種豬場(chǎng)豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律與免疫策略

許光勇，王朝軍，周海深，徐利，盧紀(jì)和，麻文靜，趙曉旭，蘇敬良，任曉明

（1.北京養(yǎng)豬育種中心，北京海淀100194；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193；3.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京昌平102206）

種豬場(chǎng)豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律與免疫策略

許光勇1，王朝軍1，周海深1，徐利1，盧紀(jì)和1，麻文靜1，趙曉旭1，蘇敬良2，任曉明3

（1.北京養(yǎng)豬育種中心，北京海淀100194；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京海淀100193；3.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京昌平102206）

試驗(yàn)主要通過前期調(diào)查母豬群豬瘟病毒感染情況和抗體保護(hù)水平，確定母豬群豬瘟疫苗免疫方式，然后選擇不同時(shí)間點(diǎn)觀察豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律，從而確定仔豬豬瘟活疫苗首次免疫接種時(shí)間，繼而達(dá)到有效地避開疫苗與母源抗體發(fā)生中和反應(yīng)，為科學(xué)制定免疫程序提供理論依據(jù)。

豬瘟；母源抗體；阻斷率；首免日齡；免疫策略

豬瘟（Classical Swine Fever,CSF）是由豬瘟病毒引起的一種高度接觸性傳染病，OIE（世界動(dòng)物衛(wèi)生組織）將其列為A類傳染病，在我國(guó)被歸為一類傳染病[1]。臨床上主要以發(fā)熱、全身如針尖點(diǎn)狀出血或脾梗死等為主要特征，妊娠母豬可表現(xiàn)出流產(chǎn)、產(chǎn)死木弱仔數(shù)增加。在全球，中國(guó)C株對(duì)豬瘟的控制與消滅做出過巨大貢獻(xiàn)。在中國(guó)，雖現(xiàn)階段豬瘟不呈現(xiàn)暴發(fā)式，但仍有零散發(fā)生，呈現(xiàn)溫和感染狀態(tài)，對(duì)豬場(chǎng)尤其是種豬場(chǎng)造成隱性危害。

規(guī)模化豬場(chǎng)豬瘟免疫效果差異較大，究其原因主要包括首免日齡不當(dāng)導(dǎo)致母源抗體與疫苗抗原相互抵消或出現(xiàn)免疫空白期、母豬持續(xù)帶毒導(dǎo)致仔豬形成免疫耐受、其他免疫抑制性疾病存在、豬瘟疫苗質(zhì)量問題或其他管理因素等[2]。本試驗(yàn)根據(jù)豬瘟母源抗體消減變化情況來確定仔豬豬瘟活疫苗首免時(shí)間，從而避免盲目隨意接種疫苗誤區(qū)，為科學(xué)制定免疫程序提供理論依據(jù)，并形成一套可行性強(qiáng)的免疫程序調(diào)整及優(yōu)化思路。

1 試驗(yàn)豬場(chǎng)背景

試驗(yàn)于北京養(yǎng)豬育種中心下屬兩個(gè)豬場(chǎng)開展，分別記為A和B種豬場(chǎng)。前期對(duì)試驗(yàn)場(chǎng)母豬群豬瘟抗體水平和豬瘟病毒感染情況進(jìn)行摸底調(diào)查。

1.1 試驗(yàn)場(chǎng)母豬流產(chǎn)與產(chǎn)死木弱情況

對(duì)試驗(yàn)A與B種豬場(chǎng)2014年和2015年母豬群的流產(chǎn)率與產(chǎn)死木弱數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，其分布見表1。由表1可知，試驗(yàn)A與B場(chǎng)母豬流產(chǎn)率在1.5%左右（2014年試驗(yàn)B場(chǎng)除外），基本符合藍(lán)耳病陽性穩(wěn)定場(chǎng)生產(chǎn)成績(jī)表現(xiàn)。

