知母須根化學成分預實驗

肖曦晨，賈鵬暉，黃 琪，許鳳清，吳德玲

(安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012)

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知母須根化學成分預實驗

肖曦晨，賈鵬暉，黃 琪，許鳳清，吳德玲

(安徽中醫(yī)藥大學藥學院，安徽 合肥 230012)

為初步探索知母須根中的化學成分，采用試管反應(yīng)法、紙反應(yīng)法以及薄層色譜試驗等方法對知母須根水提取部位、乙醇提取部位以及石油醚提取部位中的化學成分進行初步探究。結(jié)果表明知母須根中可能含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類、苷類、皂苷、黃酮類、酚類及鞣質(zhì)、甾體、三萜類等化學成分。為后續(xù)提取、分離和分析實驗提供理論依據(jù)，同時也為深入探究知母須根生物活性及其綜合開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

知母須根；化學成分；預實驗

知母為百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的干燥根莖，具有清熱瀉火，滋陰潤燥等功效[1]?，F(xiàn)代研究結(jié)果表明知母具有抗老年癡呆，降血糖等藥理作用[2-3]。在產(chǎn)地調(diào)研過程中發(fā)現(xiàn)，知母須根特別發(fā)達，占根莖總量的20%～30%左右，而在產(chǎn)地加工過程中，須根則作為非藥用部位去除。大量的須根被丟棄，造成巨大的資源浪費，同時帶來嚴重的環(huán)境污染。目前，人們對知母須根關(guān)注度不高，其化學成分研究也鮮見報道。本研究以亳州產(chǎn)知母的須根為研究對象，采用系統(tǒng)預實驗法對其須根中含有的主要化學成分展開較為全方位的檢測，確定其化合物種類，為知母須根的后期深入研究及其綜合開發(fā)利用提供有益參考。

1 實 驗

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料

知母須根從安徽亳州十九里鎮(zhèn)采收，由安徽中醫(yī)藥大學劉守金老師鑒定為百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的須根。

1.1.2 試劑

石油醚(60～90 ℃)、95%乙醇、蒸餾水、氫氧化鈉、鹽酸、硫酸、氯仿均為分析純。茚三酮試劑、10% α-萘酚乙醇液、斐林試劑、鹽酸羥胺甲醇液、雙縮脲試劑、三氯化鐵試劑、氯化鈉明膠試劑、三氯化鋁試劑、碘化鉍鉀試劑、硅鎢酸試劑、碘化汞鉀試劑、鹽酸-鎂粉試劑、醋酸鎂試劑等試劑均自配。

1.2 供試品溶液的制備

1.2.1 石油醚提取液制備

稱取知母須根3 g，用打粉機粉碎后，緩慢加入石油醚(60～90 ℃)100 mL，密塞，室溫下靜置3 h，濾過，所得濾液即為石油醚提取液，用作油脂、揮發(fā)油和甾體及三萜類成分的檢查。

1.2.2 乙醇提取液制備

稱取知母須根6 g，用打粉機粉碎后，緩慢加入乙醇200 mL，水浴加熱回流1 h，過濾，得濾液。將濾液分為兩部分，其中一份作為乙醇提取液，供做甲項試驗。另一部分減壓濃縮至無醇味，緩慢加入5% 鹽酸溶液30 mL，充分攪拌，過濾，得濾液，供做乙項試驗。鹽酸溶液不溶的組分緩慢加入乙酸乙酯30 mL使溶解，并使用5% 氫氧化鈉溶液30 mL充分振搖洗滌2次，堿水層溶液棄至廢液缸，乙酸乙酯層用蒸餾水洗滌至水洗液呈中性，棄去水洗液，減壓濃縮樣品得殘渣，殘渣再加乙醇15 mL使溶解，供做丙項試驗。

1.2.3 水提取液制備

稱取知母須根6 g，用打粉機粉碎后，緩慢加入蒸餾水200 mL，室溫下冷浸過夜，過濾取20 mL濾液，用作蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸的檢查。未濾去的組分在50～60 ℃的溫度下加熱1 h，過濾，得濾液，用作苷類、糖類、有機酸、酚類等項目的檢查。

1.3 實驗方法

知母須根經(jīng)三種提取液制備后采用紙反應(yīng)法，試管反應(yīng)法以及薄層色譜檢識的方法進行化學成分預實驗。根據(jù)各類化學成分的物理化學性質(zhì)，選擇其特殊的并且在實驗室環(huán)境下易于觀察的反應(yīng)現(xiàn)象，例如顏色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)等，檢測供試品溶液當中可能含有的化合物種類。結(jié)果見表1～表3。

