• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    石榴皮多糖硒酸酯制備工藝參數(shù)優(yōu)化及其結(jié)構(gòu)分析

    2016-12-07 07:29:08王占一張立華王玉海鄭丹丹
    食品科學(xué) 2016年10期
    關(guān)鍵詞:石榴皮硝酸反應(yīng)時(shí)間

    王占一,戴 博,張立華,王玉海,鄭丹丹,王 飛

    (1.棗莊學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院,山東 棗莊 277160;2.中國(guó)人民解放軍空軍總醫(yī)院藥學(xué)部,北京 100142)

    石榴皮多糖硒酸酯制備工藝參數(shù)優(yōu)化及其結(jié)構(gòu)分析

    王占一1,戴 博2,張立華1,王玉海1,鄭丹丹1,王 飛1

    (1.棗莊學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院,山東 棗莊 277160;2.中國(guó)人民解放軍空軍總醫(yī)院藥學(xué)部,北京 100142)

    以石榴皮多糖與亞硒酸鈉為原料制備石榴皮多糖硒酸酯,以產(chǎn)物硒含量和收率為指標(biāo),原料配比、硝酸體積分?jǐn)?shù)、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間為單因素,通過單因素試驗(yàn)和Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法對(duì)工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,并對(duì)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。結(jié)果顯示:石榴皮多糖硒酸酯最佳制備工藝條件為原料配比1∶1.0(g/g)、硝酸體積分?jǐn)?shù)0.61%、反應(yīng)溫度77.0 ℃、反應(yīng)時(shí)間11.3 h,在該工藝條件下,制得石榴皮多糖硒酸酯中硒含量為4.48 mg/g,產(chǎn)物收率為41.87%;紫外光譜、紅外光譜和熱重分析充分證實(shí)石榴皮多糖硒酸酯中含有Se=O鍵、Se—O鍵和Se—C鍵。優(yōu)化后的石榴皮多糖硒酸酯制備工藝條件實(shí)現(xiàn)了石榴皮多糖的硒化,為石榴皮資源的充分開發(fā)利用提供良好條件。

    石榴皮多糖;亞硒酸鈉;多糖硒酸酯;紫外光譜;紅外光譜;熱重分析

    石榴(Punica granatum L.)又名金罌、天漿,其干燥果皮入藥稱為石榴皮,是一種傳統(tǒng)中藥材,為2010版《中國(guó)藥典》(一部)收載品種[1]。研究[2-4]表明,石榴皮所具有的抗惡性腫瘤、抗氧化、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等功能均與其所含的多糖類和多酚類成分有關(guān)。硒是生命體不可缺少的重要微量元素,適當(dāng)補(bǔ)硒具有提高人體非特異性免疫能力、延緩衰老、抗惡性腫瘤等多種生物學(xué)功能[5]。硒在自然界中通常以無機(jī)硒和有機(jī)硒2 種形式存在,與無機(jī)硒相比,有機(jī)硒不但毒性小,而且其生物活性及生物利用度更高。有機(jī)硒通常以硒多糖、硒蛋白和硒核酸等形式存在,其中硒多糖,即多糖硒酸酯是元素硒與多糖通過酯鍵結(jié)合的化合物,在人體內(nèi)能發(fā)揮元素硒與多糖雙重生理活性,是理想的補(bǔ)硒產(chǎn)品[6-7]。然而,天然存在的多糖硒酸酯數(shù)量很少,使得該類產(chǎn)品的開發(fā)利用受到限制。因此,國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者致力于多糖硒酸酯的制備、理化性質(zhì)及生物活性方面的研究[8-13]。楊晶晶等[14]采用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化紅景天多糖硒酸酯的制備工藝,并對(duì)產(chǎn)物性質(zhì)進(jìn)行了研究,紅外光譜顯示,紅景天多糖與硒元素通過酯鍵結(jié)合,產(chǎn)物穩(wěn)定性高;葛明明等[15]對(duì)蒲公英多糖硒酸酯的制備工藝進(jìn)行了優(yōu)化,并對(duì)硒含量進(jìn)行了測(cè)定,紅外光譜及差示掃描量熱分析顯示,蒲公英多糖硒酸酯產(chǎn)物中含有Se=O鍵和Se—C鍵,實(shí)現(xiàn)了蒲公英多糖的硒化,硒含量較高。但是,有關(guān)石榴皮多糖硒酸酯的制備及其結(jié)構(gòu)分析等領(lǐng)域的研究,國(guó)內(nèi)還鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)以石榴皮多糖和亞硒酸鈉為原料,硝酸為催化劑,制備了石榴皮多糖硒酸酯,通過響應(yīng)面分析法優(yōu)化了合成工藝條件,并對(duì)合成產(chǎn)物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析,為石榴皮多糖硒酸酯的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    石榴皮多糖(多次純化所得均一多糖) 棗莊學(xué)院生物學(xué)省級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心;硒粉標(biāo)準(zhǔn)品(純度>99.99%) 河南華宇化工原料有限公司;硝酸、亞硒酸鈉、無水乙醇、鹽酸、甲苯、高氯酸、硫酸 天津市大茂化學(xué)試劑廠;抗壞血酸 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;鄰苯二胺鹽酸鹽 天津市福晨化學(xué)試劑廠;以上試劑純度均為分析純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    IRPrestige-21型傅里葉變換紅外光譜儀、UV-2450型紫外光譜儀 日本島津公司;DE26300型綜合熱分析儀 美國(guó)鉑金埃爾默公司;TF-SFD-5型真空冷凍干燥機(jī) 上海拓紛制冷設(shè)備有限公司;JA5003B型電子分析天平 上海精科儀器有限公司;HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋上海藍(lán)凱儀器儀表有限公司;8000 dol透析袋 北京陽光斯德生物技術(shù)發(fā)展公司。

