豬血清中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2發(fā)育性變化研究

楊雪梅，顧以韌，曾凱，陶璇，梁艷，楊躍奎，鐘志君，陳曉暉，呂學(xué)斌

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都610066；2.動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都610066）

遺傳育種

豬血清中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2發(fā)育性變化研究

楊雪梅1，2，顧以韌1，2，曾凱1，2，陶璇1，2，梁艷1，2，楊躍奎1，2，鐘志君1，2，陳曉暉1，2，呂學(xué)斌1，2

（1.四川省畜牧科學(xué)研究院，四川成都610066；2.動(dòng)物遺傳育種四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，成都610066）

采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法檢測(cè)了不同體重梯度的川藏黑豬配套系和杜長(zhǎng)大豬血清中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的含量變化，并分析其與肌內(nèi)脂肪含量的關(guān)系。結(jié)果表明：川藏黑豬在90 kg、110 kg和130 kg體重時(shí)血清中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量分別為56.33、54.51和54.28 μg/L，肌內(nèi)脂肪含量分別為3.72%、4.41%和4.96%；杜長(zhǎng)大豬血清中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量則分別為47.28、49.11和47.82 μg/L，肌內(nèi)脂肪含量分別為2.00%、2.50%和2.61%，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2相同豬種不同體重間和110 kg、130 kg體重不同豬種間差異均不顯著，90 kg體重不同豬種間差異顯著（0.01＜P＜0.05）。相關(guān)性分析顯示，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2與肌內(nèi)脂肪含量呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），提示葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2可能是通過血液來實(shí)現(xiàn)對(duì)豬肌內(nèi)脂肪的整體調(diào)控。

川藏黑豬配套系；杜長(zhǎng)大豬；肌內(nèi)脂肪含量；葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2

葡萄糖是大多數(shù)生物獲取能量的主要來源。維持血糖穩(wěn)定對(duì)于哺乳動(dòng)物的代謝和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定來說至關(guān)重要。所有組織中，尤其是大腦細(xì)胞，需要葡萄糖的持續(xù)穩(wěn)定供應(yīng)，如果血液中葡萄糖濃度過低就會(huì)引起驚厥，喪失意識(shí)等反應(yīng)，嚴(yán)重的話可能引起腦部不可逆的損傷[1]。大多數(shù)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞通過協(xié)同擴(kuò)散的方式來轉(zhuǎn)運(yùn)糖類，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族蛋白參與這一過程，它是一類介導(dǎo)葡萄糖攝取的膜蛋白。肌內(nèi)脂肪含量是豬肉嫩度和食用品質(zhì)的重要決定因素，豬肉產(chǎn)品中大部分的揮發(fā)性風(fēng)味成分如直鏈醛、醇、烴和酮類也主要是由肌內(nèi)脂肪加熱時(shí)產(chǎn)生的[2]，是衡量豬肉品質(zhì)的一個(gè)重要指標(biāo)。

本研究以四川省畜牧科學(xué)研究院培育的優(yōu)質(zhì)豬配套系—川藏黑豬和瘦肉型的杜長(zhǎng)大豬為研究對(duì)象，采用ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）方法測(cè)定其90 kg、110 kg和130 kg體重梯度時(shí)血清樣本中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量，并研究其含量與肌內(nèi)脂肪含量的關(guān)系，以揭示不同豬種血清中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的發(fā)育性變化規(guī)律及其對(duì)肌內(nèi)脂肪沉積的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物及采樣

試驗(yàn)豬采用的川藏黑豬配套系以及外三元杜長(zhǎng)大豬均由四川省畜牧科學(xué)研究院科研實(shí)驗(yàn)豬場(chǎng)提供，于2013年在四川省畜牧科學(xué)研究院科研實(shí)驗(yàn)豬場(chǎng)進(jìn)行試驗(yàn)。隨機(jī)挑選川藏黑豬和杜長(zhǎng)大豬各12頭（每個(gè)梯度4頭），共計(jì)24頭，設(shè)置90 kg、110 kg和130 kg 3個(gè)體重梯度。所有試驗(yàn)豬于同一時(shí)間開始組建群體，35日齡斷奶，采用相同營養(yǎng)水平和飼喂方式，達(dá)到要求體重時(shí)進(jìn)行屠宰，屠宰前停食24 h，自由飲水。采集前腔靜脈血，室溫放置15 min后離心10 min，吸取血清。采集倒數(shù)3～4肋骨間對(duì)應(yīng)處的背最長(zhǎng)肌樣品進(jìn)行肌內(nèi)脂肪含量測(cè)定。