表1 試驗(yàn)場(chǎng)母豬流產(chǎn)率與產(chǎn)死木弱數(shù)情況

1.2 試驗(yàn)場(chǎng)母豬群豬瘟病毒感染情況

母豬群均勻分布于空懷、妊娠和哺乳階段并按5%比例采集扁桃體樣品進(jìn)行豬瘟病毒檢測(cè)，試驗(yàn)A與B場(chǎng)分別為30份和15份，通過提取樣品核酸、巢式PCR和凝膠電泳反應(yīng)，其結(jié)果見圖1和圖2。圖1和圖2結(jié)果表明，試驗(yàn)A與B場(chǎng)母豬群均無豬瘟病毒感染存在，整個(gè)母豬群保持豬瘟抗原陰性狀態(tài)。

圖1 試驗(yàn)A場(chǎng)母豬群樣品PCR檢測(cè)豬瘟病毒結(jié)果

圖2 試驗(yàn)B場(chǎng)母豬群樣品PCR檢測(cè)豬瘟病毒結(jié)果

1.3 試驗(yàn)場(chǎng)母豬群豬瘟抗體水平分布

母豬群均勻分布于各個(gè)胎次中并按10%比例于妊娠中后期采血檢測(cè)豬瘟抗體，試驗(yàn)A與B場(chǎng)分別為60份和30份，檢測(cè)結(jié)果見表2。由表2可知，試驗(yàn)A與B場(chǎng)母豬群豬瘟抗體完全合格，具有良好的保護(hù)作用，說明母豬群于斷奶時(shí)免疫接種豬瘟疫苗即跟胎免疫是有效的。

表2 試驗(yàn)場(chǎng)母豬群豬瘟抗體合格率

綜合上述結(jié)果可知，試驗(yàn)A與B場(chǎng)母豬群未受豬瘟病毒感染風(fēng)險(xiǎn)，各階段母豬群豬瘟抗體水平良好，母豬群于斷奶時(shí)采取跟胎免疫可行且利于仔豬豬瘟首免日齡確定。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物

各選擇50頭剛出生哺乳仔豬，每窩2頭，共25窩，試驗(yàn)于北京養(yǎng)豬育種中心下屬A與B豬場(chǎng)完成。

2.2 試驗(yàn)用試劑盒

豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：99-43220，F(xiàn)081），購(gòu)自北京愛德士元亨生物科技有限公司。

2.3 試驗(yàn)處理

仔豬豬瘟活疫苗首免時(shí)間確定試驗(yàn)：試驗(yàn)A與B場(chǎng)分別挑選的50頭剛出生哺乳仔豬，分別編號(hào)為A1～A50、B1～B50，100頭仔豬不免疫任何豬瘟疫苗直至試驗(yàn)采血結(jié)束，分別于7、14、21、28、35、42、49和63日齡采血檢測(cè)豬瘟抗體阻斷值。

2.4 試驗(yàn)方法

具體操作完全按照IDEXX豬瘟病毒抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行。

3 統(tǒng)計(jì)分析

檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)用Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。

4 試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)A與B場(chǎng)所選100頭試驗(yàn)豬分別于7、14、21、28、35、42、49和63日齡進(jìn)行8次采血工作，其中試驗(yàn)B場(chǎng)有1頭仔豬于31日齡死亡，故剔除掉編號(hào)B25試驗(yàn)豬，最后A與B場(chǎng)參與檢測(cè)的血樣數(shù)量每次分別為50和49份，對(duì)所有血樣檢測(cè)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，其結(jié)果見圖3。

圖3 試驗(yàn)A場(chǎng)仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)情況

阻斷率均值為試驗(yàn)A場(chǎng)所有參與試驗(yàn)采血仔豬豬瘟抗體阻斷率的平均值，為方便分析，圖3中所表現(xiàn)出的阻斷率均值記為豬瘟抗體阻斷率的平均值除以100；合格率為阻斷率值大于等于40數(shù)量除以每次檢測(cè)總數(shù)；阻斷率值≤30比例為阻斷率值小于等于30數(shù)量除以每次檢測(cè)總數(shù)。