    1.3 方法

    1.3.1 石榴皮多糖硒酸酯的制備工藝

    以石榴皮多糖結(jié)構(gòu)中的單糖葡萄糖為例,在反應(yīng)過程中,由于6-位羥基較活潑,而且空間位阻較小,因此可與亞硒酸根脫水縮合成酯[16]。

    精密稱取1.0 g石榴皮多糖置于三口燒瓶中,加入規(guī)定質(zhì)量的硝酸溶液100 mL,使硝酸濃度達(dá)到設(shè)定值,加熱攪拌使固形物全部溶解,得到10 mg/mL的石榴皮多糖溶液。按照設(shè)定質(zhì)量比例加入亞硒酸鈉,調(diào)節(jié)水浴溫度至設(shè)定值,恒溫反應(yīng)至設(shè)定時(shí)間。反應(yīng)結(jié)束后,反應(yīng)液冷卻至室溫,抽濾,離心除去沉淀,所得溶液經(jīng)對(duì)流水透析,以除去酸根及未反應(yīng)的鹽類,取透析液少量加入抗壞血酸檢測(cè),直至無血紅色現(xiàn)象時(shí)停止透析。減壓濃縮至稠膏狀,由于多糖硒酸酯類成分易溶于極性較大的水中,而在高濃度乙醇中會(huì)沉淀,因此,加入無水乙醇至體積分?jǐn)?shù)達(dá)到85%,置于4 ℃條件下過夜,離心得到固形物,用無水乙醇洗滌3 次,真空干燥,得石榴皮多糖硒酸酯[14,16]。

    1.3.2 石榴皮多糖硒酸酯中硒含量測(cè)定

    1.3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定

    精密稱取干燥至恒質(zhì)量的硒粉50 mg置于50 mL燒杯中,加硝酸消化至溶液澄清后,以重蒸餾水定容至50 mL,備用。精密量取備用液1 mL,置于250 mL容量瓶中,以重蒸餾水定容,得硒對(duì)照品溶液(質(zhì)量濃度4 μg/mL)。精確量取硒對(duì)照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL,加重蒸餾水25 mL,以體積分?jǐn)?shù)0.5%稀鹽酸調(diào)pH 2,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%鄰苯二胺鹽酸鹽試液2 mL,分別置于100 mL分液漏斗中,充分振搖,靜置2 h,加入甲苯9.5 mL,萃取,靜置,分取甲苯層,定容至10 mL。利用紫外-可見光分光光度計(jì),在波長(zhǎng)334 nm處測(cè)定吸光度(A),以系列質(zhì)量濃度(C)作為橫坐標(biāo),A作為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[14,17],求得回歸方程為:A=0.183 2C+0.051 6,相關(guān)系數(shù)R2=0.999 1,硒在0~4.8 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度A之間線性關(guān)系良好。

    1.3.2.2 樣品硒含量的測(cè)定

    精密稱取石榴皮多糖和石榴皮多糖硒酸酯各20 mg,分別置于50 mL錐形瓶中,加入混酸(高氯酸-硫酸-硝酸(1∶1∶4,V/V),以濃酸為基準(zhǔn))3 mL消化至溶液澄清后,將錐形瓶置于95 ℃水浴鍋中靜置2 h,冷卻至室溫,加重蒸餾水25 mL,按照1.3.2.1節(jié)方法測(cè)定吸光度A,計(jì)算產(chǎn)物硒含量并按下式計(jì)算收率[15]。

    式中:m1為石榴皮多糖硒酸酯的質(zhì)量/mg;m2為石榴皮多糖的質(zhì)量/mg。

    1.3.3 石榴皮多糖硒酸酯制備工藝參數(shù)優(yōu)化

    單因素試驗(yàn)中,考察原料配比(1∶0.4、1∶0.6、1∶0.8、1∶1.0、1∶1.2、1∶1.4,g/g)、硝酸體積分?jǐn)?shù)(0.2%、0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%)、反應(yīng)溫度(40、50、60、70、80、90 ℃)和反應(yīng)時(shí)間(4、6、8、10、12、14 h)對(duì)石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量和產(chǎn)物收率的影響,每組分別作3 個(gè)平行,試驗(yàn)結(jié)果采用±s表示。在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,以原料配比、硝酸體積分?jǐn)?shù)、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間為自變量,并依次編碼為X1、X2、X3、X4,以3 個(gè)平行試驗(yàn)中產(chǎn)物硒含量(Y1)和產(chǎn)物收率(Y2)的平均值作為響應(yīng)值,通過響應(yīng)面分析進(jìn)行制備工藝條件的優(yōu)化,試驗(yàn)因素水平見表1。

    表1 響應(yīng)面試驗(yàn)因素水平Table 1 Actual and coded levels for the factors tested in response surface dessiiggnn

    1.3.4 石榴皮多糖硒酸酯結(jié)構(gòu)分析

    1.3.4.1 紫外光譜分析

    稱取石榴皮多糖硒酸酯和石榴皮多糖各20 mg,分別置于50 mL小燒杯中,加入混酸3 mL消化至無色,置于95 ℃水浴鍋中保溫2 h,取出后冷卻至室溫,加重蒸餾水25 mL,按照1.3.2.1節(jié)方法處理后,應(yīng)用UV-2450型紫外光譜儀,在波長(zhǎng)300~400 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描,分析產(chǎn)物的特征基團(tuán)[18-19]。

    1.3.4.2 紅外光譜分析

    稱取石榴皮多糖硒酸酯和石榴皮多糖各10 mg,加入預(yù)先處理好的干燥溴化鉀,攪拌均勻,在瑪瑙研缽中研磨壓片,應(yīng)用IRPrestige-21型傅里葉變換紅外光譜儀在波數(shù)4 000~400 cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描,分析產(chǎn)物的特征基團(tuán)[16,19]。

    1.3.4.3 差熱分析

    稱取石榴皮多糖硒酸酯和石榴皮多糖各10 mg,適當(dāng)處理后,應(yīng)用DE26300型綜合熱分析儀進(jìn)行熱重掃描,比較二者結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。升溫范圍為25~700 ℃,控制升溫速率10 ℃/min,氣氛為靜態(tài)氮?dú)?,參比物為AlO[18-19]。23

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計(jì)采用Design-Expert 8.0.5統(tǒng)計(jì)分析軟件,圖形制作采用Excel數(shù)據(jù)處理軟件。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 石榴皮多糖硒酸酯制備工藝參數(shù)優(yōu)化

    2.1.1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

    2.1.1.1 原料配比對(duì)產(chǎn)物硒含量及收率的影響

    固定硝酸體積分?jǐn)?shù)0.6%、反應(yīng)溫度70 ℃、反應(yīng)時(shí)間10 h,考察在不同原料配比條件下,石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量及收率,結(jié)果見圖1。

    圖1 原料配比對(duì)硒含量及收率的影響Fig. 1 Effects of ratio between two substrates on the Se contents and yields of polysaccharide selenate

