磷酸肽的鈣結(jié)合機制及抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果

黃 海,李八方,曾名湧,*

(1.欽州學(xué)院食品工程學(xué)院,廣西欽州 535011; 2.廣西北部灣特色海產(chǎn)品資源開發(fā)與高值化利用高校重點實驗室,廣西欽州 535011; 3.中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

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磷酸肽的鈣結(jié)合機制及抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果

黃 海1,2,李八方3,曾名湧3,*

(1.欽州學(xué)院食品工程學(xué)院,廣西欽州 535011; 2.廣西北部灣特色海產(chǎn)品資源開發(fā)與高值化利用高校重點實驗室,廣西欽州 535011; 3.中國海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,山東青島 266003)

探討源于鯉魚卵肽(carp egg peptide,CEP)的磷酸肽(isolated phosphopeptide,IPP)的鈣結(jié)合機制及其抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果。通過質(zhì)譜和紅外光譜解析IPP結(jié)合鈣的位點,通過紅外光譜和圓二色譜分析IPP結(jié)合鈣前后的空間結(jié)構(gòu)變化,并通過電鏡觀察IPP抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果。結(jié)果表明,磷酸基團是鈣離子的優(yōu)先結(jié)合部位,1分子IPP能結(jié)合4個鈣離子,羧酸基團未參與鈣離子的結(jié)合。IPP在生理pH下無論是否結(jié)合鈣離子均未形成有序的空間二級結(jié)構(gòu),完全以無序狀態(tài)存在。在磷酸鈣過飽和溶液中,IPP能夠與磷酸根離子競爭與鈣離子的結(jié)合,并吸附到晶核表面,抑制其聚集成結(jié)晶。IPP是通過磷酸基團與鈣結(jié)合,并能有效抑制磷酸鈣結(jié)晶。

鯉魚卵肽,磷酸肽,鈣結(jié)合,結(jié)晶抑制

鈣的吸收主要是在小腸進行,在小腸吸收的鈣約占總吸收鈣的90%[1]。然而由于小腸的弱堿環(huán)境以及食物中存在的磷酸、植酸、草酸會使鈣形成難溶性鹽,導(dǎo)致鈣的吸收利用率低下。目前,國內(nèi)外科研工作者通過酶解、分離方法已從各種食物蛋白質(zhì)中制備了一些具有結(jié)合鈣離子和抑制生成磷酸鈣沉淀活性的肽,如Jiang等從蛋黃中得到與鈣離子結(jié)合能力較強的蛋白肽,其肽鏈中富含Ser、Thr和Asp殘基[2]。Jung等從鱈魚純化出促進Ca2+吸收的活性肽,其肽鏈中的Ser、Thr、Met和Tyr殘基有阻止小腸中的鈣生成磷酸鈣沉淀的功效[3-4]。Nishimoto等從鯉魚中分離出osteocalcin蛋白肽,其氨基酸殘基主要為Thr、Tyr、Gln和Asp[5]。上述研究表明,這些活性肽均富含具有極性尤其是帶電基團側(cè)鏈的氨基酸殘基。然而針對上述活性肽與鈣的結(jié)合機制和抑制磷酸鈣結(jié)晶沉淀的機制還沒有系統(tǒng)研究。

魚卵富含脂質(zhì)、卵黃蛋白、礦物元素、維生素、類胡蘿卜素等營養(yǎng)物質(zhì),但在常規(guī)的加工過程中,魚卵往往被作為下腳料而廢棄。水產(chǎn)加工副產(chǎn)物已經(jīng)有大量的利用研究[6-7],而關(guān)于魚卵的利用研究則較少。作者前期研究表明通過酶解得到的鯉魚卵肽(carp egg peptide,CEP)富含磷酸絲氨酸,鯉魚卵肽-鈣復(fù)合物具有促進體內(nèi)鈣吸收的活性[8-9],從CEP中分離純化得到一條具有較強鈣離子結(jié)合活性的磷酸肽(isolated phosphopeptide,IPP),其含有5個磷酸化的Ser殘基[10]。本論文將對IPP的鈣結(jié)合特性及其抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果進行系統(tǒng)研究,揭示其鈣結(jié)合和抑制磷酸鈣結(jié)晶的機制,為磷酸肽-鈣復(fù)合物類補鈣制劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