由圖3可知，未接種任何豬瘟疫苗的仔豬，其豬瘟母源抗體水平隨著時(shí)間推移逐漸降低，阻斷率均值由7日齡0.75降至63日齡0.02；豬瘟抗體合格率也隨著時(shí)間推移逐漸降低，呈現(xiàn)先慢后快再慢的下降趨勢(shì)，在14日齡前，豬瘟抗體合格率均維持在90%以上且穩(wěn)定；阻斷率值≤30比例隨著仔豬日齡增大而逐漸升高，至63日齡達(dá)100%。仔豬豬瘟活疫苗首免日齡確定原則為：當(dāng)豬瘟母源抗體阻斷率值小于等于30所占比例達(dá)到40%（一般為20%～40%）時(shí)即為豬瘟活疫苗首次免疫接種時(shí)間。依據(jù)此原則可知，試驗(yàn)A場(chǎng)仔豬豬瘟活疫苗首次免疫時(shí)間為35日齡。

圖4中阻斷率均值、合格率和阻斷率值≤30比例所代表意義同圖3。由圖4可知，未接種任何豬瘟疫苗的仔豬，其豬瘟母源抗體水平隨著日齡增大逐漸降低，阻斷率均值由7日齡0.65降至63日齡0.04；豬瘟抗體合格率呈現(xiàn)先慢后快再平緩的下降趨勢(shì)，不同于A場(chǎng)的是，在21日齡前豬瘟抗體合格率均較高；阻斷率值≤30比例隨著仔豬日齡增大也逐漸升高，至63日齡達(dá)100%。按豬瘟首免日齡確定原則同理可知，試驗(yàn)B場(chǎng)仔豬豬瘟活疫苗首次免疫時(shí)間大約為38日齡。

圖4 試驗(yàn)B場(chǎng)仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)情況

5 討論

雖說豬瘟病毒感染對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害較之前輕，呈現(xiàn)溫和型臨床表現(xiàn)，但如果細(xì)算細(xì)分，豬瘟病毒對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害仍不可忽視，故在國(guó)務(wù)院與農(nóng)業(yè)部頒發(fā)的《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》文件中強(qiáng)調(diào)控制豬瘟重要性，同樣在開展“十三五規(guī)劃”中提出凈化豬瘟方向。對(duì)于企業(yè)工作者來說，如何預(yù)防與控制豬瘟發(fā)生是重中之重，而走凈化之路還需廣大科研工作者提供更好的技術(shù)支持，例如開發(fā)豬瘟疫苗毒與野毒鑒別技術(shù)等。

豬瘟疫苗免疫效果受諸多因素影響，其中包括母源抗體中和反應(yīng)、豬群健康度、精液帶毒、免疫抑制性疾病干擾、免疫耐受性存在、疫苗質(zhì)量與運(yùn)輸冷鏈等。本試驗(yàn)主要針對(duì)豬瘟母源抗體對(duì)仔豬疫苗免疫效果影響展開，通過觀察豬瘟母源抗體消減規(guī)律來確定仔豬首免日齡。