    由圖1可知,石榴皮多糖和亞硒酸鈉的質(zhì)量比從1∶0.4到1∶1.0過程中,產(chǎn)物硒含量及收率隨亞硒酸鈉量的增加而呈增大趨勢(shì),在質(zhì)量比為1∶1.0時(shí),硒含量及收率達(dá)到最高;而后,隨著亞硒酸鈉質(zhì)量的增加,產(chǎn)物硒含量及收率反而降低。因此選擇原料配比為1∶1.0。

    2.1.1.2 硝酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)產(chǎn)物硒含量及收率的影響

    固定原料配比1∶1.0、反應(yīng)溫度70 ℃、反應(yīng)時(shí)間10 h,考察不同的硝酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量及收率的影響,結(jié)果見圖2。

    圖2 硝酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)硒含量及收率的影響Fig. 2 Effects of fi nal HNO3concentration on the Se content and yield of polysaccharide selenate

    由圖2可知,硝酸體積分?jǐn)?shù)對(duì)產(chǎn)物硒含量及收率的影響較大,隨著硝酸體積分?jǐn)?shù)的增加,產(chǎn)物硒含量及收率隨之增加,硝酸體積分?jǐn)?shù)達(dá)到0.6%時(shí),硒含量及收率達(dá)到最大值;但是,當(dāng)硝酸體積分?jǐn)?shù)超過0.6%后,硒含量及收率呈下降趨勢(shì),這可能與在較大體積分?jǐn)?shù)硝酸存在下,多糖的羥基被氧化或者糖鏈斷裂等因素有關(guān)。因此選擇硝酸體積分?jǐn)?shù)為0.6%。

    2.1.1.3 反應(yīng)溫度對(duì)產(chǎn)物硒含量及收率的影響

    固定原料配比1∶1.0、硝酸體積分?jǐn)?shù)0.6%、反應(yīng)時(shí)間10 h,考察不同的反應(yīng)溫度對(duì)石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量及收率的影響,結(jié)果見圖3。

    圖3 反應(yīng)溫度對(duì)硒含量及收率的影響Fig. 3 Effects of reaction temperature on the Se content and yield of polysaccharide selenate

    由圖3可知,反應(yīng)溫度在60~80 ℃之間時(shí),石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量及收率均居于較高水平,溫度較低時(shí),不利于反應(yīng)的進(jìn)行,產(chǎn)物硒含量及收率較低;溫度較高,在硝酸的氧化條件下,多糖的羥基會(huì)被加速氧化變質(zhì),同時(shí)會(huì)影響有機(jī)硒的穩(wěn)定性,產(chǎn)物硒含量及收率下降,因此,反應(yīng)溫度應(yīng)該控制在70 ℃左右。

    2.1.1.4 反應(yīng)時(shí)間對(duì)產(chǎn)物硒含量及收率的影響

    固定原料配比1∶1.0、硝酸體積分?jǐn)?shù)0.6%、反應(yīng)溫度70 ℃,考察不同的反應(yīng)時(shí)間對(duì)石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量及收率的影響,結(jié)果見圖4。

    圖4 反應(yīng)時(shí)間對(duì)硒含量及收率的影響Fig. 4 Effects of reaction time on the Se content and yield of polysaccharide selenate

    由圖4可知,石榴皮多糖硒酸酯的硒含量及收率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加,當(dāng)反應(yīng)時(shí)間達(dá)到10 h時(shí),產(chǎn)物硒含量及收率達(dá)到最大值,而后硒含量及收率呈下降趨勢(shì),可能是反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)促進(jìn)多糖降解,導(dǎo)致產(chǎn)物硒含量及收率降低。因此,反應(yīng)時(shí)間應(yīng)該控制在10 h左右。

    2.1.2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及顯著性分析

    在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,采用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法,以原料配比、硝酸體積分?jǐn)?shù)、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間為響應(yīng)變量,并依次編碼為X1、X2、X3、X4,以3 次平行試驗(yàn)中石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量(Y1)和產(chǎn)物收率(Y2)的平均值作為響應(yīng)值,通過響應(yīng)面分析進(jìn)行制備工藝條件的優(yōu)化[20-22]。試驗(yàn)方案與結(jié)果見表2。

    表2 響應(yīng)面試驗(yàn)方案與結(jié)果Table 2 Arrangement and corresponding results of Box-Behnken experimental desiiggnn

    對(duì)表2數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸擬合,得到石榴皮多糖硒酸酯中硒含量(Y1)和產(chǎn)物收率(Y2)對(duì)響應(yīng)變量X1、X2、X3、X4的回歸方程為:

    式(1)回歸模型的決定系數(shù)R2=0.945 2,P<0.0001,說明模型達(dá)到極顯著水平,失擬項(xiàng)P=0.140 9,影響不顯著,說明該方程擬合良好;式(2)回歸模型的決定系數(shù)R2=0.949 0,P<0.000 1,說明模型達(dá)到極顯著水平,失擬項(xiàng)P=0.158 7,影響不顯著,說明該方程擬合良好[22-23]。因此,可以應(yīng)用式(1)和式(2)兩個(gè)方程描述各響應(yīng)變量與兩個(gè)響應(yīng)值之間的關(guān)系,以評(píng)價(jià)各因素對(duì)響應(yīng)值影響的顯著性。

    表3 二次回歸方程方差分析結(jié)果Table 3 Analysis of variance of regression equation

    由表3可以看出,響應(yīng)值為硒含量的模型,各響應(yīng)因素影響程度依次為:X3>X1>X4>X2,反應(yīng)溫度對(duì)于產(chǎn)物硒含量的影響最大;響應(yīng)值為產(chǎn)物收率的模型,各響應(yīng)因素影響程度依次為:X4>X2>X3>X1,反應(yīng)時(shí)間對(duì)于產(chǎn)物收率的影響最大。

    2.1.3 各因素交互效應(yīng)分析

    應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件繪制兩兩因素之間交互影響的響應(yīng)面圖[23-24],見圖5。響應(yīng)面為平滑的曲面,且開口向下,說明在響應(yīng)曲面上存在最大響應(yīng)值,且最佳工藝條件就在所設(shè)計(jì)的因素水平范圍內(nèi),在此重點(diǎn)考察對(duì)響應(yīng)值影響顯著的交互效應(yīng)。響應(yīng)值為硒含量的模型,影響因素之間,X1與X4交互作用極其顯著(P<0.01),表現(xiàn)為馬鞍形,曲線比較陡峭;X2與X4、X3與X4之間交互作用較顯著(P<0.05)。響應(yīng)值為產(chǎn)物收率的模型,影響因素之間,X1與X3交互作用極其顯著(P<0.01),響應(yīng)曲線比較陡峭;X2與X3、X3與X4之間交互作用較顯著(P<0.05)。

