豬圓環(huán)病毒2型抗體水平及其野毒感染的檢測與分析

孫華偉，張敬峰，趙永前，茅愛華，張曉曦

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術重點實驗室，江蘇省農(nóng)業(yè)科學院動物疫病診斷檢測中心，江蘇南京210014）

豬圓環(huán)病毒2型抗體水平及其野毒感染的檢測與分析

孫華偉，張敬峰，趙永前，茅愛華，張曉曦

（江蘇省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所，農(nóng)業(yè)部獸用生物制品工程技術重點實驗室，江蘇省農(nóng)業(yè)科學院動物疫病診斷檢測中心，江蘇南京210014）

為研究和探索同一頭豬圓環(huán)病毒野毒（PCV2）感染與其PCV2抗體水平之間的關系，對江蘇省農(nóng)業(yè)科學院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2015年第3季度接診的43頭活豬分別采用PCR方法和ELISA方法進行PCV2病原和PCV2抗體的檢測。結果顯示：43頭接診活豬的PCV2病原陽性率為65.1%（28/43），PCV2抗體陽性率為100%，89.3%（25/28）的PCV2病原陽性豬的PCV2抗體S/P值≥1.6，83.3%（25/30）的PCV2抗體S/P值≥1.6的豬為PCV2病原陽性，76.9%（10/ 13）的PCV2抗體S/P值＜1.6的豬為PCV2病原陰性。檢測結果表明：當檢測豬只的PCV2抗體S/P值≥1.6時，存在PCV2野毒感染的可能性較大。此結果為江蘇省PCV2的有效防控提供了數(shù)據(jù)參考，具有臨床應用價值。

豬圓環(huán)病毒2型；抗體；PCR；檢出率；分析

豬圓環(huán)病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）引起的豬圓環(huán)病毒相關疾病（PCVAD）是危害當今全球養(yǎng)豬生產(chǎn)最主要的免疫抑制性疾病。目前PCV2在各地豬場內感染十分普遍，其感染率可高達96%以上[1]。通過檢測和分析同一頭豬的PCV2抗體水平與PCV2病原檢出率之間的相關性，比分析群體中不同豬只的PCV2抗體水平與PCV2病原檢出率之間的相關性更有說服力。由于在豬場臨床實際生產(chǎn)中，對豬只進行活體采樣檢測病原比較困難，遂對江蘇省農(nóng)業(yè)科學院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2015年第3季度接診的43頭活豬在剖殺前進行前腔靜脈采血檢測PCV2抗體，并在剖殺后采集相關組織樣品檢測PCV2病原，以期分析和研究同一頭豬的PCV2抗體水平與PCV2病原檢出率之間的關系。具體報告如下。

1 材料與方法

1.1 檢測時間與檢測地點

PCV2抗體檢測和PCV2病原檢測于2015年9月在江蘇省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所動物疫病診斷檢測中心實驗室進行。

1.2 主要試劑及儀器

PCV2抗體檢測試劑盒（PCV2 Ab）購自韓國JBT公司；基因組提取試劑盒等購自上海Sangon公司；酶標儀型號為寶特ExL800，美國寶特公司生產(chǎn)；冷凍離心機型號為Centrifuge5424R，產(chǎn)自德國；各種規(guī)格移液器，購自德國Eppendorf公司；恒溫箱水浴鍋等。

1.3 方法

嚴格按照JBT公司的試劑盒說明書要求進行相關操作。結果判定：樣品抗體S/P值≥0.4，判為PCV2抗體陽性，樣品抗體S/P值＜0.3，判為PCV2抗體陰性，介于兩者之間為可疑。應用PCR檢測試劑盒對病料樣品進行DNA的抽提、擴增并經(jīng)瓊脂糖電泳，檢測PCV2核酸。

2 結果與分析

2.1 PCV2抗體檢測結果

由表1可知，江蘇省農(nóng)業(yè)科學院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2015年第3季度接診的43頭活豬的PCV2抗體陽性率為100%；抗體S/P平均值為1.62，且主要集中在1.6～2.2，占檢測總數(shù)的62.8%（27/43）；69.8%（30/43）的臨床門診接診豬只PCV2的抗體S/P值≥1.6，遠遠超過抗體陽性的臨界值；即檢測豬只的PCV2抗體陽性率和抗體平均值均處于較高水平。

表1 PCV2抗體檢測結果

2.2 PCV2病原檢測結果

由表2可知，江蘇省農(nóng)業(yè)科學院動物疫病診斷檢測中心臨床門診2015年第3季度接診的43頭活豬的PCV2病原陽性率為65.1%（28/43），即超過一半的臨床門診接診豬只存在PCV2的感染。