前期對(duì)兩個(gè)試驗(yàn)豬場(chǎng)豬群健康度進(jìn)行摸底調(diào)查，由圖1和圖2結(jié)果可以確定母豬群未受豬瘟病毒感染，由表2結(jié)果可知母豬群豬瘟抗體保護(hù)率均達(dá)到100%，由表1數(shù)據(jù)可知，豬場(chǎng)母豬群流產(chǎn)率處于1.5%左右水平（2014年B場(chǎng)除外），2014年B場(chǎng)豬群藍(lán)耳病保持抗原抗體雙陰性狀態(tài)，故其母豬流產(chǎn)率僅為0.15%，該生產(chǎn)成績(jī)應(yīng)該屬于藍(lán)耳病陽性穩(wěn)定場(chǎng)或藍(lán)耳病某幾個(gè)階段保持陰性狀態(tài)的結(jié)果，與豬瘟病毒感染應(yīng)該沒有關(guān)聯(lián)。通過兩個(gè)豬場(chǎng)母豬群流產(chǎn)率、產(chǎn)死木弱數(shù)、豬瘟病毒感染狀態(tài)和豬瘟抗體保護(hù)情況可知，該兩個(gè)試驗(yàn)豬場(chǎng)均未感染豬瘟病毒，母豬群采取的斷奶時(shí)跟胎免疫方式效果良好，且豬瘟跟胎免疫能夠保證哺乳母豬奶水中豬瘟抗體水平穩(wěn)定，不會(huì)導(dǎo)致仔豬吃母乳時(shí)出現(xiàn)母源抗體水平參差不齊的問題，仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)有很強(qiáng)規(guī)律性，有利于仔豬豬瘟疫苗首免時(shí)間的確定。因此，規(guī)?；i場(chǎng)要確定或優(yōu)化仔豬豬瘟疫苗免疫程序，首先得確定母豬群豬瘟疫苗免疫方式，這樣才能更準(zhǔn)確地制定仔豬豬瘟疫苗免疫程序。就目前來看，豬瘟采取跟胎免疫固然精準(zhǔn)，但同時(shí)也會(huì)出現(xiàn)一些問題，例如奶媽豬、妊娠期流產(chǎn)母豬等會(huì)出現(xiàn)漏免或免疫間隔時(shí)間過長(zhǎng)的問題，這就要求豬場(chǎng)的管理更加精細(xì)化。雖然一刀切免疫方式省時(shí)省力，且母豬群抗體水平不受影響，但通過母乳傳遞給仔豬的母源抗體水平參差不齊，對(duì)仔豬豬瘟疫苗免疫程序制定帶來很大影響。仔豬豬瘟疫苗免疫過早出現(xiàn)母源抗體與疫苗抗原發(fā)生中和，從而導(dǎo)致免疫無效，增加成本；免疫過晚仔豬出現(xiàn)免疫空白期，增加豬瘟病毒感染風(fēng)險(xiǎn)。因此，在制定或調(diào)整豬群豬瘟免疫程序時(shí)，務(wù)必先確定母豬群的豬瘟免疫方式，后期才能有的放矢。

圖3結(jié)果顯示，試驗(yàn)A場(chǎng)仔豬豬瘟母源抗體阻斷率平均值隨著日齡增大逐漸降低，7日齡仔豬阻斷率均值為0.75，28日齡阻斷率均值為0.43，推測(cè)大約30日齡阻斷率均值降至0.40；試驗(yàn)A場(chǎng)豬瘟抗體合格率隨著仔豬日齡增大也逐漸降低，并呈現(xiàn)先慢后快再慢的下降趨勢(shì)，不難發(fā)現(xiàn)，仔豬于14日齡前合格率維持在90%以上，在14～42日齡階段，其下降速度之快，抗體合格率由14日齡的90%迅速降至42日齡的10%，僅4周時(shí)間降低80個(gè)百分點(diǎn)，63日齡抗體合格率已為0；試驗(yàn)A場(chǎng)豬瘟抗體阻斷率值小于等于30所占比例隨著仔豬日齡增加逐步升高，并于35日齡達(dá)到38%，而63日齡達(dá)到100%。從圖3中發(fā)現(xiàn)，35日齡仔豬的豬瘟抗體合格率為40%，豬瘟抗體阻斷率值小于等于30所占比例為38%，按照阻斷率值小于等于30比例在20%～40%區(qū)間內(nèi)定為豬瘟疫苗首免時(shí)間的原則，我們將A場(chǎng)仔豬豬瘟疫苗首次免疫時(shí)間定為35日齡。