    圖5 兩因素交互影響響應(yīng)面及等高線圖Fig. 5 Response surface and corresponding contour plots showing the interactive effects of two factors

    2.1.4 最佳制備工藝條件的確定及驗(yàn)證

    利用統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)所建立的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行工藝參數(shù)最優(yōu)化搜索[20,23],得到石榴皮多糖硒酸酯的最佳制備工藝條件為原料配比1∶1.022、硝酸體積分?jǐn)?shù)0.612%、反應(yīng)溫度77.1 ℃、反應(yīng)時(shí)間11.32 h,石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量的模型預(yù)測(cè)值為4.496 mg/g,產(chǎn)物收率的模型預(yù)測(cè)值為42.093%。為了檢驗(yàn)工藝參數(shù)的準(zhǔn)確性,根據(jù)上述試驗(yàn)條件進(jìn)行3 次平行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,此過程充分考慮實(shí)驗(yàn)中現(xiàn)實(shí)操作情況,將工藝參數(shù)修正為原料配比1∶1.0、硝酸體積分?jǐn)?shù)0.61%、反應(yīng)溫度77.0 ℃、反應(yīng)時(shí)間11.3 h,測(cè)得石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量為4.48 mg/g,產(chǎn)物收率為41.87%,偏差均小于1%,硒酸化后石榴皮多糖樣品中的結(jié)合硒含量明顯提高,說明應(yīng)用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)所得的最佳工藝參數(shù)具有可靠性。

    2.2 石榴皮多糖硒酸酯的結(jié)構(gòu)分析

    2.2.1 紫外光譜分析

    圖6 石榴皮多糖和石榴皮多糖硒酸酯的紫外光譜Fig. 6 UV spectra of pomegranate rind polysaccharide and pomegranate rind polysaccharide selenate

    由圖6可知,石榴皮多糖在波長(zhǎng)300~400 nm范圍內(nèi),沒有明顯的吸收峰;而石榴皮多糖硒酸酯在波長(zhǎng)334 nm處具有一個(gè)強(qiáng)吸收峰,與文獻(xiàn)[25]報(bào)道硒在波長(zhǎng)334 nm處所引起的吸收峰峰位吻合,表明硒酸化的石榴皮多糖中含有硒元素。

    2.2.2 紅外光譜分析

    圖7 石榴皮多糖和石榴皮多糖硒酸酯的紅外光譜Fig. 7 IR spectra of pomegranate rind polysaccharide and pomegranate rind polysaccharide selenate

    圖7 中1為石榴皮多糖的特征吸收峰,在3 416.42 cm-1處出現(xiàn)明顯寬峰,為O—H的伸縮振動(dòng)峰;在1 615.69 cm-1處出現(xiàn)多糖C=O伸縮振動(dòng)峰;在1 139.04~1 025.33 cm-1處出現(xiàn)多糖2 種C—O伸縮振動(dòng)峰。2為石榴皮多糖硒酸酯的特征吸收峰,吸收峰的波形、吸收強(qiáng)度和峰寬等指標(biāo)與未修飾的石榴皮多糖基本相同,說明修飾產(chǎn)物本身的結(jié)構(gòu)沒有遭到破壞,保持了石榴皮多糖原有的性質(zhì)。不同的是,石榴皮多糖硒酸酯紅外光譜在948.23、894.65 cm-1及762.30 cm-1處顯示了3 個(gè)明顯的特征吸收峰,948.23 cm-1處的吸收峰歸屬為Se=O伸縮振動(dòng)峰;894.65 cm-1處的吸收峰歸屬為C-Se伸縮振動(dòng)峰;762.30 cm-1處的吸收峰歸屬為Se-O伸縮振動(dòng)峰,證明了亞硒酸鈉已經(jīng)與石榴皮多糖結(jié)合成酯[16,19]。

    2.2.3 差熱分析

    圖8 石榴皮多糖和石榴皮多糖硒酸酯的熱分析圖譜Fig. 8 TGA of pomegranate rind polysaccharide and pomegranate rind polysaccharide selenate

    圖8為石榴皮多糖及其硒酸酯在氮?dú)鈼l件下的熱分析結(jié)果,由圖8a可知,2 種物質(zhì)的形態(tài)大致相同,第一階段質(zhì)量損失峰均為失去吸附水,石榴皮多糖28.8~225.4 ℃內(nèi)質(zhì)量損失率為13.7%,石榴皮多糖硒酸酯30.6~238.5 ℃內(nèi)質(zhì)量損失率為14.1%;隨著溫度的上升,石榴皮多糖及其硒酸酯在240~420 ℃內(nèi)出現(xiàn)快速質(zhì)量損失現(xiàn)象,石榴皮多糖硒酸酯的質(zhì)量損失峰形更加陡峭,石榴皮多糖在溫度225.4~327.9 ℃內(nèi)質(zhì)量損失率為46.5%,在400~600 ℃內(nèi)質(zhì)量損失率為14.8%;而石榴皮多糖硒酸酯238.5~420.3 ℃內(nèi)質(zhì)量損失率為67.9%,在600 ℃前已經(jīng)基本分解完全,產(chǎn)物的穩(wěn)定性低于未修飾前,這與文獻(xiàn)[19]報(bào)道一致。原因可能是,石榴皮多糖硒酸酯分子中引入亞硝酸基,改變了石榴皮多糖固有的分子結(jié)構(gòu),亞硝酸基的存在,使得產(chǎn)物在較高溫度條件下更容易脫水裂解,從而使得產(chǎn)物穩(wěn)定性降低。由圖8b可知,在氮?dú)猸h(huán)境中,石榴皮多糖及其硒酸酯的質(zhì)量損失過程均為放熱反應(yīng),沒有明顯的氧化過程,均為熱裂解反應(yīng)[18-19]。