表2 PCV2病原檢測結果

2.3 同一頭豬的PCV2抗體水平與PCV2病原檢測結果

由表3和圖1可知，當檢測豬只的PCV2抗體S/P值≥1.6時，該豬為PCV2病原陽性率高達83.3%，而當測豬只的PCV2抗體S/P值＜1.6時，該豬只存在PCV2感染的可能性僅為23.1%，二者差異極顯著（P＜0.01），即二者存在較強的相關性。由于本次檢測的臨床接診豬均為PCV2抗體陽性，未能對PCV2抗體陰性豬進行PCV2病原的檢測和分析。同時，由于本次檢測的豬只均為發(fā)病豬，檢測結果可能與豬場大群采樣豬只的檢測結果存在一定的差異，但能從一個側面說明，豬群中PCV2抗體S/P值≥1.6的豬只所占比例越大，豬群存在PCV2野毒感染的可能性就越大，具有臨床應用價值。

圖1 同一頭豬的PCV2抗體水平與PCV2病原檢測結果

3 討論

首先，多數(shù)研究人員對于PCV2進行的流行病學調查和研究大多是對不同豬只進行PCV2抗體和PCV2病原的檢測，對同一頭豬同時進行PCV2抗體和PCV2病原檢測的報道很少，而對同一頭豬進行上述兩項檢測，更有臨床實際應用價值。

其次，不同廠家的PCV2抗體ELISA檢測試劑盒會出現(xiàn)不同的結果，因此根據(jù)檢測豬只的PCV2抗體水平進行分析時，需注意所使用的PCV2抗體檢測試劑盒。

最后，在本次的檢測中發(fā)現(xiàn)部分散養(yǎng)戶對PCV2的疫苗免疫不夠重視，認為PCV2疫苗免與不免無所謂，其實這種想法是非常錯誤的。PCV2的長期存在會導致宿主體液免疫反應能力降低，從而造成豬體免疫功能受到抑制或紊亂[2]。司興奎等通過建立PCV2人工感染模型證實了PCV2感染可在一定程度上抑制豬瘟疫苗特異性的抗體產(chǎn)生，可以導致免疫豬的特異性抗體水平低下，血清抗體轉陽性率下降[3]。相關研究還證實了PCV2感染對偽狂犬病疫苗的體液免疫應答也有一定程度的抑制作用[4]。PCV2感染是嚴重影響豬瘟、偽狂犬病等疫苗免疫效果或免疫不確實的重要原因之一[5]。因此，對于PCV2陽性豬場及時進行PCV2疫苗的免疫是必要的[6]。

[1]甘孟侯，楊漢春.中國豬病學[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2005：440-460.

[2]Darwich L,Segals J,DomingoM,et a1.Changes in CD4+,CD8+, CD4-,CD8-and immunoglobulin M-positive peripheral blood mononuclear cells of post-weaning multisystemic wasting syndrome affected pigs and age-matched uninfected wasted and healthy pigs correlate with lesions and porcine circovirus type2 load in lymphoid tissues[J].Clin Diagn Lab Immunol,2002,9(2)：236-242.

[3]司興奎，郭鑫，楊漢春.豬圓環(huán)病毒2型感染對豬瘟疫苗體液免疫應答的影響[J].中國獸醫(yī)學報，2009，29（7）：826-829.

[4]司興奎，張濟培，陳建紅，等.豬圓環(huán)病毒2型感染對偽狂犬疫苗免疫應答的影響[J].中國預防獸醫(yī)學報，2010，32（1）：61-64.

[5]管亮，華耀，施雷，等.種豬群豬圓環(huán)病毒病的凈化技術研究[J].動物醫(yī)學進展，2015，36（7）：57-62.

[6]孫華偉，張敬峰，趙永前，等.一起斷奶仔豬副傷寒與圓環(huán)病毒病混合感染的成功診治[J].養(yǎng)豬，2015（2）：119-120.

（編輯：郭玉翠）

每天曬5分鐘太陽

防曬是很多人尤其是女性的每日必備“工作日程”。不過紫外線也不是毫無益處，皮膚合成維生素D就需要紫外線幫助。而維生素D促進鈣質吸收，能影響到骨骼強度，這點對中老年人尤其重要。

日本國立環(huán)境研究所和東京家政大學的聯(lián)合研究小組做過一項研究，結果顯示，即使是陽光最弱時，也僅需曬上不到5分鐘的太陽即可滿足人體維生素D合成的需要。研究結果還顯示，要達到造成曬傷甚至誘發(fā)皮膚癌風險程度，曬太陽的時長遠比滿足人體合成維生素D數(shù)量所需時長多出4～6倍。所以，夏季外出做好防曬工作很重要。但就是皮膚暴露在陽光下曬個十來分鐘，也不大會對人體健康造成實質性傷害，反而有利于人體合成所需維生素D。

（轉自良友周報[N]，2015-08-11）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)01-0124-02

2015-12-16

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新資金[編號：CX（14）4049]

孫華偉（1981-），男，江蘇南京人，助理研究員，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，碩士，主要從事豬病的臨床診斷及重大疾病流行規(guī)律、診斷、監(jiān)測和控制技術研究.E-mail：sunhuawei66@163.com