2 結(jié)果與討論

采用前述方法對知母須根的三種提取液分別進行化學成分預實驗，現(xiàn)將結(jié)果歸納如表1所示。

表1 知母須根石油醚提取液預試結(jié)果

注：“+”表示正反應(yīng)，“-”表示負反應(yīng)。

經(jīng)檢驗，知母須根石油醚提取液中可能含有甾體、三萜類等成分。

其中在對甾體、三萜類成分進行檢測時，有文獻記載在進行此類化學成分預實驗時可用醋酐-濃硫酸(Liebermann-Burchard)反應(yīng)法，既將供試品溶于醋酐中，加入濃硫酸-醋酐(1：20)數(shù)滴，靜置數(shù)分鐘，三萜皂苷最后呈紅或紫色，甾體皂苷最終呈藍紫色。然而在實際的實驗操作過程中，我們發(fā)現(xiàn)此種顏色反應(yīng)現(xiàn)象在實驗室中難以觀察到，遂采取了實驗室中最為常見的薄層色譜檢識方法，通過不同展開劑體系下各展開比例對照，最終確立了展開劑為氯仿-丙酮(6：1)。一方面，薄層檢識實驗結(jié)果易于觀察，另一方面，也避免使用了醋酐這種管制試劑。

表2 知母須根乙醇提取液成分預試結(jié)果

注：“+”表示正反應(yīng)，“-”表示負反應(yīng)。

經(jīng)檢驗，知母須根乙醇提取液中可能含有黃酮類、酚類及鞣質(zhì)、甾體、三萜類和香豆素及其苷類等成分。

通過對醇提液預實驗結(jié)果與其他兩種提取液預實驗結(jié)果進行對比，乙醇提取液中化合物種類相對較多，相同類型化合物相對含量較大，從而揭示乙醇對知母須根的提取效果最佳，并且乙醇相對環(huán)保，價格便宜，綜合諸多因素的考量，我們在后續(xù)實驗當中確定用乙醇來對知母須根藥材進行提取。

表3 知母須根水提取液成分預試結(jié)果

注：“+”表示正反應(yīng)，“-”表示負反應(yīng)。

經(jīng)檢驗，知母須根水提取液中可能含有氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類、苷類、皂苷及有機酸等成分。

通過文獻檢索，我們可以知道知母當中的主要化學成分為皂苷類成分，所以在知母須根的化學成分預實驗中，我們把對皂苷類成分的檢測作為首要。其中水提液中對皂苷類成分的檢測方法區(qū)別于前兩種提取液，主要是因為皂苷作為極性較大的化合物在水提液中的含量要遠遠高于前兩種提取液，利用其與水混合振搖時可生成持久性的似肥皂泡沫狀物的特性，從而達到對皂苷類成分的檢測。這種方法簡便可行且實驗現(xiàn)象易于觀察，同時避免了含水的供試品進行薄層色譜檢識時的擴散效應(yīng)。

3 結(jié) 論

通過以上的化學成分預實驗，揭示知母須根中可能含有黃酮類、苷類、皂苷、氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、糖類、酚類及鞣質(zhì)、甾體、三萜類等化學成分。

現(xiàn)代天然藥化研究表明，知母主根中含有大量的三萜類及黃酮類化學成分，這些化學成分大多具有較好的生物活性[4-6]。本實驗研究表明知母須根中含有三萜類、黃酮類成分，這些成分與知母主根中類似，實驗結(jié)果可為知母須根中活性成分的提取、分離、純化提供實驗依據(jù)。同時，本實驗可為知母須根這一知母產(chǎn)地加工過程中的廢棄物的綜合開發(fā)利用提供理論支撐。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2015:212.

[2] Hu H,Zhang R,Zhang Y, et al. Role of CREB in the regulatory action of sarsasapogenin on muscarinic Ml receptor density during cell aging[J].FEBS Lett.,2010,584(8):1549-1554.

[3] 芮雯,吳妍,吉星,等.知母降糖有效部位的提取工藝優(yōu)選及成分分析[J].中國實驗方劑學雜志,2013,19(22):4-8.

[4] 張玉晶,宋少江,馬志強,等中藥知母中的一個新皂苷[J].沈陽藥科大學學報,2008,25(4):279-281.

[5] 邊際,徐綏緒,黃松,等.知母化學成分的研究[J].沈陽藥科大學學報,1996,13(1):34-40.

[6] 劉卓,隋海娟,閆恩志,等.知母皂苷對脂多糖引起巨噬細胞分泌TNF-α和NO的影響及機制[J].中藥藥理與臨床,2013,29(1):65-67.

Preliminary Test for Chemical Components of FibrousofAnemarrhenaasphodeloides

XIAOXi-chen,JIAPeng-hui，HUANGQi,XUFeng-qing,WUDe-ling

(College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230012, China)

To identify the chemical components of the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides,the mixture was extracted from the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloideswith water,95% ethanol and petroleum ether were studied with test tube method,test paper method and TLC method. The results indicated that the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloidesmight contain amino acid, polypeptide, protein, saccharides, glycosides, saponins, flavonoids, phenols, tannins, sterides, triterpenes, and so on.It not only provided a theoretical basis for subsequent extraction, separation and analysis experiments,but also laid the foundation for further study of biological activity and application of the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides.

the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides; chemical components; preliminary test

中醫(yī)藥行業(yè)科研專項項目(201507002-18)；安徽中醫(yī)藥大學校級科研基金面上項目(2016zr012)。

肖曦晨(1991-)，男，碩士研究生，研究方向：中藥活性成分研究。

吳德玲(1973-)，男，教授，碩士研究生導師，研究方向：中藥活性成分研究、中藥質(zhì)量評價研究和中藥新藥的研究與開發(fā)。

R284.1

A

1001-9677(2016)022-0042-03