CEP:含有91.2%(w/w)的蛋白質(zhì)和0.68%(w/w)的磷,實驗室自制[11];IPP:一級結(jié)構(gòu)為(pS)S(pS)AF(pS)(pS)ELAR,分子量1461 u,上海強耀生物有限公司合成,純度98%以上。

D2O,DCl,NaOD:豐度99.9%,Sigma公司;實驗所用其它試劑級別均為分析純及以上。

ESI-QTOF質(zhì)譜儀 英國Waters公司;JEM-1200EX透射電鏡 日本JEOL公司;MOS450/AF-CD圓二色譜儀 法國Biologic公司;Nicolet iS10傅里葉變換紅外光譜儀 美國Thermo公司;PHS-3C型精密pH計 上海雷磁儀器廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 質(zhì)譜分析 用超純水將IPP配成0.5 mmol/L樣液,加入等體積3 mmol/L CaCl2溶液混合均勻,pH調(diào)至7.0,靜置1 h。取200 μL加入20 μL乙腈混勻進樣。收集200～2000荷質(zhì)比范圍內(nèi)的離子碎片信息。

1.2.2 紅外光譜分析 固體樣品:取IPP分別在兩個條件下與鈣結(jié)合(條件1:肽鈣摩爾比1∶6,pH7.0;條件2:肽鈣摩爾比1∶10,pH10.0),冷凍干燥得到肽-鈣復(fù)合物(IPP-Ca)。在瑪瑙研缽中將樣品與光譜純KBr混合,研磨均勻,使其粒度在2.5 μm以下,用壓片機壓成透明片,置于光路中進行紅外光譜分析。

液體樣品:將樣品用D2O溶解后,冷凍干燥,重復(fù)2次,盡可能去除樣品中的H2O。處理好的樣品用D2O溶解,配成3.5 mmol/L IPP溶液,用DCl和NaOD調(diào)節(jié)溶液pD。加入CaCl2重水溶液,使其與鈣離子結(jié)合,形成IPP-Ca復(fù)合物(pD 7.0,15 mmol/L CaCl2和pD 10.0,50 mmol/L CaCl2)。樣液置于兩片氟化鈣窗片之間進行紅外光譜分析。

1.2.3 圓二色譜分析 用超純水分別配制0.75 mmol/L IPP溶液,調(diào)節(jié)溶液pH,加入CaCl2,使其與鈣離子結(jié)合,形成IPP-Ca復(fù)合物(pH7.0,3 mmol/L CaCl2和pH10.0,10 mmol/L CaCl2)。樣液置于光程為1 mm的石英比色皿中,25 ℃條件下采用圓二色譜儀進行光譜掃描。實驗參數(shù)設(shè)定為:掃描波長190～300 nm,分辨率0.1 nm,帶寬1.0 nm,掃描速度40 nm/min,每個樣品掃描3次,取平均值。

1.2.4 電鏡分析 將待測樣液吸附在銅網(wǎng)上,自然風(fēng)干5～10 min后用磷鎢酸負(fù)染,自然風(fēng)干后置于80 kV透射電鏡上觀察。

1.2.5 磷酸鈣過飽和溶液配制 所有溶液均用超純水配制,防止離子干擾。磷酸鹽緩沖液和CaCl2(含NaCl維持離子強度)溶液分開配制,臨用時磷酸鹽緩沖液、CaCl2和肽混合。體系條件為:25 ℃,初始pH7.4,磷酸鹽60 μmol/L,鈣離子15 μmol/L,離子強度0.15 mol/L。計算可得體系過飽和度(σHAP)為38.3。計算公式為[12]:

Ksp(HAP)是羥基磷灰石晶體的離子積常數(shù),為10-116.8。

1.2.6 pH漂移曲線繪制 將肽加入σHAP為38.3的磷酸鈣過飽和溶液中,使IPP終濃度分別為0.5、2.0、4.0 mol/L,CEP終濃度0.5 mg/mL。用超純水做空白。用pH計實時監(jiān)控體系pH。繪制體系pH隨時間變化的曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 鈣離子結(jié)合位點解析

