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    用甘蔗汁生產(chǎn)丁醇的試驗(yàn)研究

    2016-12-19 06:02:44磊譯劉慧霞校對(duì)
    廣西糖業(yè) 2016年1期
    關(guān)鍵詞:甘蔗汁糖蜜丁醇

    焦 磊譯,劉慧霞校對(duì)

    (廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院,廣西 南寧 530004)

    用甘蔗汁生產(chǎn)丁醇的試驗(yàn)研究

    焦 磊譯,劉慧霞校對(duì)

    (廣西大學(xué)輕工與食品工程學(xué)院,廣西 南寧 530004)

    丁醇是分子式為C4H90H的一種飽和脂肪醇,它可用作運(yùn)輸燃料,以及各種化學(xué)應(yīng)用中的介質(zhì)和溶劑。20世紀(jì)50年代以前,丙酮丁醇發(fā)酵一直是工業(yè)上生產(chǎn)溶劑的標(biāo)準(zhǔn)方法。現(xiàn)代微生物的技術(shù)已經(jīng)改造了生產(chǎn)菌,使之能夠產(chǎn)出更高純度的丁醇,而不是產(chǎn)出以前那種混合溶劑。丁醇作為一個(gè)代用燃料來(lái)源有許多優(yōu)勢(shì):一是更高的能量;二是能夠在現(xiàn)有管道中運(yùn)輸使用;三是容易和汽油相互混合。丁醇能夠從甘蔗汁,糖蜜或者蔗渣水解液中的糖中生產(chǎn)出來(lái),這主要是通過一系列拜式梭菌發(fā)酵蔗糖而實(shí)現(xiàn)。甘蔗汁和糖蜜能夠直接發(fā)酵生成丁醇,糖蜜發(fā)酵丁醇的產(chǎn)量為0.30g/g,甘蔗汁發(fā)酵丁醇的產(chǎn)量為0.34g/g,而在等量的蔗糖濃度下每克蔗糖產(chǎn)出0.27克丁醇。從經(jīng)濟(jì)學(xué)角度來(lái)看,從甘蔗產(chǎn)品中生產(chǎn)丁醇的方法是可行的。

    生物量;丁醇;發(fā)酵;甘蔗汁

    0 前言

    通過丙酮丁醇梭桿菌發(fā)酵生產(chǎn)丙酮丁醇是我們所知的最古老的一種工業(yè)發(fā)酵方法之一。其生產(chǎn)規(guī)模僅次于酒精酵母發(fā)酵,而且是所知最大的生物技術(shù)過程之一。1950年以前,工業(yè)溶劑丙酮,丁醇和異丙醇都是通過發(fā)酵而來(lái)的(見圖1)。

    圖1 丙酮丁醇發(fā)酵工廠

    按照以往發(fā)酵丁醇的方法,兩種梭菌種類丙酮丁醇梭桿菌或者丁酸桿菌被選擇為發(fā)酵菌種。在典型的丙酮丁醇發(fā)酵中,丁酸,丙酸,乳酸和乙酸首先生成,培養(yǎng)液的pH下降,培養(yǎng)菌經(jīng)歷一系列新陳代謝過程,然后才生成丁醇,丙酮,異丙醇和乙醇。

    由葡萄糖生產(chǎn)丁醇的得率較低,一般在15%左右,很少有超過25%的。丁醇的產(chǎn)量受限于嚴(yán)重的產(chǎn)物抑制。當(dāng)丁醇濃度為1%時(shí),抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)酵達(dá)20%。當(dāng)丁醇濃度為1.6%時(shí),則完全抑制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)酵。傳統(tǒng)丙酮丁醇發(fā)酵的液體培養(yǎng)基中,丁醇的濃度不超過1.3%。

    通過發(fā)酵產(chǎn)丁醇重新激發(fā)了人們對(duì)于發(fā)展可再生能源的興趣。丁醇既是一種重要的工業(yè)溶劑,也是一種比乙醇更好的潛在能源(如表1)。

    表1 替代燃料的屬性

    丁醇作為一種可替代燃料資源具有很多優(yōu)點(diǎn):一是更高的能含量;二是能夠在現(xiàn)有管道中運(yùn)輸使用;三是容易和汽油混合。由于它的低溶解度,在水存在的情況下,丁醇相對(duì)于乙醇不太容易從混合燃料中分離出來(lái)。

