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    實驗室檢測奶牛結(jié)核病的方法比較

    2016-12-15 06:59:04安先霞林學仕
    中國畜牧獸醫(yī)文摘 2016年11期
    關鍵詞:結(jié)核菌素干擾素結(jié)核

    安先霞林學仕

    (1.永靖縣川城鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,甘肅永靖 731600; 2.永靖縣動物疫病預防控制中心,甘肅永靖 731600)

    實驗室檢測奶牛結(jié)核病的方法比較

    安先霞1林學仕2

    (1.永靖縣川城鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,甘肅永靖 731600; 2.永靖縣動物疫病預防控制中心,甘肅永靖 731600)

    奶牛結(jié)核病屬于人畜共患傳染病,該病嚴重危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)和公共衛(wèi)生安全,是由牛結(jié)核分枝桿菌引起,奶牛是家畜中最易感染該病的動物。多年來,奶牛結(jié)核病已成為制約奶牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展和危害人類健康的重要因素。為了更好地防控奶牛結(jié)核病,用兩種方法檢測結(jié)核?。号P吞峒兘Y(jié)核菌素(PPD)皮內(nèi)變態(tài)反應和γ-干擾素檢測技術檢測比較,分析其優(yōu)劣,為以后的檢測工作提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 試劑盒

    瑞士Prionics公司Bovigam牛結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素ELISA檢測試劑盒,購買于北京測迪科技有限公司。

    1.1.2 主要試劑

    牛結(jié)核菌素由哈藥集團生物疫苗有限公司生產(chǎn),Bovigam牛型提純結(jié)核菌素(BoPPD)和Bovigam禽型提純結(jié)核菌素(AvPPD)購買于北京測迪科技有限公司。

    1.1.3 試驗牛群

    選擇全縣飼養(yǎng)的531頭奶牛,從2014年開始到2016年,每年3~4月份和9~10月份,進行結(jié)核病檢測。

    1.2 方法

    1.2.1 牛型提純結(jié)核菌素(PPD)皮內(nèi)變態(tài)反應試驗

    依據(jù)國家標準《動物結(jié)核病診斷技術(GB/T18645-2002)》,在奶牛頸部用牛型PPD進行皮內(nèi)變態(tài)反應試驗,劑量為2000IU/頭,分別在注射前和注射后72h測量皮膚厚度,并計算出皮厚差,對于皮厚差在2.0mm以上的(包括2.0mm)疑似陽性牛再進行對側(cè)重復檢查,依據(jù)國家標準判斷結(jié)果。

    1.2.2 牛結(jié)核γ-干擾素檢測試驗

    皮內(nèi)試驗第3d采集單側(cè)陽性牛的血液(每頭6ml),放入肝素抗凝管中,輕輕顛倒3~5次,使肝素和血液充分混勻,放入22℃恒溫箱中,運送到實驗室,并在采血后第20h進行培養(yǎng)。輕輕顛倒試管10次,在無菌條件下,用一次性自動移液器將抗凝血加入24孔組織培養(yǎng)板,每頭奶牛加3孔1.5ml血樣。每個血樣3個孔分別加入100μlPBS、禽型提純結(jié)核菌素、牛型結(jié)核菌素將含有血液和抗原的組織培養(yǎng)板在37℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育21.5h。孵育后將24孔板在室溫下(25℃),500rmin,離心lOmin,小心吸取上層血漿,放入1.5ml的離心管中。然后按照試劑盒說明對γ-干擾素上清液進行檢測。結(jié)果判定標準:陰性=牛型提純結(jié)核菌素的OD-陰性抗原的OD<0.1或牛型提純結(jié)核菌素的OD-禽型提純結(jié)核菌素的OD<0.1。陽性=牛型提純結(jié)核菌素的OD-陰性抗原的OD≥0.1且牛型提純結(jié)核菌素的OD-禽型提純結(jié)核菌素的OD≥0.1。

    2 結(jié)果

    (1)牛型提純結(jié)核菌素(PPD)皮內(nèi)變態(tài)反應試驗選定永靖縣39個奶牛養(yǎng)殖場(戶)飼養(yǎng)的531頭奶牛進行結(jié)核病檢疫凈化,每年3~4月份和9~10月份分為兩次進行集中檢測,累計檢測3140頭次。檢出疑似陽性牛11頭,在頸部對側(cè)復檢的同時,采集血液樣本。通過皮內(nèi)變態(tài)反應法復檢排除疑似陽性牛4頭,實際陽性牛為7頭,奶牛結(jié)核陽性率0.22%。(詳見表1)

    表1 2014~2016年全縣奶牛結(jié)核病檢測統(tǒng)計表 單位:頭、%

    (2)牛結(jié)核γ-干擾素檢測試驗

    通過牛結(jié)核γ-干擾素檢測技術對11頭疑似陽性牛進行實驗室血清學檢測,排除假陽性奶牛6頭,最終確定結(jié)核陽性牛5頭,奶牛結(jié)核陽性率0.16%。

    表2 γ-干擾素技術與PPD皮內(nèi)變態(tài)反應技術的比較

    3 討論

    本試驗結(jié)果表明:γ-干擾素試驗與皮內(nèi)變態(tài)反應相比,特異性好和靈敏度高,但是該方法成本較高,目前不適合全面推廣使用。國內(nèi)已經(jīng)開始研發(fā)低成本的γ-干擾素牛結(jié)核病診斷試劑盒,該試劑盒研發(fā)成功后將改變我國牛結(jié)核病的診斷方法。

    4 結(jié)論

    γ-干擾素檢測技術是一種新型牛結(jié)核病檢測方法,具有檢測結(jié)核病早期感染的能力,通過體外刺激培養(yǎng),檢測只需要采集一次血樣,而且試驗特異性好,檢測敏感性高。商品化牛結(jié)核下γ-干擾素試驗試劑盒,容易實現(xiàn)標準化,排除了PPD變態(tài)反應結(jié)果判定人為因素影響。但是牛結(jié)核分枝桿菌下一干擾素檢測試劑盒價格較高,建議目前將該方法用于復核檢查牛型PPD變態(tài)反應陽性牛,剔除部分假陽性牛型PPD反應,盡量減少不必要的經(jīng)濟損失。

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