圖1 IPP與鈣離子結(jié)合的質(zhì)譜圖譜Fig.1 ESI-QTOF-MS spectra of IPP with calcium binding

2.1.2 紅外光譜分析 為了進一步驗證哪些基團參與鈣的結(jié)合,對IPP和IPP-Ca進行紅外光譜分析(圖2),比對譜圖變化情況。化合物中的不同基團由于其分子伸縮振動、變形振動需要的能量不同而在紅外光譜中具有其特征吸收峰。圖譜中主要的特征吸收峰及其表征[13]如表1所示。

圖2 IPP及IPP-Ca復(fù)合物的紅外吸收譜帶Fig.2 Infrared spectra of IPP and IPP-CaA:IPP;B:IPP-Ca(摩爾比1∶6,pH7.0);C:IPP-Ca(摩爾比1∶10,pH10.0)。

Table 1 Specifical IR absorbance peak of IPP and IPP-Ca

波數(shù)(cm-1)特征吸收峰解析3349氨基酸的N-H或羧酸的O-H伸縮振動2162磷酸的PO-H(氫鍵)伸縮振動1658羧基的C=O反對稱伸縮振動1548/1536酰胺C=O反式變形振動1455羧基的O-H面內(nèi)變形1403/1388酰胺C=O順式變形振動1241磷酸P=O伸縮振動1096/1068酰胺的C-N振動1068/1001磷酸P-O-C伸縮振動929/924羧基的O-H面外變形

N-H和O-H以及它們之間締結(jié)形成的氫鍵的伸縮振動會在3600～2800 cm-1區(qū)域形成寬吸收峰。由于IPP分子中含有羧基、羥基、氨基、胍基等基團,在此處有強吸收,形成寬吸收峰。圖2中A 2162 cm-1處是O=P-O-H締結(jié)氫鍵形成的特征吸收峰,但在圖2中B和圖2中C該峰消失,說明磷酸基團與鈣結(jié)合后O=P-O-H中的H被取代[14]。三個圖譜中均觀察到羧基C=O反對稱伸縮振動形成的吸收峰(1658 cm-1),然而,羧基的O-H面內(nèi)變形和面外變形形成的兩個特征峰(1455 cm-1和924 cm-1)卻出現(xiàn)了改變。圖2中B仍保留了這兩個峰,924 cm-1處的峰紅移到929 cm-1,說明分子中的羧基氫在結(jié)合后未被取代,羧基并未參與鈣的結(jié)合,由此可知,在生理pH下即使磷酸基團飽和后鈣也依然不與羧酸根離子結(jié)合,這與質(zhì)譜分析結(jié)果一致。然而,圖2中C的這兩個峰均消失,表明羧基參與了鈣的結(jié)合。由此可知,羧酸是否參與鈣的結(jié)合與pH和肽鈣摩爾比這兩個因素有關(guān)。通過質(zhì)譜及紅外光譜分析證實IPP的磷酸基團參與鈣的結(jié)合,而當(dāng)溶液pH和肽鈣摩爾比等因素發(fā)生改變時羧基也可能參與鈣的結(jié)合。學(xué)者在研究酪蛋白磷酸肽(casein phosphopeptide,CPP)及其特征序列肽(S(p)S(p)S(p)EE)在磷酸鹽緩沖體系下的肽鈣結(jié)合性能時,發(fā)現(xiàn)它們與鈣結(jié)合并不符合P/Ca化學(xué)計量關(guān)系,由此推測CPP可能與鈣離子及無機磷酸形成納米顆粒[15-16],但并未對結(jié)合位點進行系統(tǒng)研究。因此羧基可能在促進肽分子通過“鈣橋”交聯(lián)從而形成納米顆粒的過程中起到一定作用。

酰胺C=O的反式、順式變形振動分別發(fā)生在1548 cm-1和1403 cm-1處,與鈣結(jié)合后位置發(fā)生了偏移。圖2中B這兩處峰分別紅移到1536 cm-1和1388 cm-1處,而在圖2中C 1548 cm-1處的峰卻發(fā)生藍移并與羧酸C=O反對稱伸縮吸收峰(1658 cm-1)發(fā)生部分重疊。1096 cm-1和1001 cm-1分別是酰胺的C-N伸縮振動和磷酸P-O-C伸縮振動產(chǎn)生的特征峰,在與鈣結(jié)合后兩處的峰發(fā)生重疊,并成1068 cm-1的寬峰[14]。

