注射用奧美拉唑鈉粉針含量測(cè)定方法研究

金榮富，常華蘭，梁麗麗，馬 濤，苗 健，

(1.安徽宏業(yè)藥業(yè)有限公司，安徽 蚌埠 233045；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 233030；3.安徽省蚌埠市食品藥品監(jiān)督管理局，安徽 蚌埠 233000)

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注射用奧美拉唑鈉粉針含量測(cè)定方法研究

金榮富1，常華蘭2，梁麗麗2，馬 濤2，苗 健2，

王 珊2，王曉華2，宮文武3，張成陜1，薛洪寶2*

(1.安徽宏業(yè)藥業(yè)有限公司，安徽 蚌埠 233045；2.蚌埠醫(yī)學(xué)院，安徽 蚌埠 233030；3.安徽省蚌埠市食品藥品監(jiān)督管理局，安徽 蚌埠 233000)

采用高效液相色譜法，建立藥品生產(chǎn)企業(yè)檢測(cè)中心快速、有效測(cè)定注射用奧美拉唑鈉粉針?biāo)幮С煞趾康姆椒āＩV柱：Nobel Kromasil C8色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流動(dòng)相：0.01 mol/LV[磷酸一氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.6)]∶V(乙腈)=75∶25；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。該方法樣品前處理簡(jiǎn)單、精密度高、準(zhǔn)確可靠，能夠滿足藥品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)注射用奧美拉唑鈉粉針?biāo)幮С煞趾繖z測(cè)要求，操作簡(jiǎn)捷易行，適合于注射用奧美拉唑鈉粉針的質(zhì)量控制。

奧美拉唑鈉；高效液相色譜；含量測(cè)定

奧美拉唑鈉(omeprazole sodium)，又名奧西康，化學(xué)名稱為5-甲氧基-2-{[(4-甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)-甲基]-亞磺?；鶀-1H-苯并咪唑鈉一水合物[1]，化學(xué)結(jié)構(gòu)見圖1。主要用于消化性潰瘍出血、吻合口潰瘍出血、應(yīng)激狀態(tài)時(shí)并發(fā)的急性胃黏膜損害、非甾體類抗炎藥引起的急性胃黏膜損傷；還常用于預(yù)防腦出血、嚴(yán)重創(chuàng)傷等重癥疾病應(yīng)激狀態(tài)以及胃手術(shù)后引起的上消化道出血等。在治療十二指腸潰瘍、胃潰瘍、反流性食管炎及卓-艾氏(zollinger-ellison)綜合征等病癥時(shí)，不適合口服給藥，采用奧美拉唑鈉注射療法更佳[2]。

圖1 奧美拉唑鈉化學(xué)結(jié)構(gòu)

本研究擬采用高效液相色譜法測(cè)定奧美拉唑鈉的含量[3-4]，并將其作為注射用奧美拉唑鈉的質(zhì)量控制方法[5]。實(shí)驗(yàn)研究表明，本法專一性強(qiáng)、重現(xiàn)性好、精密度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：LC-20A型高效液相色譜儀，配有LC-20AB型并聯(lián)雙柱塞輸液泵，Prominence CTO-20A/20AC型自動(dòng)控溫柱溫箱，SPD-M20A PDA型光電二極管陣列檢測(cè)器，日本島津公司；C8色譜柱，辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格250 mm×4.6 mm，5 μm，瑞典Nobel Kromasil，北京豫鼎鑫捷科技有限公司；德安特ES320 g/0.000 1 g型精密電子天平，精度0.000 1 g，上海升徽電子有限公司；pH7110型實(shí)驗(yàn)室臺(tái)式pH/ORP測(cè)試儀，精度0.01 pH單位，德國(guó)WTW，上海牧晨電子技術(shù)有限公司；一次性針頭式過濾器及濾膜，0.45 μm，天津市科億隆實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