    從糖類中生產(chǎn)丁醇來(lái)自于生化路線,首先葡萄糖生成乙酰輔酶A,同時(shí)有丙酮和丁酸產(chǎn)生,然后丁酸轉(zhuǎn)化為丁醇,通過微生物群,丙酮轉(zhuǎn)化為丙醇。雖然人們嘗試很多方法來(lái)改變這些微生物的遺傳性狀,使丙酮從丁醇的生產(chǎn)中分離出來(lái),但是并沒有完全成功,因?yàn)楸投〈际冀K共享一個(gè)共同中間體(如圖2)。通常抑制丙酮的生成也會(huì)使丁醇的產(chǎn)量減少。

    圖2 丁醇和丙酮的生化途徑

    在過去的二十年左右,人們進(jìn)行了很多工程嘗試來(lái)提高丙酮丁醇乙醇(ABE)發(fā)酵中丁醇的產(chǎn)量,包括有細(xì)胞回收和細(xì)胞固定來(lái)增加發(fā)酵細(xì)胞的濃度和反應(yīng)堆的生產(chǎn)力,使用萃取發(fā)酵來(lái)使產(chǎn)物的抑制最小化。但是發(fā)酵后的丁醇濃度仍然少于2%,生產(chǎn)效率為4.469g/1/h,得率為25%左右。

    優(yōu)化丙酮丁醇乙醇(ABE)發(fā)酵過程一直是工業(yè)過程的一個(gè)目標(biāo)。像其他任何一種生物原料一樣,丙酮丁醇乙醇(ABE)發(fā)酵的可行性依賴于原料的成本和微生物的生產(chǎn)能力。如果丁醇能夠從低成本的糖中以較為經(jīng)濟(jì)的手段生產(chǎn)出來(lái),則市場(chǎng)對(duì)丁醇的需求量將會(huì)大大增加。近期很多研究主要集中在木質(zhì)纖維素轉(zhuǎn)化糖上,以及發(fā)酵法生產(chǎn)丁醇這一替代能源方面。

    很少有報(bào)道將甘蔗糖作為可利用的原料來(lái)發(fā)酵生產(chǎn)丁醇。這一研究的開展是由于我們對(duì)美國(guó)路易斯安那州制糖工業(yè)生產(chǎn)生物燃料的興趣引起的。

    1 材料和方法

    1.1 微生物和種菌制備

    本研究使用一系列拜氏梭菌。200μL細(xì)菌孢子在80℃條件下熱沖擊10分鐘后放到冰中冷卻,然后接種到27mL蛋白胨葡萄糖酵母膏培養(yǎng)基中,在34℃下培養(yǎng)12.16h。

    1.2 碳源

    本研究使用不同的碳源:實(shí)驗(yàn)室級(jí)蔗糖,赤糖糊,混合汁,以及來(lái)源于玉米淀粉的葡萄糖作為對(duì)照。玉米淀粉水解成麥芽低聚糖,經(jīng)淀粉轉(zhuǎn)葡糖苷酶生成葡萄糖。酶將95%的淀粉轉(zhuǎn)化為葡萄糖。

    1.3 補(bǔ)料分批發(fā)酵

    發(fā)酵是在125ml的螺釘封頂瓶中進(jìn)行的,其中有120ml的培養(yǎng)液,溫度為34℃,沒有攪拌、氣流或者pH控制。培養(yǎng)液包含有蔗糖(5%濃度),糖蜜(含糖5.9%),糖汁(含糖4.9%),或者5%的葡萄糖作為碳源,補(bǔ)充1g/L的酵母浸出液。培養(yǎng)液滅菌以后,過濾消毒原液包括:緩沖液(KH2P04,50g/L;K2HP04,50g/L,乙酸銨220g/L),維生素(對(duì)氨基苯甲酸,0.1g/L;維生素B1,0.19g/L;生物素,0.001g/L),礦物質(zhì)(MgS04-7H20,20g/L;MnS04.H20,1g/L;FeS04.7H20, 1g/L;NaCl,lg/L),每樣添加lmL。同時(shí)接種高度能動(dòng)的菌體細(xì)胞。在發(fā)酵的過程中,采集4mL樣品測(cè)定吸光度、pH、溶劑濃度、有機(jī)酸含量,并進(jìn)行糖品分析。

    1.4 分析程序

    在600nm的吸光度下可以預(yù)估菌體細(xì)胞濃度。溶劑、丁醇、丙酮、乙醇都是通過氣相色譜來(lái)測(cè)定(使用PhenomenexZP waxplus)。有機(jī)酸、乙酸、丁酸都是通過高效液相色譜測(cè)定(使用陰離子交換柱Dionex lonpacAS.11)。糖類則通過高效液相色譜測(cè)定(使用Biorad HPS87K)。