    3 結(jié) 論

    本實(shí)驗(yàn)以石榴皮多糖與亞硒酸鈉為原料制備石榴皮多糖硒酸酯,以制備后的產(chǎn)物硒含量和產(chǎn)物收率為考察指標(biāo),通過單因素試驗(yàn)和Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法優(yōu)化了制備過程中的原料配比、硝酸體積分?jǐn)?shù)、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間4 個(gè)試驗(yàn)因素。結(jié)果顯示,影響產(chǎn)物硒含量的各因素主次順序?yàn)椋悍磻?yīng)溫度>原料配比>反應(yīng)時(shí)間>硝酸體積分?jǐn)?shù),反應(yīng)溫度對(duì)于產(chǎn)物硒含量的影響最大;影響產(chǎn)物收率的各因素主次順序?yàn)椋悍磻?yīng)時(shí)間>硝酸體積分?jǐn)?shù)>反應(yīng)溫度>原料配比,反應(yīng)時(shí)間對(duì)于產(chǎn)物收率的影響最大。最佳制備工藝條件為原料配比1∶1.0、硝酸體積分?jǐn)?shù)0.61%、反應(yīng)溫度77.0 ℃、反應(yīng)時(shí)間11.3 h,該工藝條件下,制得的石榴皮多糖硒酸酯產(chǎn)物硒含量為4.48 mg/g,產(chǎn)物收率為41.87%。

    紫外光譜分析顯示,產(chǎn)物在波長(zhǎng)334 nm處具有一個(gè)強(qiáng)吸收峰,該吸收峰由于硒酸化的石榴皮多糖中含有硒元素引起;紅外光譜分析顯示,制備后的石榴皮多糖硒酸酯在948.23、894.65 cm-1及762.30 cm-1處具有3 個(gè)明顯的特征吸收峰,證明了產(chǎn)物結(jié)構(gòu)中含有Se=O鍵、Se—O鍵和Se—C鍵,亞硒酸鈉已經(jīng)與石榴皮多糖結(jié)合成酯;熱分析顯示,由于產(chǎn)物結(jié)構(gòu)中亞硝酸基的存在,使產(chǎn)物在較高溫度條件下更容易脫水裂解,穩(wěn)定性降低。

    [1] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典: 一部[S]. 北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社, 2010: 87.

    [2] 趙艷紅, 李建科, 李國(guó)榮. 石榴皮多酚純化及其抗氧化活性表征[J].食品科學(xué), 2010, 31(11): 31-37.

    [3] 柯春林, 王娣, 鄧源喜, 等. 石榴皮多糖的制備及其抗氧化活性研究[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào), 2011, 32(4): 684-689. DOI:10.3969/ j.issn.1000-561.2011.04.023.

    [4] 張立華, 張?jiān)? 楊雪梅. 石榴不同部位提取物抗油脂氧化及抗菌活性的比較研究[J]. 中國(guó)糧油學(xué)報(bào), 2010, 26(4): 38-42.

    [5] 陳歷程, 張勇. 微量元素硒的研究現(xiàn)狀及其食品強(qiáng)化[J]. 食品科學(xué), 2002, 23(10): 134-137. DOI:10.3321/j.issn:1002-6630.2002.10.037.

    [6] 王振富, 鐘靈, 李玉山, 等. 恩施硒茶多糖對(duì)糖尿病模型大鼠血糖的影響[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2013, 33(22): 5628-5630.

    [7] 鐵梅, 惠秀娟, 張劍慧, 等. 有機(jī)硒多糖對(duì)鉻致小鼠細(xì)胞DNA損傷與氧化損傷的保護(hù)作用[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 30(1): 192-197.

    [8] TURLO J, GUTKOWSKA B, HEROLD F, et al. Isolation, composition analysis, antioxidant activity and cytotoxicity of selenium enriched polysaccharide fractions isolated from Lentinula edodes mycelial cultures[J]. New Biotechnology, 2009, 25(4): 12-15. DOI:10.1016/j.nbt.2009.06.031.

    [9] PANG X F, YANG G N, ZHAO Q, et al. Preparation of selenide glycyrrhiza polysaccharides[J]. Chemical Engineering, 2009, 37(9): 63-66. DOI:10.3969/j.issn.1005-9954.2009.09.017.

    [10] WANG Y Y, WU H G, GAO D B, et al. Research progress on polysaccharide containing selenium[J]. Chemical and Biochemical Engineering Quarterly, 2008, 25(2): 7-9. DOI:10.3969/ j.issn.1672-5425.2008.02.002.

    [11] 王紅連, 張東升, 張凌裳, 等. 硒化靈芝多糖制備及免疫學(xué)相關(guān)研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(17): 316-318. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6630.2009.17.074.

    [12] 池愛平, 李虹, 康琛喆, 等. 富硒茶多糖的提取及其對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞恢復(fù)的影響[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(13): 240-244. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201413047.

    [13] 孫軍德, 候靜, 楊逸, 等. 富硒蛹蟲多糖對(duì)魚藤酮誘導(dǎo)傷害果蠅的保護(hù)功效[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(7): 266-269. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201307056.

    [14] 楊晶晶, 黃家錕, 蔣開年, 等. 正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化紅景天多糖硒制備工藝及其性質(zhì)研究[J]. 中成藥, 2010, 32(6): 1065-1067. DOI:10.3969/ j.issn.1001-1528.2010.06.054.

    [15] 葛明明, 胡北, 孫麗娜, 等. 硒化蒲公英多糖的制備工藝及硒含量測(cè)定的研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2014, 35(8): 276-280. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.18.053.

    [16] 高義霞, 周向軍, 王鳳霞, 等. 刺槐豆多糖硒酸酯的制備及表征[J].食品工業(yè)科技, 2012, 33(14): 288-290; 298.

    [17] 高義霞, 袁毅君, 周向軍. 羅望子多糖硒酸酯的制備及表征[J]. 藥物分析雜志, 2012, 32(7): 1222-1226.

    [18] 張繼, 劉忠旺, 王鳳霞, 等. 蘭州百合多糖硒酸酯的合成與表征[J].高分子通報(bào), 2009, 22(10): 48-51.

    [19] 高義霞, 周向軍, 李娥春, 等. 刺梧桐多糖的硒酸化[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2010, 36(12): 134-136.

    [20] 王占一, 戴博, 王玉海, 等. 石榴皮總多酚脂質(zhì)體制備工藝參數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2015, 21(5): 33-37. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2015050033.