試劑：奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品，純度98.5%以上，上海子起生物科技有限公司；磺酰化奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品，5-甲氧基-2-{[(4-甲氧基-3，5-二甲基-2-吡啶基)-甲基]-磺?；鶀-1H-苯并咪唑，純度98.5%以上，南京森貝伽生物科技有限公司；注射用奧美拉唑鈉粉針劑，40 mg/支，批號(hào)151002、151013、151109、151204、151215，安徽宏業(yè)藥業(yè)有限公司；乙腈，色譜純，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；磷酸，分析純；磷酸一氫鈉，分析純；二次蒸餾水。

1.2 待測(cè)溶液的配制

根據(jù)國(guó)家藥典要求配制0.01 mol/LV[磷酸一氫鈉溶液(以磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.6)]∶V(乙腈)=75∶25的溶液，真空脫氣，所得溶液即為高效液相色譜流動(dòng)相；準(zhǔn)確稱量奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品與磺?；瘖W美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品各0.001 g(精確到0.000 1 g)，加少許高效液相色譜流動(dòng)相使之溶解，再稀釋至10 mL，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液；分別取不同批次(5批)注射用奧美拉唑鈉(凈含量約40 mg/支，5支/批)，精確稱取，用流動(dòng)相溶液溶解并稀釋，配制成質(zhì)量濃度約為0.150 0 mg/mL的待測(cè)樣品溶液。將上述溶液置于4 ℃以下保存，待分析。溶液使用前以0.45 μm濾膜過濾。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

色譜柱：Nobel Kromasil C8色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫：25 ℃；流動(dòng)相：0.01 mol/LV[磷酸一氫鈉溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.6)]∶V(乙腈)=75∶25；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。理論板數(shù)(以奧美拉唑鈉峰計(jì)算)≥2 000，奧美拉唑鈉峰與磺?；瘖W美拉唑鈉峰的分離度>2.0。

分別取上述待測(cè)溶液20 μL注入液相色譜儀，參照高效液相色譜法(附錄VD)測(cè)定，記錄色譜圖。取對(duì)照溶液注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)色譜圖Y軸縱向比例，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的15%；再精密量取供試樣品溶液和對(duì)照溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的3倍。供試樣品溶液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰，單個(gè)雜質(zhì)峰的面積≤對(duì)照溶液主峰面積的0.3倍(0.3%)，各雜質(zhì)峰面積之和≤對(duì)照溶液主峰面積(1.0%)。在本實(shí)驗(yàn)條件下，曲克蘆丁色譜峰保留時(shí)間約為12.82 min。根據(jù)外標(biāo)定量法計(jì)算色譜峰面積。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用Excel處理、統(tǒng)計(jì)、分析，并用Origin7.0作圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的優(yōu)化

2.1.1 流動(dòng)相的選擇

由于奧美拉唑鈉分子是較大有機(jī)分子陰離子基團(tuán)和鈉離子形成的有機(jī)鹽(見圖1)，因此，化學(xué)性質(zhì)為典型的強(qiáng)堿弱酸鹽，具有明顯的堿性，酸性條件下容易形成有機(jī)酸分子，降低水溶液中的溶解性而析出。為了保證色譜分離過程中，奧美拉唑鈉處于可溶性離子狀態(tài)，流動(dòng)相選擇弱堿性流動(dòng)相，采用磷酸一氫鈉溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.6左右。由于此化合物作為有機(jī)酸鹽分子極性較大，流動(dòng)相也選擇極性較大的體系，采用V(水)∶V(乙腈)=75∶25作為流動(dòng)相。該流動(dòng)相比例既能保證注射劑中奧美拉唑鈉分子得到有效分離，又能保證保留時(shí)間恰當(dāng)，可以避免保留時(shí)間過長(zhǎng)產(chǎn)生的縱向擴(kuò)散所引起的色譜峰展寬、分離度下降的不利影響。