2.2 IPP與Ca結(jié)合前后空間結(jié)構(gòu)的變化

2.2.1 酰胺Ⅰ帶紅外光譜分析 通過紅外光譜法分析蛋白質(zhì)在紅外光譜1700～1600 cm-1處的特征吸收帶(酰胺Ⅰ帶)的變化情況,可得到蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)變化的信息[15]。1683 cm-1處涉及到分子間反平行β折疊結(jié)構(gòu)形成,而1617 cm-1處的β折疊結(jié)構(gòu)形成與分子聚集過程有關(guān)[16-17]。由圖3可知,在生理pH下,無論IPP是否與鈣結(jié)合,其譜圖只在1659 cm-1和1607 cm-1(氨基酸側(cè)鏈振動)處有弱吸收(圖3中A、B),均未觀察到任何有序的二級結(jié)構(gòu),如β折疊和α螺旋,這是由于IPP帶大量負(fù)電荷,由于排斥作用難以形成有序的二級結(jié)構(gòu),分子可能是以無規(guī)卷曲形式存在,而且IPP與鈣離子結(jié)合后結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生改變。在不添加鈣離子的條件下,將IPP的pH調(diào)至10.0,其二級結(jié)構(gòu)依然沒有變化,也呈現(xiàn)無序狀態(tài)(圖3C)。但當(dāng)同時調(diào)節(jié)pH和添加鈣離子時,其譜圖(圖3D)中具有多個吸收峰,分別為1683cm-1(β折疊)、1657 cm-1(β轉(zhuǎn)角)、1637 cm-1(β折疊)和1617 cm-1(β折疊),也未發(fā)現(xiàn)α螺旋結(jié)構(gòu)吸收峰(1651 cm-1或1646 cm-1)[16-19],說明此時IPP的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了從無序到有序的轉(zhuǎn)變。結(jié)合2.1.2的實驗結(jié)果可知,這種轉(zhuǎn)變可能與羧基結(jié)合鈣離子有關(guān)。

圖3 IPP及IPP-Ca的酰胺Ⅰ帶紅外吸收光譜Fig.3 Infrared spectra of amideⅠband ofIPP and IPP-CaA:3.5 mmol/L IPP(pD 7.0);B:3.5 mmol/L IPP-Ca (pD 7.0,15 mmol/L CaCl2);C:3.5 mmol/L IPP(pD 10.0); D:3.5 mmol/L IPP-Ca(pD 10.0,50 mmol/L CaCl2)。

2.2.2 圓二色譜分析 圓二色譜能夠靈敏檢測蛋白質(zhì)二級或三級結(jié)構(gòu)的變化[20]。198 nm附近的正峰和218 nm附近的負(fù)峰是典型的β折疊結(jié)構(gòu)形成的吸收峰,208 nm附近的負(fù)峰是α螺旋結(jié)構(gòu)形成的吸收峰[21-22],198 nm附近的負(fù)峰表明無規(guī)卷曲[21]。如圖4所示,生理pH下的IPP和IPP-Ca以及pH10.0下的IPP的圓二色譜圖(圖4中A～C)均觀察到表征無規(guī)則卷曲的200 nm處負(fù)峰,沒有觀察到任何有序的二級結(jié)構(gòu),這與酰胺Ⅰ帶紅外光譜分析的結(jié)論相一致,進一步確定了IPP在生理條件下是以完全無序的狀態(tài)存在。Wang[23]等用CD色譜發(fā)現(xiàn)合成的骨橋蛋白(osteopontin,OPN)的高度保守序列(OPN93-106)的肽(DDVDDTDDSHQSDE)不存在任何的二級結(jié)構(gòu),呈完全無序的結(jié)構(gòu)(198 nm負(fù)峰),在pH7.0與鈣結(jié)合后二級結(jié)構(gòu)沒有顯著差異,這與本研究結(jié)果一致。這可能是由于IPP和OPN93-106均是高度荷電,分子內(nèi)及分子間的排斥作用使得分子難以形成α螺旋和β折疊結(jié)構(gòu)。同樣,當(dāng)同時調(diào)節(jié)pH和添加鈣離子時,其圓二色譜圖(圖4中D)出現(xiàn)了典型的β折疊結(jié)構(gòu)特征峰(198 nm正峰和218 nm負(fù)峰),這也與酰胺Ⅰ帶紅外光譜分析結(jié)果相吻合。