1.2 肌內(nèi)脂肪含量測(cè)定

屠宰后采集倒數(shù)3～4肋骨間背最長(zhǎng)肌樣品10 g左右，樣品處理和操作嚴(yán)格按照豬肌肉品質(zhì)測(cè)定技術(shù)規(guī)范（NY/T 821—2004）進(jìn)行，采用全自動(dòng)快速索氏抽提儀（瑞士，Buchi）進(jìn)行抽提，抽提儀程序設(shè)置為萃取2 h，淋洗5 min，干燥20 min。每個(gè)樣品重復(fù)2次。

1.3 ELISA測(cè)定葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量

血清中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量的測(cè)定嚴(yán)格按照豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2 ELISA試劑盒操作說明進(jìn)行：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔，在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中準(zhǔn)確加樣50 μL，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40 μL，然后再加待測(cè)樣品10 μL（樣品最終稀釋度為5倍），用封板膜封板后置37℃溫育30 min，小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加入酶標(biāo)試劑50 μL（空白孔除外），37℃溫育30 min，再洗板5次后分別加入顯色劑A和B各50 μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 min后加終止液50 μL，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色）。在加終止液后15 min內(nèi)用450 nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值），每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)。以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

運(yùn)用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，均數(shù)間的比較用SPSS 13.1的TTest和Pearson Correlation程序進(jìn)行顯著性和相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 肌內(nèi)脂肪含量

由表1可知，同一品種不同體重梯度間，肌內(nèi)脂肪含量隨著屠宰體重的增加而升高。川藏黑豬90 kg、110 kg和130 kg體重梯度時(shí)的肌內(nèi)脂肪含量分別為3.72%、4.41%和4.96%，其中90 kg與110 kg梯度間肌內(nèi)脂肪含量差異達(dá)顯著水平（P＜0.05），與130 kg梯度間肌內(nèi)脂肪含量差異極顯著（P＜0.01），而110 kg與130 kg梯度間肌內(nèi)脂肪含量差異不顯著（P＞0.05）；杜長(zhǎng)大豬90 kg、110 kg和130 kg梯度時(shí)肌內(nèi)脂肪含量分別為2.00%、2.50%和2.61%，各體重梯度間肌內(nèi)脂肪含量差異均不顯著（P＞0.05）。相同體重梯度不同豬種間，90 kg和110 kg梯度時(shí)的兩豬種間的肌內(nèi)脂肪含量差異均達(dá)顯著水平（P＜0.05），而130 kg梯度時(shí)兩豬種間肌內(nèi)脂肪含量差異極顯著（P＜0.01）。

表1 川藏黑豬和杜長(zhǎng)大豬不同體重梯度的肌內(nèi)脂肪變化

2.2 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量

由表2可知，川藏黑豬90 kg、110 kg和130 kg梯度時(shí)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量分別為56.33、54.51和54.28 μg/L，杜長(zhǎng)大豬90 kg、110 kg和130 kg的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量分別為47.28、49.11和47.82 μg/L，品種內(nèi)不同體重梯度間差異均不顯著（P＞0.05）。不同豬種間，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量在90 kg體重梯度時(shí)均表現(xiàn)為川藏黑豬高于杜長(zhǎng)大豬，差異顯著（0.01＜P＜0.05），110 kg和130 kg體重間差異不顯著。

表2 川藏黑豬和杜長(zhǎng)大豬不同體重梯度的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2變化

2.3 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2水平與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān)性分析

相關(guān)性分析表明，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2水平與肌內(nèi)脂肪含量的Pearson相關(guān)系數(shù)為0.584（表3），呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01）。

表3 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2與肌內(nèi)脂肪含量的相關(guān)性分析（n=4）