圖4結(jié)果顯示，試驗(yàn)B場(chǎng)仔豬阻斷率均值隨著日齡增大逐漸下降，且1周齡以內(nèi)阻斷率均值僅為0.65，28日齡為0.47，35日齡為0.36，故推測(cè)大約在30日齡阻斷率均值達(dá)到0.40，這和試驗(yàn)A場(chǎng)基本保持一致；試驗(yàn)B場(chǎng)豬瘟抗體合格率也呈現(xiàn)先慢后快再平緩的下降趨勢(shì)，21日齡前均維持在90%左右或以上水平，較A場(chǎng)推遲1周時(shí)間，但21～49日齡出現(xiàn)快速下降過程，49日齡降至2%；試驗(yàn)B場(chǎng)豬瘟抗體阻斷率值小于等于30所占比例隨著仔豬日齡增加也逐步升高，前3周較穩(wěn)定，35日齡達(dá)到31%，42日齡升至61%，63日齡達(dá)到100%。從圖4結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大約在38日齡時(shí)，豬瘟抗體合格率達(dá)40%，豬瘟抗體阻斷率值小于等于30所占比例也為40%，同理我們將B場(chǎng)仔豬豬瘟疫苗首次免疫時(shí)間定為38日齡。這樣既避免疫苗抗原和母源抗體中和反應(yīng)發(fā)生，又不會(huì)出現(xiàn)過長(zhǎng)免疫空白區(qū)，能夠有效地讓仔豬得到母源抗體或疫苗抗體的保護(hù)。

通過圖3和圖4結(jié)果比較可知，試驗(yàn)A與B場(chǎng)阻斷率均值、合格率和阻斷率值小于等于30比例的變化趨勢(shì)基本一致，即不同豬場(chǎng)仔豬豬瘟母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律基本一致。同時(shí)也存在差異，B場(chǎng)仔豬前期阻斷率均值低于A場(chǎng)，B場(chǎng)豬瘟抗體合格率維持較高水平時(shí)間較A場(chǎng)多1周時(shí)間，這些有可能與不同豬場(chǎng)所飼養(yǎng)種豬品種差異、豬群健康度或生產(chǎn)管理水平等因素有關(guān)。從上述兩個(gè)場(chǎng)結(jié)果可知，高豬瘟母源抗體水平至少能維持兩周時(shí)間，21～42日齡為母源抗體迅速下降階段，仔豬63日齡幾乎或完全沒有母源抗體保護(hù)，大約在30日齡阻斷率均值達(dá)到40，26～38日齡階段豬瘟抗體阻斷率值小于等于30所占比例在20%～40%，35～38日齡階段豬瘟抗體合格率維持在40%左右。

總之，要提高豬瘟疫苗免疫效果，消除母源抗體干擾只是一方面，還需從排查帶毒豬尤其是后備豬群，控制或消滅其他免疫抑制性疾病，嚴(yán)格監(jiān)管疫苗質(zhì)量和冷鏈運(yùn)輸保存環(huán)境，加強(qiáng)生物安全和飼養(yǎng)管理等方面進(jìn)行綜合管理。

6 結(jié)論

通過試驗(yàn)A與B場(chǎng)結(jié)果表明，高的豬瘟母源抗體水平一般能維持2～3周時(shí)間，21日齡后，豬瘟母源抗體迅速下降，49～63日齡已經(jīng)處于很低保護(hù)力。試驗(yàn)A與B場(chǎng)豬瘟活疫苗首次免疫接種時(shí)間分別為35和38日齡。

[1]王春花，孫元，仇華吉.新型豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J].生物工程學(xué)報(bào)，2013，29（7）：880-890.

[2]寧宜寶，吳文福.我國(guó)豬瘟流行新特點(diǎn)與疫苗免疫研究[J].中國(guó)獸藥雜志，2011，45（8）：33-37.

（編輯：郭玉翠）

S858.285.3

A

1002-1957(2016)04-0105-03

2016-05-26

北京三元種業(yè)科技股份有限公司自立課題（SYZYZ2015 0005）

許光勇（1985-），男，江西金溪人，獸醫(yī)師，執(zhí)業(yè)獸醫(yī)師，在讀博士研究生，主要從事規(guī)?；i場(chǎng)生產(chǎn)管理和豬病防控研究. E-mail：vetbbsc@163.com