應(yīng)用卵黃和血清進(jìn)行新城疫抗體監(jiān)測(cè)的比較

曹丹

（遼寧省沈陽(yáng)市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，遼寧　沈陽(yáng)　110034）

應(yīng)用卵黃和血清進(jìn)行新城疫抗體監(jiān)測(cè)的比較

曹丹

（遼寧省沈陽(yáng)市畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，遼寧沈陽(yáng)110034）

為檢測(cè)卵黃抗體代替血清抗體對(duì)蛋雞新城疫免疫評(píng)估的可行性，本試驗(yàn)選取180日齡健康產(chǎn)蛋母雞30羽，按照常規(guī)免疫程序，分別于180、182、186、194、210、242和306日齡共7次采集卵黃樣品和對(duì)應(yīng)的血清樣品，以HI方法檢測(cè)血清和卵黃免疫新城疫免疫抗體水平。結(jié)果表明，卵黃抗體的效價(jià)略低于血清抗體效價(jià)，但升降趨勢(shì)相同。利用spss 12.0軟件對(duì)7個(gè)不同日齡蛋雞抗體數(shù)據(jù)進(jìn)行檢驗(yàn)，差異不顯著（P＞0.05）。由此可得，在產(chǎn)蛋雞180～300日齡內(nèi)，卵黃抗體與血清抗體差異不顯著，有一定的相關(guān)性，可以采用卵黃替代血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。

蛋雞；新城疫；卵黃；血清；免疫抗體；相關(guān)性

新城疫（ND）也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，是由NDV病毒引起的雞和火雞急性高度接觸性傳染病，常呈敗血癥癥狀。主要特征是呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血，是嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)得主要疾病之一，為A類傳染病[1]。因此，控制新城疫的發(fā)生和流行具有重要意義。當(dāng)前主要通過檢測(cè)禽類血清中新城疫抗體水平來進(jìn)行免疫效果的評(píng)估，控制新城疫疫病的發(fā)生。在臨床上需要對(duì)免疫雞群的血清抗體水平進(jìn)行多次監(jiān)測(cè)，采血不但會(huì)給雞群造成較大的應(yīng)激反應(yīng)，引起生產(chǎn)性能的下降，而且費(fèi)時(shí)費(fèi)力，采樣效率不高。

蛋雞進(jìn)行雞新城疫疫苗免疫接種后，體內(nèi)B細(xì)胞通過對(duì)抗原的識(shí)別、活化、增殖，最后分化成漿細(xì)胞并分泌抗體，產(chǎn)生的抗體進(jìn)入血液后，血液中的抗體能從輸卵管上皮層分泌濾泡分泌到卵黃內(nèi)[2]。因此，若能用卵黃抗體代替血清抗體檢測(cè)，不僅可以省去采血給雞群造成的應(yīng)激反應(yīng)，而且操作更為方便。本試驗(yàn)以產(chǎn)蛋雞為研究對(duì)象，對(duì)新城疫血清抗體與卵黃抗體產(chǎn)生水平的相關(guān)性進(jìn)行對(duì)比，以確定用檢測(cè)卵黃抗體代替血清抗體對(duì)產(chǎn)蛋雞進(jìn)行新城疫免疫評(píng)估的可行性，從而為ND的抗體檢測(cè)提供新的方法。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物從沈北道義蛋種雞場(chǎng)選取個(gè)體差異不顯著的產(chǎn)蛋雞30羽（180日齡），按照表1新城疫免疫程序常規(guī)免疫，單籠飼養(yǎng)。

表1　蛋種雞場(chǎng)采用新城疫免疫程序Tab le1　The imm unization procedure o f NDV vaccine

1.2疫苗按照常規(guī)免疫，雞新城疫Lasota疫苗、雞新城疫油乳劑滅活疫苗：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)。

1.3血凝抑制試驗(yàn)用抗原和血清雞新城疫標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清：哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，批號(hào)（20140312）。

雞新城疫4單位抗原：自制。

0.75%新鮮雞紅細(xì)胞懸液，現(xiàn)用現(xiàn)做；氯仿（三氯甲烷）；阿氏液；PBS溶液。

1.4試驗(yàn)材料主要儀器及耗材：96孔V型微量板；單道及多道微量移液器（配有吸頭）；微型振蕩器；離心機(jī)；離心管、試管、一次性注射器。

2　樣品制備

2.1血清樣品采集試驗(yàn)蛋雞于180日齡（產(chǎn)蛋穩(wěn)定）當(dāng)天開始采樣，分別在182、186、194、210、242和306日齡采集血清，采血每天收集雞蛋，采血當(dāng)天產(chǎn)蛋作為檢測(cè)用蛋（30枚），對(duì)應(yīng)編號(hào)，用作待檢血清和待檢雞蛋，共采樣7次。

2.2卵黃樣品的制備卵黃采用生理鹽水稀釋法：將卵黃與蛋清分離，用無菌采血器刺破卵膜，直接從卵黃囊抽取卵黃。將采集的卵黃與等量生理鹽水作1∶1稀釋，混合制成卵黃檢樣備用。

2.3H H I I抗體效價(jià)測(cè)定血清樣品按《GB/T 16550-2008新城疫診斷技術(shù)》規(guī)定方法檢測(cè)。卵黃樣品參照血清樣品進(jìn)行HI效價(jià)測(cè)定。

3　結(jié)果與分析

3.1卵黃與血清H H I I抗體效價(jià)差異性比較見表2。

表2　產(chǎn)蛋期新城疫血清抗體和卵黃抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果Table2　HI(log2)antibody titer of the serum and egg yolk antibody for NDV