圖4 IPP及IPP-Ca的圓二色譜圖Fig.4 CD spectra of IPP and IPP-Ca A:0.75 mmol/L IPP(pH7.0);B:0.75 mmol/L IPP-Ca(pH7.0,3 mmol/L CaCl2);C:0.75 mmol/L IPP(pH10.0); D:0.75 mmol/L IPP-Ca(pH10.0,10 mmol/L CaCl2)。

2.3 抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果

2.3.1 pH漂移曲線 25 ℃時,當(dāng)初始體系pH低于6.1,磷酸鈣過飽和溶液中磷酸(氫)根與鈣離子結(jié)合形成二水合磷酸氫鈣結(jié)晶,而當(dāng)初始體系pH高于6.7則形成Ca8H(PO4)3·5H2O結(jié)晶,并逐步轉(zhuǎn)化成羥基磷灰石晶體Ca10(PO4)6(OH)2(HAP)[24]。按照經(jīng)典成核理論,磷酸鈣過飽和溶液中磷酸(氫)根與鈣離子首先自發(fā)成核形成晶核或晶胚,進而聚集形成無定形顆粒(ACP),然后聚集形成結(jié)晶。則當(dāng)無定形態(tài)磷酸鈣開始結(jié)晶,伴隨著pH的快速下降。

圖5 磷酸鈣過飽和溶液pH漂移曲線Fig.5 pH drift curve of calcium phosphate supersaturated solutionA:空白;B:添加0.5 mg/ml CEP; C～E:分別添加0.5,2.0,4.0 μmol/L IPP。

由圖5可以看出,所有濃度的IPP對磷酸鈣的成核階段和結(jié)晶形成、增長階段均有顯著抑制作用,且隨著濃度升高抑制作用增強。許多研究表明,磷酸基團是蛋白/肽抑制體內(nèi)草酸鈣和磷酸鈣沉淀所必需的,因為磷酸基團能吸附到Ca-P簌和ACP的表面,顯著增大成核階段的表面活化能,從而抑制其聚集、結(jié)晶,也能吸附到結(jié)晶表面抑制其增大[25-26]。如OPN是人體尿液中存在的天然蛋白,主要作用是抑制尿液中草酸鈣結(jié)晶,防止腎結(jié)石。OPN富含天冬氨酸,中間連有磷酸化絲氨酸,實驗證明其不僅能抑制草酸鈣結(jié)晶,還能抑制磷酸鈣結(jié)晶,而磷酸基團是必不可少的。由此可知,IPP對磷酸鈣結(jié)晶的抑制作用也是由于磷酸基團對ACP及晶體表面的吸附、包裹作用。CEP對成核不但無抑制作用,反而有促進作用,表現(xiàn)在誘導(dǎo)時間的縮短,然而在結(jié)晶形成和增長階段卻表現(xiàn)出明顯的抑制作用。這可能是由于CEP是混合蛋白且濃度較大,非活性蛋白肽分子在體系中充當(dāng)晶核從而促進了成核。然而活性組分(磷酸肽)對晶核、ACP及結(jié)晶的吸附作用又抑制了結(jié)晶形成和增大。

2.3.2 電鏡分析 電鏡圖片(圖6)也清楚顯示過飽和溶液在沒有添加IPP或CEP時,ACP迅速聚集、定向,6 h后明顯形成結(jié)構(gòu)致密的單晶,此時也正好對應(yīng)pH漂移曲線中pH降至6.6,12 h可觀察到微量沉淀生成。當(dāng)在體系中添加0.5 μmol/L的IPP時,能使Ca-P簌和ACP大小穩(wěn)定在納米階段,形成納晶,大大減緩了結(jié)晶的形成和增大,直至48 h后形成明顯的結(jié)晶。由于CEP是含有活性肽組分的混合肽,也表現(xiàn)出抑制磷酸鈣結(jié)晶的作用。當(dāng)體系中添加0.5 mg/mL CEP時,直至12 h后形成明顯結(jié)晶。

圖6 磷酸鈣過飽和溶液電鏡圖Fig.6 TEM image of calcium phosphate supersaturated solutionA:添加0.5 μmol/L IPP,24 h;B:添加0.5 mg/mL CEP,6 h; C:空白,6 h;D:添加0.5 μmol/L IPP,48 h; E:添加0.5 mg/mL CEP,12 h;F:空白,12 h。