3 討論

3.1 肌內(nèi)脂肪含量對(duì)肉質(zhì)的影響

肉質(zhì)受很多因素的影響，其中肌內(nèi)脂肪含量對(duì)肉的感官品質(zhì)、加工品質(zhì)、營養(yǎng)品質(zhì)以及風(fēng)味的影響較為顯著，是肉質(zhì)的重要決定因素之一。肌內(nèi)脂肪在一定的含量范圍內(nèi)，肌肉中的脂肪越多，則肉的多汁性越好[3]。先前的研究表明，中國地方豬種與外種豬相比具有肉質(zhì)優(yōu)勢(shì)一個(gè)重要原因就是肌內(nèi)脂肪含量更加豐富，一般高出2個(gè)百分點(diǎn)左右[4]。而在不同豬肉的專家小組主觀評(píng)定中，含有我國地方豬種血緣的雜種豬肉更加細(xì)嫩多汁、鮮香味濃，口感優(yōu)于外種豬[5]。川藏黑豬配套系是四川省畜牧科學(xué)研究院采用現(xiàn)代遺傳育種技術(shù)，利用國內(nèi)外兩類優(yōu)質(zhì)遺傳資源培育而成的優(yōu)質(zhì)豬配套系。本研究結(jié)果顯示兩豬種的肌內(nèi)脂肪含量均隨體重的增加而升高，川藏黑豬配套系的肌內(nèi)脂肪沉積能力顯著高于杜長(zhǎng)大豬，表明川藏黑豬配套系的口感和風(fēng)味比杜長(zhǎng)大豬更佳，肉質(zhì)更好。

3.2 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量對(duì)肌內(nèi)脂肪沉積的影響

肌內(nèi)脂肪沉積是反映豬肉質(zhì)優(yōu)良的一個(gè)重要指標(biāo)，本研究就肌內(nèi)脂肪含量與葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的關(guān)系進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，豬血清中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2含量在相同豬種不同體重梯度間無顯著差異，在不同豬種間，表現(xiàn)為川藏黑豬的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2水平高于杜長(zhǎng)大豬，在90 kg體重梯度時(shí)差異顯著，110 kg、130 kg體重梯度時(shí)差異不顯著，與此相對(duì)應(yīng)的是川藏黑豬配套系的肌內(nèi)脂肪含量高于杜長(zhǎng)大豬，相關(guān)性分析表明，豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2水平與肌內(nèi)脂肪含量呈正相關(guān)（P=0.584）。葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2對(duì)脂肪代謝具有重要的調(diào)控功能，無論體內(nèi)或體外的試驗(yàn)均證明，血液循環(huán)中游離脂肪酸對(duì)葡萄糖刺激的胰島素分泌有重要的作用，游離脂肪酸升高會(huì)增加葡萄糖刺激的胰島素分泌，因此，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2能間接反映豬肌內(nèi)脂肪含量。我們推測(cè)川藏黑豬配套系和杜長(zhǎng)大豬的肌內(nèi)脂肪沉積受到血液中的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2的調(diào)控，也說明豬肌內(nèi)脂肪的沉積與其在血清中含量密切相關(guān)。

本研究通過對(duì)不同豬種血清中葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2水平的發(fā)育性變化及其與肌內(nèi)脂肪沉積關(guān)系的研究，初步揭示了葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2可能通過血液完成對(duì)豬肌內(nèi)脂肪沉積的調(diào)控，為深入研究豬脂肪沉積能力的形成機(jī)理提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，并有助于促進(jìn)對(duì)人類肥胖的研究。

[1]江誠，謝俊，陳海峰.葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2015，34（7）：1372-1377.

[2]黃業(yè)傳，賀稚非，李洪軍，等.皮下脂肪和肌內(nèi)脂肪對(duì)豬肉風(fēng)味的作用[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，44（10）：2118-2130.

[3]陳國順.子午嶺野家雜種豬和合作豬肉質(zhì)特性比較及風(fēng)味揮發(fā)性成分的提取與分析[D].甘肅：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004.

[4]張永泰.中國地方豬種的肉質(zhì)優(yōu)勢(shì)[J].養(yǎng)豬，2003（2）：50.

[5]孫玉民，羅明.畜禽肉品學(xué)[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1993：300.

