),再生形成氧化還原循環(huán)系統(tǒng),進(jìn)而使復(fù)合抗氧化效果明顯強(qiáng)于單一抗氧化劑[18-19]。紫蘿卜提取物的主要成分是花色苷,花色苷抗氧化能力的強(qiáng)弱與其本身的結(jié)構(gòu)有很大的關(guān)系:苷元母核B環(huán)上的3′,4′鄰二酚羥基具有強(qiáng)的供氫能力,能夠捕獲自由基,具有較強(qiáng)的抗氧化能力;如果在A環(huán)的5,7,8位增加羥基的話可以不同程度的增加花色苷的抗氧化能力[20]?；ㄉ漳芘cVE自由基發(fā)生氫原子轉(zhuǎn)移反應(yīng),使VE再生[21],繼而發(fā)揮抗氧化協(xié)同作用;SEY中的有效物質(zhì)可以與VE交換電子從而使VE含量維持正常水平,并不斷發(fā)揮抗氧化作用[22]。兩種以上的抗氧化功效因子復(fù)合使用時(shí),各種抗氧化劑也可能使體系中產(chǎn)生的游離基相互作用,生成新的酚類化合物繼續(xù)發(fā)揮抗氧化作用,增強(qiáng)體系整體的抗氧化性能[23]。除此之外,也有報(bào)道認(rèn)為[24]多種抗氧化功效因子之間存在基于氧化還原電位差的偶聯(lián)氧化,可以降低直接反應(yīng)的兩種抗氧化功效因子之間的電位落差,使反應(yīng)更容易進(jìn)行。

3 結(jié)論

通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析,發(fā)現(xiàn)抗氧化物質(zhì)之間的協(xié)同抗氧化作用與抗氧化評(píng)價(jià)方法的原理、抗氧化物質(zhì)本身的抗氧化能力、抗氧化物質(zhì)有效濃度等因素有關(guān)。SEY、VE和Ant聯(lián)合使用具有一定的抗氧化協(xié)同作用,且協(xié)同作用的強(qiáng)弱受配方比例的影響,其中協(xié)同效應(yīng)最佳的組合比例分別為:VEmix∶Antmix∶SEYmix=4∶1∶1(DPPH模型)、1∶4∶1(Fe3+模型)、1∶1∶1(ABTS+·模型)。

[1]趙晶,康世良. 健康仔豬口服亞硒酸鈉后血液硒濃度與抗氧化系統(tǒng)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律的研究[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào),2003(06):554-557.

[2]Keck A,Finley J W. Cruciferous vegetables:cancer protective mechanisms of glucosinolate hydrolysis products and selenium[J]. Integrative Cancer Therapies,2004,3(1):5-12.

[3]賈洪峰,賀稚非,劉麗娜. 富硒酵母的研究進(jìn)展[J]. 四川食品與發(fā)酵,2005,41(3):8-12.

[4]姚昭,鄧澤元,李紅艷. 有機(jī)硒、無(wú)機(jī)硒、VE單獨(dú)使用及有機(jī)硒與VE聯(lián)用對(duì)大鼠體內(nèi)抗氧化能力的影響[J]. 食品科學(xué),2013,35(15):272-276.

[5]Niki E. Role of vitamin E as a lipid-soluble peroxyl radical scavenger:invitroandinvivoevidence[J]. Free Radical Biology and Medicine,2014:3-12.

[6]Aaby K,Skrede G,Wrolstad R E. Phenolic composition and antioxidant activities in flesh and achenes of strawberries(Fragaria ananassa)[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,2005,53(10):4032-4040.

[7]Liu R H. Health benefits of fruit and vegetables are from additive and synergistic combinations of phytochemicals[J]. The American journal of clinical nutrition,2003,78(3):517S-520S.

[8]紀(jì)宏新,張興安. 等輻射分析法研究麻醉藥物相互作用進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥物與臨床,2009(06):508-511.

[9]Luszczki J J,Antkiewicz-Michaluk L,Czuczwar S J. Isobolographic analysis of interactions between 1-methyl-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline and four conventional antiepileptic drugs in the mouse maximal electroshock-induced seizure model[J]. European Journal of Pharmacology,2009,602(2):298-305.

[10]孫玥. 食用抗氧化功效因子多組分相互作用評(píng)價(jià)和配方優(yōu)化模型構(gòu)建及應(yīng)用[D]. 南昌:南昌大學(xué),2012.

[11]周瑋婧,隋勇,孫智達(dá),等. 荔枝皮原花青素與VC、VE的協(xié)同抗氧化研究[J]. 食品科學(xué),2012(03):5-8.

[12]陳鴻,潘寧玲,王國(guó)林. 等輻射分析法的原理及應(yīng)用[J]. 國(guó)外醫(yī)學(xué).麻醉學(xué)與復(fù)蘇分冊(cè),2004(05):267-269.