2.1.2 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

奧美拉唑鈉分子中有苯并咪唑-亞磺酰基結(jié)構(gòu)(見圖1)，在283 nm處具有較大紫外吸收。通過預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜紫外可見檢測(cè)器波長(zhǎng)設(shè)置為280 nm時(shí)，紫外吸收強(qiáng)度較大。因此，檢測(cè)器波長(zhǎng)選擇280 nm?？赡茉蚴?，奧美拉唑鈉分子在水溶液中受到溶劑化作用使分子結(jié)構(gòu)共平面性降低，使檢測(cè)最大波長(zhǎng)比283 nm略有偏差。

2.2 奧美拉唑鈉的定性分析及重現(xiàn)性分析

分別取1.2中的奧美拉唑鈉和磺?；瘖W美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)2次進(jìn)樣，并以空白溶劑為對(duì)照。所得色譜圖見第59頁圖2奧美拉唑鈉和磺?；瘖W美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品高效液相色譜圖。奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品平均保留時(shí)間約為12.8 min，而磺酰化奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品平均保留時(shí)間約為16.0 min。對(duì)譜圖進(jìn)行積分，計(jì)算分離度，結(jié)果見第59頁表1。

圖2 奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品分離度高效液相色譜圖(n=5)

分別取1.2中的奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品溶液，連續(xù)重復(fù)5次進(jìn)樣，并以空白溶劑為對(duì)照，所得色譜圖見第59頁圖3奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品高效液相色譜圖。奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品平均保留時(shí)間約為12.8 min。對(duì)譜圖進(jìn)行積分，計(jì)算重現(xiàn)性，結(jié)果見第59頁表2。

圖3 奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品高效液相色譜圖(n=5)

奧美拉唑鈉的定性分析結(jié)果和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿足《中華人民共和國(guó)藥典》(2010版)[6]中的定性分析實(shí)驗(yàn)要求，定性分析結(jié)果相對(duì)客觀。

2.3 定量分析方法的建立

分別取批號(hào)為151002、151013、151109、151204、151215 5個(gè)批次的奧美拉唑鈉粉針樣品及奧美拉唑鈉對(duì)照品，在1.3.1色譜條件下進(jìn)樣分析，每個(gè)樣品重復(fù)3次，得出相應(yīng)的色譜圖(見圖4)。根據(jù)面積歸一化法求出對(duì)應(yīng)的色譜峰面積，將峰面積、保留時(shí)間、峰寬、對(duì)稱因子等色譜峰定量信息匯總于第60頁表3中。計(jì)算出樣品溶液平均值、偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差。根據(jù)測(cè)定的樣品溶液奧美拉唑鈉中含量值計(jì)算出原批次中每支注射用奧美拉唑鈉粉針中藥效成分含量。采用同樣方法對(duì)5批的注射用奧美拉唑鈉粉針樣品進(jìn)行上述測(cè)定分析，所得實(shí)驗(yàn)結(jié)果匯總于第60頁表3中。

圖4 奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品及待測(cè)樣品高效液相色譜圖

表1 奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品分離度實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)

表2 奧美拉唑鈉標(biāo)準(zhǔn)品重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=5)

注射用奧美拉唑鈉粉針樣品藥效成分測(cè)定結(jié)果表明，奧美拉唑鈉有關(guān)物質(zhì)對(duì)照品和注射用奧美拉唑鈉粉針樣品的保留時(shí)間基本接近，RSD<0.048%，此結(jié)果驗(yàn)證了定性分析結(jié)果的客觀性。兩測(cè)試組中對(duì)應(yīng)樣品的色譜峰參數(shù)峰面積、峰高、峰寬、對(duì)稱因子等所產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均較小，小于0.54%，符合定量分析實(shí)驗(yàn)要求。

奧美拉唑鈉注射液樣品藥效成分含量分析結(jié)果顯示，每支注射用奧美拉唑鈉所含藥效成分奧美拉唑鈉在39.3 mg～41.0 mg，區(qū)間范圍在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制范圍(40±2)mg/支之內(nèi)，屬于合格產(chǎn)品。

3 結(jié)論

本研究建立了制藥企業(yè)化驗(yàn)檢測(cè)中心快速有效測(cè)定奧美拉唑鈉注射液藥效成分奧美拉唑鈉含量的方法。該方法樣品前處理簡(jiǎn)單、精密度高、準(zhǔn)確可靠，能夠滿足藥品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)奧美拉唑鈉含量檢測(cè)要求，操作簡(jiǎn)捷易行、可靠性高。

表3 注射用奧美拉唑鈉樣品測(cè)定結(jié)果

[1] 胡曉，唐小海，謝永美，等.RP-HPLC法測(cè)定S-奧美拉唑鈉及其有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國(guó)藥房,2009,20(22):1744-1746.