    [21] 何瑞雪, 高文宏, 曾新安, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化水溶性性大豆多糖-鐵(Ⅱ)配合的合成工藝[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(10): 98-102.

    [22] 王明艷, 周琴, 楊俊, 等. 響應(yīng)面法同步優(yōu)化裙帶菜中蛋白和多糖提取工藝[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(24): 66-71.

    [23] 紀(jì)學(xué)芹, 徐懷德, 張淑娟, 等. 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化超聲波提取光皮木瓜黃酮和多糖復(fù)合物[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(6): 47-51. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201306010.

    [24] 李亞輝, 馬艷弘, 黃開紅, 等. 響應(yīng)面法優(yōu)化復(fù)合酶提取蘆薈多糖工藝及其抗氧化活性分析[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(18): 63-68. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201418012.

    [25] 趙玉蘋. 海藻硒多糖的合成及生物活性研究[D]. 廣州: 暨南大學(xué), 2006.

    Optimized Preparation and Structural Analysis of Polysaccharide Selenate from Pomegranate Rind

    WANG Zhanyi1, DAI Bo2, ZHANG Lihua1, WANG Yuhai1, ZHENG Dandan1, WANG Fei1(1. College of Life Sciences, Zaozhuang University, Zaozhuang 277160, China; 2. Department of Pharmacology, General Hospital of Air Force, People’s Liberation Army of China, Beijing 100142, China)

    In this paper, polysaccharide selenate was prepared via the reaction between pomegranate rind polysaccharide and sodium selenite. Four reaction conditions including ratio between the substrates, final HNO3concentration, reaction temperature and time were optimized based on the selenium (Se) content and yield of product using single factor experiments and Box-Behnken experimental design. At the same time, the structure of the obtained product was analyzed. Results showed that the optimum reaction conditions for preparing polysaccharide selenate were established as follows: ratio between pomegranate rind polysaccharide and sodium selenite, 1:1.0 (g/g); fi nal HNO3concentration, 0.61%; temperature, 77.0 ℃; and time, 11.3 h. Under these conditions, the Se content and yield of polysaccharide ester selenate were 4.48 mg/g and 41.87%, respectively. Ultraviolet spectroscopic (UV), infrared spectroscopic (IR) and thermogravimetric analyses (TGA) fully confi rmed that the polysaccharide ester selenate contained Se=O, Se-O and Se-C. The selenization of pomegranate rind polysaccharide under the optimized reaction conditions can create a good condition for the full development and utilization of pomegranate rind resources.

    pomegranate rind polysaccharide; sodium selenite; polysaccharide selenate; ultraviolet spectroscopy; infrared spectroscopy; thermogravimetric analysis

    10.7506/spkx1002-6630-201610008

    284.2

    A

    1002-6630(2016)10-0040-07

    王占一, 戴博, 張立華, 等. 石榴皮多糖硒酸酯制備工藝參數(shù)優(yōu)化及其結(jié)構(gòu)分析[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(10): 40-46. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201610008. http://www.spkx.net.cn

    WANG Zhanyi, DAI Bo, ZHANG Lihua, et al. Optimized preparation and structural analysis of polysaccharide selenate from pomegranate rind[J]. Food Science, 2016, 37(10): 40-46. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201610008. http://www.spkx.net.cn

    2015-09-27

    2012年度國(guó)家星火計(jì)劃項(xiàng)目(2012GA740049);山東省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(ZR2013BL018)