[13]趙晶,康世良,王偉. 肌注亞硒酸鈉后仔豬血硒濃度與抗氧化系統(tǒng)動(dòng)態(tài)變化[J]. 動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2002(06):93-95.

[14]Mishra K,Ojha H,Chaudhury N K. Estimation of antiradical properties of antioxidants using DPPH assay:A critical review and results[J]. Food Chemistry,2012,130(4):1036-1043.

[15]劉薇,邱樂,楊婧,等. ABTS與鄰二氮菲-Fe3+法測(cè)定保健食品抗氧化能力比較分析[J]. 食品工業(yè),2013(03):120-124.

[16]王菲,李夢(mèng)一,葉淑紅,等. 富硒酵母中硒蛋白的抗氧化性質(zhì)[J]. 大連工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2014(05):325-327.

[17]Zhang Q,Huang W,Lv X,et al. Puerarin protects differentiated PC12 cells from H2O2-induced apoptosis through the PI3K/Akt signalling pathway[J]. Cell Biology International,2012,36(5):419-426.

[18]Ip C,Thompson H J,Zhu Z,et al.Invitroandinvivostudies of methylseleninic acid:evidence that a monomethylated selenium metabolite is critical for cancer chemoprevention[J]. Cancer Research,2000,60(11):2882-2886.

[19]呂鋒. 紫蘿卜花色苷的提取、結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性和抗氧化性研究[D]. 南昌:南昌大學(xué),2007.

[20]Cai Y,Ma L,Hou L,et al. Antioxidant effects of green tea polyphenols on free radical initiated peroxidation of rat liver microsomes[J]. Chemistry and Physics of Lipids,2002,120(1):109-117.

[21]Thoo Y Y,Abas F,Lai O,et al. Antioxidant synergism between ethanolic Centella asiatica extracts andα-tocopherol in model systems[J]. Food chemistry,2013,138(2):1215-1219.

[22]Saucier C E D T,Waterhouse A L. Synergetic activity of catechin and other antioxidants[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry,1999,47(11):4491-4494.

[23]Djordjevic A,Spasic S,Jovanovic-Galovic A,et al. Oxidative stress in diabetic pregnancy:SOD,CAT and GSH-Px activity and lipid peroxidation products[J]. Journal of Maternal-Fetal and Neonatal Medicine,2004,16(6):367-372.

[24]Sargis R M,Subbaiah P V. Protection of membrane cholesterol by sphingomyelin against free radical-mediated oxidation[J]. Free Radical Biology and Medicine,2006,40(12):2092-2102.

Antioxidant synergy effectinvitroamong different forms of selenium,Vitamin E and purple carrot extract

ZHENG Shi-lian,PAN Yao,ZHANG Yun-long,DENG Ze-yuan,LI Hong-yan*

(State Key Laboratory of Food Science and Technology,Nanchang University,Nanchang 330047,China)

Theantioxidanteffectsofindividualandcombinedthreekindsofseleniumincludingsodiumselenite(SS),L-Se-methylselenocysteine(L-Se-MSC),Se-enrichedyeast(SEY),VitaminE,anthocyaninextractsofpurplecarrotsweredeterminedbyDPPHradicalscavengingactivity,Fe3+reducingpowerandABTSradicalscavengingactivity.IsobolographicanalysiswasusedtocalculatetheactualantioxidantvalueinIC50 mixandevaluatethesynergisticantioxidanteffectofindividualandcombineddifferentformsselenium,VitaminEandpurplecarrotextract.TheresultsindicatedthatL-Se-MSCandSSpossessedlowantioxidantactivityin vitroantioxidantmodel,whileSEYpossessedhighantioxidantactivitywhichexhibitedsynergisticeffectwithVitaminE,anthocyaninextractsofpurplecarrots.Inthesamemodel,differentcombinationshaddifferenteffects.ThebestratioinDPPHmodelwasVEmix∶Antmix∶SEYmix=4∶1∶1,intheFe3+model,thebestonewasVEmix∶Antmix∶SEYmix=1∶4∶1andVEmix∶Antmix∶SEYmix=1∶1∶1wasthebestoneinABTS+·model.Inthesamecombination,differentfactorsshoweddifferenteffects.Thecombinationofseleniumyeast,vitaminE,andanthocyaninextractsofpurplecarrotshadsynergisticantioxidanteffects.

selenium;VitaminE;purplecarrotextract;antioxidants;synergisticeffect

2016-02-26

鄭時(shí)蓮(1990-)，女，碩士研究生，主要從事天然產(chǎn)物活性方面研究，E-mail:zhengshilian07@163.com。

*通訊作者:李紅艷(1986-)，女，博士，副教授，主要從事天然產(chǎn)物方面的研究,E-mail:lihongyan61@gmail.com。

國(guó)家自然青年科學(xué)基金(31301433)；江西省博士后科研項(xiàng)目(2013KY04)。

TS255.1

A

1002-0306(2016)19-0086-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.19.008