[2] 李軍，魏慶旺，張鑒.注射用奧美拉唑鈉溶液的穩(wěn)定性考察[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志,2005,25(8):775-776.

[3] 周斌，楊迪，楊芳.用HPLC測(cè)定注射用奧美拉唑鈉中奧美拉唑鈉含量的效果觀察[J].當(dāng)代醫(yī)藥論叢,2015,13(10):41-42.

[4] 陳佳，廖心丹，張丹.HPLC測(cè)定奧美拉唑鈉中的有關(guān)物質(zhì)[J].華西藥學(xué)雜志,2014,29(2):212-214.

[5] 李菊平，劉效平，金永亮.HPLC法測(cè)定奧美拉唑鎂原料藥中醋酸的殘留量[J].藥學(xué)研究,2015,34(9):514-516.

[6] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版：二部：附錄[M].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,890-891.

Determination of active ingredient content in omeprazole sodium booster injection

JIN Rongfu1, CHANG Hualan2, LIANG Lili2, MA Tao2, MIAO Jian2, WANG Shan2,WANG Xiaohua2, GONG Wenwu3, ZHANG Chengshan1, XUE Hongbao2*

(1.Anhui Hongye Pharmaceutical Co., Ltd., Bengbu Anhui 233045, China;2.Bengbu Medical College, Bengbu Anhui 233030, China;3.Bengbu Food & Drug Administration in Anhui, Bengbu Anhui 233000, China)

The effective and rapid measurement method to detect the active ingredient in omeprazole sodium booster injection is established based on High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The method can be used in laboratory center of the pharmaceutical production enterprises. The optimum conditions, which Nobel Kromasil C18 Column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) packing column is used at 25 ℃, andV[phosphate buffer (0.01 mol/L solution of sodium hydrogen phosphate with phosphoric acid to adjust pH to 7.6)]∶V(acetonitrile) = 75∶25 is applied as mobile phase in flow rate of 1 mL/min, and 280 nm detection wavelength are chosen by experiment. It provides a new, convenient, rapid, accurate and reliable method for the detection of active ingredient in omeprazole sodium booster injection. The method can be used on omeprazole sodium booster injection quality control in the drug manufacturer.

omeprazole sodium; HPLC; content determination

2016-08-08

安徽省高等學(xué)校省級(jí)優(yōu)秀青年人才基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.2013SQRL051ZD)；安徽省高等教育振興計(jì)劃重大教學(xué)改革研究項(xiàng)目(No.2015zdjy101)；蚌埠市社會(huì)科學(xué)規(guī)劃項(xiàng)目(No.BB16B019)；蚌埠市領(lǐng)導(dǎo)圈定課題(No.BBSQ16A04)；安徽省省級(jí)質(zhì)量工程教學(xué)研究項(xiàng)目(No.2014jyxm211)；安徽省高等教育振興計(jì)劃項(xiàng)目(No.2014zytz014)；國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.201410367014,201510367003)；蚌埠醫(yī)學(xué)院教學(xué)研究項(xiàng)目(No.jyxm1506)。

金榮富，男，1964年出生，本科，執(zhí)業(yè)藥師，工程師，主要從事藥物生產(chǎn)質(zhì)量控制相關(guān)研究工作。

分析與測(cè)試

10.16525/j.cnki.cn14-1109/tq.2016.05.16

O657.7

A

1004-7050(2016)05-0057-05

*通信作者：薛洪寶，男，1979年出生，博士，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事制藥工程專業(yè)相關(guān)教學(xué)、科研、管理等工作。