    王占一(1980―),男,講師,碩士,主要從事天然藥物活性成分提取與分離研究。E-mail:zhyiwang@126.com

    猜你喜歡
    石榴皮硝酸反應(yīng)時(shí)間
    銅與稀硝酸反應(yīng)裝置的改進(jìn)與創(chuàng)新
    云南化工(2021年7期)2021-12-21 07:28:06
    石榴皮可治腹瀉
    石榴皮可治腹瀉
    硫脲濃度及反應(yīng)時(shí)間對(duì)氫化物發(fā)生-原子熒光法測(cè)砷影響
    一道關(guān)于鐵與硝酸反應(yīng)的計(jì)算題的七種解法
    用反應(yīng)時(shí)間研究氛圍燈顏色亮度對(duì)安全駕駛的影響
    汽車零部件(2018年5期)2018-06-13 08:42:18
    石榴皮驗(yàn)方四則
    含銅硝酸退鍍液中銅的回收和硝酸的再生
    硝酸鈀生產(chǎn)工藝研究
    超聲波輔助提取干制石榴皮多酚工藝研究
    久久久久久伊人网av| 极品教师在线视频| 观看美女的网站| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 日韩视频在线欧美| 欧美人与善性xxx| 永久网站在线| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 午夜福利视频精品| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 国产黄片美女视频| 精品久久久噜噜| 亚洲最大成人av| 一级二级三级毛片免费看| av在线播放精品| 国产高清国产精品国产三级 | 国产男人的电影天堂91| 国产精品一及| 久久久国产一区二区| 97在线视频观看| 亚洲av一区综合| 亚洲高清免费不卡视频| 日本欧美国产在线视频| 韩国av在线不卡| 久久久久久久国产电影| videos熟女内射| 免费av观看视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲av.av天堂| 69av精品久久久久久| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产在线男女| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 欧美另类一区| 久久人人爽人人片av| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美区成人在线视频| 成人国产麻豆网| 亚洲色图综合在线观看| 久热久热在线精品观看| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 在线观看三级黄色| 精品人妻熟女av久视频| 国产成人午夜福利电影在线观看| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产成人免费观看mmmm| 成人特级av手机在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 黄色怎么调成土黄色| 69av精品久久久久久| 97热精品久久久久久| videossex国产| 久久久久九九精品影院| 久久人人爽人人片av| 色视频www国产| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 精品国产露脸久久av麻豆| 精品熟女少妇av免费看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲自拍偷在线| 欧美bdsm另类| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品国产av在线观看| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 黄色怎么调成土黄色| 超碰97精品在线观看| 亚洲国产精品999| 婷婷色麻豆天堂久久| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 久久国产乱子免费精品| 在线观看免费高清a一片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲经典国产精华液单| 日韩大片免费观看网站| 麻豆成人午夜福利视频| 日韩在线高清观看一区二区三区| 五月伊人婷婷丁香| 国模一区二区三区四区视频| 新久久久久国产一级毛片| av天堂中文字幕网| 99久久精品热视频| 一本一本综合久久| 赤兔流量卡办理| 亚洲精品视频女| 男女国产视频网站| 美女视频免费永久观看网站| 大陆偷拍与自拍| 亚洲国产av新网站| 热99国产精品久久久久久7| 国产一区有黄有色的免费视频| 精品国产露脸久久av麻豆| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 插逼视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 下体分泌物呈黄色| 久久精品国产亚洲av涩爱| 欧美日韩在线观看h| 亚洲av一区综合| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 高清午夜精品一区二区三区| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 看非洲黑人一级黄片| 国精品久久久久久国模美| 成人亚洲精品av一区二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲av福利一区| 亚洲国产精品成人久久小说| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲精华国产精华液的使用体验| 日韩欧美精品v在线| 一区二区三区四区激情视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 大陆偷拍与自拍| 黑人高潮一二区| av国产久精品久网站免费入址| a级毛色黄片| 欧美极品一区二区三区四区| 内地一区二区视频在线| 久久久a久久爽久久v久久| 在线播放无遮挡| 天堂中文最新版在线下载 | 日本爱情动作片www.在线观看| 国产片特级美女逼逼视频| 国产91av在线免费观看| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美日韩综合久久久久久| 亚洲熟女精品中文字幕| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品久久久久久av不卡| 久久韩国三级中文字幕| 偷拍熟女少妇极品色| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 在线观看美女被高潮喷水网站| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 大香蕉97超碰在线| 高清毛片免费看| a级一级毛片免费在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 国产精品福利在线免费观看| 亚州av有码| 观看美女的网站| 久久久久网色| 国产色爽女视频免费观看| 亚洲在久久综合| 日韩欧美 国产精品| 精品久久久久久久久亚洲| 一级毛片电影观看| 免费黄网站久久成人精品| 熟女电影av网| 听说在线观看完整版免费高清| 中文字幕制服av| 最近中文字幕2019免费版| 一边亲一边摸免费视频| 嘟嘟电影网在线观看| 夫妻性生交免费视频一级片| 日韩强制内射视频| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看| 中文字幕制服av| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品三级大全| 成人亚洲精品av一区二区| av.在线天堂| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲av不卡在线观看| 大陆偷拍与自拍| 麻豆国产97在线/欧美| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲欧美精品自产自拍| av国产精品久久久久影院| 极品少妇高潮喷水抽搐| 日本与韩国留学比较| 亚洲精品影视一区二区三区av| 午夜精品一区二区三区免费看| 免费高清在线观看视频在线观看| 一区二区三区乱码不卡18| 国产探花在线观看一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜| 插阴视频在线观看视频| 国产毛片在线视频| 国产成年人精品一区二区| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品一区二区在线观看99| 大片电影免费在线观看免费| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲欧美精品自产自拍| 久久韩国三级中文字幕| 熟女av电影| 日本wwww免费看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 伦精品一区二区三区| 国产精品久久久久久精品电影| 国产精品99久久99久久久不卡 | 午夜老司机福利剧场| 久久久精品免费免费高清| 五月伊人婷婷丁香| 午夜激情福利司机影院| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲精品国产成人久久av| 99热这里只有精品一区| 午夜福利在线在线| 午夜福利视频1000在线观看| 91狼人影院| 日日撸夜夜添| 国产精品伦人一区二区| 成人毛片a级毛片在线播放| 久久97久久精品| 国产成人a区在线观看| 中文欧美无线码| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲国产精品999| 高清日韩中文字幕在线| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久亚洲精品成人影院| 欧美成人a在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 少妇被粗大猛烈的视频| 最近的中文字幕免费完整| h日本视频在线播放| 国国产精品蜜臀av免费| 丝袜喷水一区| 又大又黄又爽视频免费| 亚洲人与动物交配视频| 免费观看av网站的网址| 欧美性感艳星| 亚洲丝袜综合中文字幕| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲av不卡在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产精品不卡视频一区二区| 一级片'在线观看视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 大话2 男鬼变身卡| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 18+在线观看网站| 在线观看一区二区三区| 秋霞在线观看毛片| 中文天堂在线官网| 日韩免费高清中文字幕av| 高清视频免费观看一区二区| 久久久久久国产a免费观看| 欧美成人午夜免费资源| 午夜日本视频在线| 下体分泌物呈黄色| 国产午夜福利久久久久久| 综合色丁香网| 街头女战士在线观看网站| 黄片无遮挡物在线观看| 青青草视频在线视频观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品成人久久久久久| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 国产一级毛片在线| 少妇高潮的动态图| 日日撸夜夜添| 国产片特级美女逼逼视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| freevideosex欧美| 精品少妇久久久久久888优播| 免费黄网站久久成人精品| 大陆偷拍与自拍| 亚洲av福利一区| 精品人妻熟女av久视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 亚洲av免费高清在线观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 日韩中字成人| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲av国产av综合av卡| 五月天丁香电影| .