（編輯：郭玉翠）

午睡不宜超過40分鐘

【俄羅斯連塔網(wǎng)3月24日?qǐng)?bào)道】題：午睡超過40分鐘對(duì)健康不利

午睡時(shí)間過長(zhǎng)可能導(dǎo)致代謝綜合征，例如胰島素敏感性下降。美國醫(yī)學(xué)研究人員將在第65屆美國心臟病學(xué)會(huì)年會(huì)上通報(bào)上述研究結(jié)果。

午睡超過40分鐘將大大增加與代謝紊亂相關(guān)的疾病的發(fā)病率，導(dǎo)致血壓、血糖和膽固醇水平上升，使腰部更容易堆積脂肪。

醫(yī)學(xué)專家通過對(duì)21次試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行綜合分析，得出了白天過于疲倦或嗜睡與代謝紊亂有關(guān)的結(jié)論。這21次試驗(yàn)總計(jì)有307 237名亞洲人和歐洲人參加，是該領(lǐng)域全球范圍內(nèi)規(guī)模最大的一次研究。

專家們想知道試驗(yàn)參加者是否午睡、午睡時(shí)間多長(zhǎng)，隨后將收集到的數(shù)據(jù)與反映人體健康狀況的醫(yī)學(xué)資料（2型糖尿病和肥胖癥等代謝綜合征患者的病史）相比較。

結(jié)果顯示，午睡時(shí)間與患代謝綜合征的風(fēng)險(xiǎn)存在關(guān)聯(lián)。午睡時(shí)間少于40分鐘的人，患代謝綜合征的幾率較低；午睡時(shí)間超過1.5小時(shí)的人，患這類疾病的幾率提高50%。（不過，午睡時(shí)間少于30分鐘的人，患代謝綜合征的幾率降低得并不明顯。）

本次研究并未發(fā)現(xiàn)午睡時(shí)長(zhǎng)與肥胖之間有直接關(guān)聯(lián)。但既然午睡時(shí)長(zhǎng)與出現(xiàn)代謝綜合征的風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)聯(lián)，而代謝綜合征與肥胖有關(guān)聯(lián)，這就意味著午睡時(shí)間過長(zhǎng)可間接引起肥胖。

此前，醫(yī)學(xué)專家也曾發(fā)現(xiàn)，午睡時(shí)間超過1小時(shí)會(huì)加大罹患心血管疾病和糖尿病的風(fēng)險(xiǎn)。

（轉(zhuǎn)自參考消息[N]，2016-03-25）

The Research on Developmental Changes of Glucose Transporter Type 2 in Serum of Pigs

YANGXuemei1，2,GUYiren1，2,ZENGKai1，2,TAOXuan1，2,LIANGYan1，2,YANGYuekui1，2, ZHONGZhijun1，2,CHENXiaohui1，2,LVXuebin1，2
(1.Sichuan Animal Science Academy,Chengdu 610066,China; 2.Animal Breeding and Genetics Key Laboratory of Sichuan Province,Chengdu 610066,China)

Detect the glucose transporter type 2 content of Chuanzang Black Swine Hybrid and DLY pigs by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)and analyze its relationship with intramuscular fat content.The results showed that the glucose transporter type 2 content of Chuanzang Black Swine Hybrid of 90 kg,110 kg,130 kg bodyweight respectively were 56.33 μg/L,54.51 μg/L and 54.28 μg/L,and intramuscular fat content respectively were 3.72%,4.41%and 4.96%;glucose transporter type 2 content of DLY respectively were 47.28 μg/L,49.11 μg/L and 47.82 μg/L,and intramuscular fat content respectively were 2.00%,2.50%and 2.61%.There was no significant difference in different bodyweight of the same breeds and different breeds of the same bodyweight（110 kg,130 kg）of glucose transporter type 2(P＞0.05).There was significant difference of the different breeds of 90 kg bodyweight（0.01＜P＜0.05）.Correlation analysis showed that glucose transporter type 2 and intramuscular fat content had a significant positive correlation,which prompt glucose transporter type 2 may be achieved the overall regulation of intramuscular fat through blood.

Chuanzang Black Swine Hybrid;DLY;intramuscular fat content;glucose transporter type 2

S828

A

1002-1957(2016)03-0065-03

2016-04-20

四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2014NZ0092）；四川省基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金（SASA2013A03）；四川省基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金（SASA2013B02）；國家生豬產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系-綜合試驗(yàn)站（CARS-36）；四川省財(cái)政運(yùn)行專項(xiàng)（SASA2014CZYX001）

楊雪梅（1981-），女，四川閬中人，助理研究員，碩士，研究方向?yàn)樨i的遺傳育種.E-mail：544859309＠qq.com

呂學(xué)斌（1965-），男，研究員，博士，研究方向?yàn)樨i的遺傳育種.E-mail：lvxuebin＠21cn.com