由表2可知，新城疫病毒卵黃抗體的平均效價(jià)為8.39，血清抗體平均效價(jià)為8.70。從本次試驗(yàn)結(jié)果來看，進(jìn)行新城疫常規(guī)免疫后，卵黃抗體的效價(jià)略低于血清抗體效價(jià)。但升降趨勢(shì)相同，具有一定的相關(guān)性。

利用spss12.0軟件對(duì)7個(gè)不同日齡蛋雞抗體數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，差異不顯著（t＜0.05，P＞0.05）。由此可得，在產(chǎn)蛋雞180～300日齡內(nèi)，卵黃抗體與血清抗體差異不顯著，有一定的相關(guān)性，可以采用卵黃替代血清進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。

3.2卵黃—血清抗體效價(jià)消長(zhǎng)規(guī)律及相關(guān)性分析見圖1。

圖1　血清抗體和卵黃抗體效價(jià)監(jiān)測(cè)結(jié)果Fig.1　HI antibody titer of the serum and egg yolk antibody for NDV

由圖1可得，新城疫病毒卵黃抗體的效價(jià)與血清抗體較為相近，升降趨勢(shì)相同，曲線變化基本一致。試驗(yàn)期間，血清抗體效價(jià)的曲線，位于上線，始終高于卵黃抗體水平。由此可得出，與血清相比，卵黃抗體有一定的滯后性。

4　結(jié)果與討論

雞體內(nèi)的免疫球蛋白分布于淋巴液、血清和組織液中，還能通過卵泡膜進(jìn)入卵黃，為雛雞提供母源抗體。本次試驗(yàn)測(cè)定了常規(guī)免疫新城疫疫苗后，血清抗體效價(jià)和卵黃抗體效價(jià)基本一致，升降趨勢(shì)相同，成正平行關(guān)系，卵黃抗體可以代替雞血清對(duì)蛋雞進(jìn)行ND的免疫監(jiān)測(cè)，這與孟艷等（2007）[3]、席文平等（2007）[4]研究均認(rèn)為蛋雞卵黃抗體效價(jià)與血清效價(jià)的差異不顯著，具有相關(guān)性的報(bào)道相一致。但由于卵黃形成需要一定的時(shí)間，因此卵黃抗體與血清抗體檢測(cè)結(jié)果相比，存在一定的滯后性。

在具體試驗(yàn)操作中，需要對(duì)卵黃樣品處理后，才能進(jìn)行HI方法檢測(cè)。常用的卵黃提純制備有氯仿萃取法、PBS直接稀釋法、生理鹽水直接稀釋法和PEG沉淀法。本文經(jīng)過篩選后，采用生理鹽水直接稀釋卵黃樣品，簡(jiǎn)便實(shí)用，且與血清效價(jià)差異不大，可以運(yùn)用到生產(chǎn)實(shí)踐中。用卵黃抗體代替血清對(duì)蛋雞進(jìn)行ND的免疫監(jiān)測(cè)，不僅減少抓雞產(chǎn)生的應(yīng)激，避免采血驚嚇造成的產(chǎn)蛋量下降，而且檢測(cè)卵黃抗體方法簡(jiǎn)便實(shí)用，節(jié)省人力和時(shí)間，養(yǎng)雞戶更易于接受。

[1]范文穎，周寅，顧祥國(guó).雞新城疫的診斷和防控[J].畜牧與飼料科學(xué)，2009，30（9）：154-156.

[2]劉瑞生，張洪波，薛掌林，等.雞新城疫血清抗體和卵黃抗體效價(jià)比較研究[J].畜牧獸醫(yī)雜志，2013，2：100；

[3]孟艷，楊秀女，武秋雙，等.蛋禽卵黃和血清禽流感抗體的差異及相關(guān)性[J].今日畜牧獸醫(yī)，2007，6：3-5.

[4]席文平，李吉軒，岳建新，等.禽流感血清抗體與卵黃抗體消長(zhǎng)規(guī)律比較研究[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2007，34（1）：103-105.

The feasibility of immune evaluation Newcastle disease of judging yolk antibody instead of serum antibody

Cao Dan
(Shenyang Instituent of Animal Husbandry and Veterinary,LiaoningShengyang110034)

To study the feasibi l ity of immune evaluation Newcast le disease of judging yolk antibody instead of serum antibody,eggs and samples were col lected f rom 30 180-day-age heal thy laying hens and the layers immunized with NDV vaccine according to the routine vaccination program.

The serum and eggs were col lected on 180、182、186、194、210、242 and 306 days,which number of samples were cor responding.The antibody level in the serum and egg yolks was detected with the haemagglutination inhibition(HI)test.The resul t showed that the egg yolk antibody titers sl ight ly lower than serum antibody titers,but the t rends of decreasing and increasing of theirs were the same.The antibody titers were analyzed by using spss 12.0,theirs were not remarkably di f ferent（P＞0.05）.The mentioned-above resul t indicated that the antibody level in the egg yolks and serum of 180 to 300 day old laying hens were not dif ferent,but theirs have some cor relation. It suggested that eggs yolk could be detected with theHItest instead of serum.

Laying hen;Newcast le disease;Egg yolk;Serum;Immune antibody;Correlation

S858.31

B

1672-9692(2016)01-0015-03

2015-11-11

曹丹（1979-），女，碩士研究生，高級(jí)畜牧師，研究方向?yàn)閯?dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)。