国产精品久久| 欧美一区二区亚洲| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲精品乱久久久久久| 国产乱人偷精品视频| 国产黄频视频在线观看| 五月天丁香电影| 色网站视频免费| av国产精品久久久久影院| 国产又色又爽无遮挡免| 色哟哟·www| 久久久久久久久久久丰满| 国产精品成人在线| a级毛色黄片| 男的添女的下面高潮视频| 最后的刺客免费高清国语| 免费看光身美女| 97在线视频观看| 亚洲av成人精品一区久久| 又大又黄又爽视频免费| 18禁动态无遮挡网站| 男女边摸边吃奶| 国产精品熟女久久久久浪| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 国产老妇女一区| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 中文字幕免费在线视频6| 免费高清在线观看视频在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 日韩人妻高清精品专区| 人妻少妇偷人精品九色| 亚洲精品aⅴ在线观看| 一级毛片我不卡| 大香蕉久久网| 嫩草影院新地址| 中文资源天堂在线| 国产高清国产精品国产三级 | 在线观看av片永久免费下载| 五月天丁香电影| 国产有黄有色有爽视频| 性色avwww在线观看| 精品酒店卫生间| 超碰av人人做人人爽久久| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久久精品94久久精品| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 精品一区在线观看国产| 久热这里只有精品99| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产 一区精品| 一级黄片播放器| 国产永久视频网站| 毛片女人毛片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 99精国产麻豆久久婷婷| 插阴视频在线观看视频| 精品熟女少妇av免费看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲性久久影院| 搡老乐熟女国产| av专区在线播放| 亚州av有码| 免费黄频网站在线观看国产| 黑人高潮一二区| 最近最新中文字幕大全电影3| www.色视频.com| 亚洲人成网站在线播| 亚洲成人中文字幕在线播放| 中文字幕亚洲精品专区| 黄片wwwwww| 一级av片app| 亚洲成人精品中文字幕电影| 香蕉精品网在线| 国产 一区精品| 婷婷色av中文字幕| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲不卡免费看| 日韩中字成人| 久久精品国产a三级三级三级| 欧美bdsm另类| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久久久久伊人网av| 免费看日本二区| 精品人妻视频免费看| 久久99热6这里只有精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 免费在线观看成人毛片| 免费看a级黄色片| 国产精品国产三级国产专区5o| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产69精品久久久久777片| 22中文网久久字幕| 人妻系列 视频| 午夜日本视频在线| 日韩一区二区三区影片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久久久性生活片| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 成年免费大片在线观看| 国产精品成人在线| 嘟嘟电影网在线观看| av国产免费在线观看| 美女高潮的动态| 国产精品国产三级专区第一集| 乱系列少妇在线播放| 精品人妻偷拍中文字幕| 午夜激情福利司机影院| 深夜a级毛片| 少妇人妻精品综合一区二区| av在线观看视频网站免费| 色视频www国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 高清毛片免费看| 免费av毛片视频| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产高清三级在线| 高清av免费在线| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 五月玫瑰六月丁香| 免费少妇av软件| 亚洲精品视频女| 在线免费观看不下载黄p国产| 成人毛片a级毛片在线播放| 狂野欧美激情性bbbbbb| av在线观看视频网站免费| 婷婷色av中文字幕| 99热国产这里只有精品6| 久久久久久久大尺度免费视频| 日韩中字成人| 精品人妻一区二区三区麻豆| 五月玫瑰六月丁香| 国产午夜精品一二区理论片| 午夜免费鲁丝| h日本视频在线播放| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国内精品宾馆在线| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 免费观看性生交大片5| 国产成人一区二区在线| av在线播放精品| 成人亚洲精品一区在线观看 | 五月天丁香电影| 久久热精品热| 青春草国产在线视频| av免费观看日本| 99久久人妻综合| 亚洲av免费在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产精品女同一区二区软件| 人妻一区二区av| 视频中文字幕在线观看| 老司机影院毛片| 高清欧美精品videossex| 边亲边吃奶的免费视频| 美女高潮的动态| 99热国产这里只有精品6| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲欧洲日产国产| 十八禁网站网址无遮挡 | 一级毛片电影观看| 国产成人一区二区在线| 亚洲精品影视一区二区三区av| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲怡红院男人天堂| 中文字幕制服av| 我的女老师完整版在线观看| 亚洲丝袜综合中文字幕| 18禁在线播放成人免费| 白带黄色成豆腐渣| 高清欧美精品videossex| 午夜福利高清视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲成人精品中文字幕电影| 高清在线视频一区二区三区| 色哟哟·www| 国产伦在线观看视频一区| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 亚洲欧美一区二区三区国产| 婷婷色综合大香蕉| 在线观看一区二区三区激情| 久久ye,这里只有精品| 黄色一级大片看看| 一本一本综合久久| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品久久久久久精品古装| 男女下面进入的视频免费午夜| 男女那种视频在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 五月开心婷婷网| 99久国产av精品国产电影| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| xxx大片免费视频| kizo精华| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一二三四中文在线观看免费高清| 国产成人精品久久久久久| 韩国av在线不卡| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产色爽女视频免费观看| av一本久久久久| 色综合色国产| 国产精品一区www在线观看| 日本色播在线视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 搡老乐熟女国产| 久久久久久久久久久免费av| 男人爽女人下面视频在线观看| 免费看a级黄色片| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 高清av免费在线| 十八禁网站网址无遮挡 | 欧美激情在线99| 成年女人看的毛片在线观看| 久久精品久久久久久久性| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美 日韩 精品 国产| www.av在线官网国产| 久久久成人免费电影| 中文字幕免费在线视频6| 精品久久久久久电影网| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产69精品久久久久777片| 中文欧美无线码| 美女视频免费永久观看网站| 日韩中字成人| 成年av动漫网址| av免费观看日本| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 99九九线精品视频在线观看视频| 91精品一卡2卡3卡4卡| 偷拍熟女少妇极品色| 在线精品无人区一区二区三 | 99久国产av精品国产电影| 麻豆久久精品国产亚洲av| 水蜜桃什么品种好| 午夜福利在线在线| 超碰97精品在线观看| 日本色播在线视频| 国产91av在线免费观看| 精品久久久久久电影网| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲精品色激情综合| 联通29元200g的流量卡| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲精品一二三| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 免费大片黄手机在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 国产成人精品久久久久久| 嘟嘟电影网在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 精品酒店卫生间| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品久久久久久精品电影| 熟女av电影| 禁无遮挡网站| 精华霜和精华液先用哪个| 欧美一级a爱片免费观看看| 最近中文字幕高清免费大全6| 三级国产精品欧美在线观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 十八禁网站网址无遮挡 | 插阴视频在线观看视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 嫩草影院新地址| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 中文字幕免费在线视频6| 成人特级av手机在线观看| 国产高清不卡午夜福利| 国产亚洲一区二区精品| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品一区www在线观看| 国产伦精品一区二区三区视频9| 波多野结衣巨乳人妻| 性色avwww在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 成人欧美大片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲欧美精品专区久久| 99热这里只有是精品50| 久久97久久精品| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产 一区 欧美 日韩| 只有这里有精品99| 久久久久久久亚洲中文字幕| 黄色怎么调成土黄色| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日本三级黄在线观看| 18禁在线播放成人免费| 成人毛片60女人毛片免费| 熟妇人妻不卡中文字幕| 国产亚洲最大av| 99视频精品全部免费 在线| 国产精品伦人一区二区| 色哟哟·www| 人体艺术视频欧美日本| 美女视频免费永久观看网站| 夫妻午夜视频| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 国产男人的电影天堂91| 成人免费观看视频高清| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 精品午夜福利在线看| 亚洲色图av天堂| 国产亚洲一区二区精品| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲经典国产精华液单| 免费看av在线观看网站|