    2 結(jié)果和討論

    拜式梭菌的生長(zhǎng)曲線對(duì)于所有碳源都是相似的,達(dá)到指數(shù)晚期的時(shí)間約為30h,49.5h后達(dá)到最大增長(zhǎng)量,無(wú)論是加蔗糖還是加葡萄糖的培養(yǎng)液,它們的pH都在指數(shù)晚期以前下降,然后回升。這是一個(gè)典型的拜式梭菌生長(zhǎng)模式,反映出產(chǎn)量以及有機(jī)酸的利用。在大多數(shù)ABE培養(yǎng)基中,丁醇在穩(wěn)定期以后開始產(chǎn)生。在整個(gè)發(fā)酵過程中,少量的丙酮和乙醇一直存在,但是糖蜜發(fā)酵是個(gè)例外,丁醇產(chǎn)量在生長(zhǎng)期便開始逐漸增加。這種模式表明丁醇通過拜式梭菌連續(xù)高效生產(chǎn)(如圖3)。培養(yǎng)過程中糖蜜能引起酸化,這是因?yàn)樘砑拥奶敲壑杏?.65Brix的乙酸,相對(duì)于其他碳源,這抑制了丁醇的生成。在穩(wěn)定期以后,丁醇的產(chǎn)量逐漸增加。在糖汁的發(fā)酵中,丁醇的產(chǎn)量在12h至49.5h之間快速增加。

    糖汁(含4.9%的糖)和糖蜜(5.9%糖)都是發(fā)酵丁醇的優(yōu)良培養(yǎng)基(如圖4)。更高濃度的糖蜜就會(huì)抑制菌體生長(zhǎng),這可能是由于滲透作用所致。在所有情況下,異丙醇是最大的副產(chǎn)品。這個(gè)產(chǎn)物的模式同丁酸桿菌的產(chǎn)物非常相似。在所有的試樣中,都發(fā)現(xiàn)有少量的乙醇。葡萄糖和蔗糖發(fā)酵生成的丁醇沒有什么不同。這兩種發(fā)酵碳源都不是最佳的。在所有的情況下,發(fā)酵完以后仍然有殘?zhí)恰?/p>

    糖汁和糖蜜發(fā)酵生成產(chǎn)物的能力要高于蔗糖或葡萄糖。

    在碳源的使用方面,它依賴于產(chǎn)物的生成(如表2所示),使用甘蔗原料所產(chǎn)生的溶劑是使用純糖或玉米水解物所產(chǎn)生的溶劑的1.3倍。

    圖3 不同碳源對(duì)丙酮丁醇產(chǎn)量的影響(■丙醇,◆丁醇,▲總量)

    圖4 在不同的5%單一碳源條件下,發(fā)酵后丁醇、丙醇和總?cè)軇┑漠a(chǎn)量(g/L,96.5小時(shí))

    表2 不同碳源的溶劑產(chǎn)量

    在所有情況下,首先產(chǎn)生丁醇,并伴隨有相當(dāng)部分的異丙醇。丙酮和乙醇要么缺失,要么微量存在(如表3)。

    由于原料的作用不同,溶劑的收益不盡相同,有的差別。比較丁醇發(fā)酵和乙醇發(fā)酵的情況,值得注意的是酒精酵母發(fā)酵有個(gè)理論上的最大收益51%,它將1.65kg的糖轉(zhuǎn)化成lL的乙醇。糖的用量和相關(guān)的發(fā)酵丁醇的原料花費(fèi)列于表4中。

    表3 不同碳源的溶劑收益率

    表4 生產(chǎn)丁醇所需原料成本估價(jià)

    雖然由糖轉(zhuǎn)化成丁醇或丙醇低于轉(zhuǎn)化成乙醇,但是丁醇的熱量值更高,也減少了燃料運(yùn)輸管理的問題,這些都值得人們考慮將它作為燃料來(lái)生產(chǎn)。從糖汁中直接生產(chǎn)的丁醇燃料很可能會(huì)與玉米酒精產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng),而用糖蜜發(fā)酵丁醇的成本更低??梢灶A(yù)料,努力改進(jìn)菌株以及工藝將會(huì)使收益提高更多。

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    TS249.9

    B

    2095-820X(2016)01-05

    2016-02-25

    郵箱:dday@agcenter.isu.edu

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