為進一步確定結(jié)晶的形成,對上述在電鏡觀察中認(rèn)為形成結(jié)晶的樣品(圖6中的D、E、F樣品)進行晶體衍射觀察,結(jié)果如圖7所示。沒有添加IPP和CEP的空白磷酸鈣過飽和體系,觀察到典型的單晶衍射現(xiàn)象,說明晶體形成。在添加IPP的體系中,則觀察到的是典型的多晶衍射現(xiàn)象,這說明IPP在晶體形成中吸附到ACP及晶體表面,阻礙結(jié)構(gòu)更為致密的單晶形成。由于CEP的活性組分含量不高,與鈣結(jié)合及吸附在ACP及晶體表面能力不如IPP,所以在添加CEP的體系中觀察到單晶和多晶衍射共存現(xiàn)象。

圖7 磷酸鈣晶體衍射圖Fig.7 Crystal diffraction image of calcium phosphate 注：A:IPP;B:CEP;C:空白。

3 結(jié)論

磷酸肽中的磷酸基團是鈣離子的優(yōu)先結(jié)合部位,1分子IPP能結(jié)合4個鈣離子,生理pH下羧酸基團未參與鈣離子的結(jié)合。IPP在生理pH下無論是否結(jié)合鈣離子均未形成有序的空間二級結(jié)構(gòu),完全以無序狀態(tài)存在。IPP通過與磷酸根競爭與鈣結(jié)合,有效抑制磷酸鈣過飽和溶液的成核,并能吸附到晶核、ACP及晶體表面,有效抑制其聚集成結(jié)晶及結(jié)晶的增長。本論文揭示了磷酸肽與鈣離子的結(jié)合機制,并證明其具有抑制磷酸鈣結(jié)晶的效果。

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Mechanism of binding Ca2+and the effect of inhibiting calcium phosphate crystal formation of phosphopeptide

HANG Hai1,2,LI Ba-fang3,ZENG Ming-yong3,*

(1.College of Food Engineering,Qinzhou University,Qinzhou 535011,China; 2.Guangxi Colleges and Universities Key Laboratory of Development and High-value Utilization of Beibu Gulf Seafood Resource,Qinzhou 535011,China; 3.College of Food Science and Engineering,Ocean University of China,Qingdao 266003,China)

ToinvestigatethemechanismofbindingCa2+andtheeffectofinhibitingcalciumphosphatecrystalsformationofisolatedphosphopeptide(IPP)derivedfromcarpeggpeptide(CEP).TheCa2+bindingsitesofIPPweredeterminedbymassspectrometry(MS)andFouriertransforminfraredspectroscopy(FTIR).ThechangeofitsspacestructureafterbindingCa2+wasstudiedthroughFTIRandcirculardichroismspectroscopy(CD).TheeffectofIPPinhibitingcalciumphosphatecrystalformationwasobservedbyelectronmicroscope.TheresultsshowedthatphosphatehadtheprioritytobindingCa2+.OnemoleofIPPcouldbindfourmolesofCa2+andcarboxylgroupcouldnotbindcalcium.RegardlessofthepresenceofCa2+,IPPwaspresentinthestateofunordedstructureinsolutionunderphysiologicalconditions,withoutanyorderedsecondarystructures.Inthesupersaturatedsolutionofhydroxylapatite(HAP),IPPcouldcompetewithphosphatetobindCa2+andadsorbtothesurfacesofcrystalnucleus,whichinhibitedthenuleationofcalciumphosphateanditsaggregationtocrystal.

carpeggpeptide;phosphopeptide;bindingCa2+;crystalinhibition

2016-04-08

黃海(1977- )，男，博士，副教授，研究方向：水產(chǎn)品加工及資源利用，E-mail:jxfifagoal@163.com。

*通訊作者:曾名湧(1965- )，男，博士，教授，研究方向：水產(chǎn)品高值化利用，E-mail:mingyz@ouc.edu.cn。

國家自然科學(xué)基金(31101379)；國家星火計劃項目(2012GA740048)。

TS254.1

A

1002-0306(2016)19-0062-06

10.13386/j.issn1002-0306.2016.19.004