人參Rb組皂苷對(duì)大鼠體內(nèi)外血栓形成的影響

曲 莉 于曉風(fēng) 徐華麗 睢大筼

(吉林省疾病預(yù)防控制中心，吉林 長(zhǎng)春 130062)

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人參Rb組皂苷對(duì)大鼠體內(nèi)外血栓形成的影響

曲 莉 于曉風(fēng)1徐華麗1睢大筼1

(吉林省疾病預(yù)防控制中心，吉林 長(zhǎng)春 130062)

目的 觀察人參Rb組皂苷(G-Rb)對(duì)大鼠體內(nèi)、外血栓形成的影響。方法 Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組及陽(yáng)性藥組。對(duì)照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉2 ml/kg，G-Rb三個(gè)劑量組分別灌胃G-Rb 17.5、35、70 mg/kg，陽(yáng)性藥組灌胃通心絡(luò)膠囊1 000 mg/kg，連續(xù)7 d。①體外旁路循環(huán)實(shí)驗(yàn)：從頸總動(dòng)脈至頸外靜脈插入一根帶有絲線并充滿肝素-生理鹽水的聚乙烯套管，連接形成體外旁路循環(huán)。②電刺激實(shí)驗(yàn)：分離右頸總動(dòng)脈，將不銹鋼電極放置在該動(dòng)脈處，并在其遠(yuǎn)端放置溫度測(cè)量探頭備測(cè)血管表面的溫度。1.5 mA直流電持續(xù)刺激7.5 min。③體外血栓形成實(shí)驗(yàn)：用硅化注射器由腹主動(dòng)脈采血1.8 ml，立即注入內(nèi)徑4 mm硅化聚乙烯塑料環(huán)中，置LBY-S5體外血栓形成儀上分別測(cè)定血栓濕重及血栓干重。結(jié)果 G-Rb 35、70 mg/kg組均可使體外旁路循環(huán)法所致血栓濕重明顯減輕，明顯延長(zhǎng)電刺激法所致頸總動(dòng)脈血栓形成時(shí)間及凝血時(shí)間，顯著提高凝血酶原濃度，并可使體外血栓形成實(shí)驗(yàn)所致血栓濕重及血栓干重均明顯減輕(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論 G-Rb對(duì)大鼠體內(nèi)、外血栓形成均具有明顯抑制作用。

人參Rb組皂苷；血栓；體外旁路循環(huán)

人參Rb組皂苷(Ginsenoside-Rb,G-Rb)系從五加科人參屬植物西洋參(Panax Quinquefolium Linn)莖葉及根提取的總皂苷中分離得到的有效部位群，保證了人參皂苷Rb組分(包括Rb1、Rb2和Rb3)的完整性。前期研究表明，G-Rb能縮小急性心肌梗死犬心肌梗死面積，降低血清磷酸肌酸激酶及乳酸脫氫酶活性，并明顯降低血清LPO含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性〔1〕；可明顯降低實(shí)驗(yàn)性心肌梗死大鼠血液黏度和游離脂肪酸水平〔2〕；亦能降低心肌耗氧量，改善冠脈循環(huán)、抗自由基氧化損傷及增加心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量等〔3～5〕；對(duì)結(jié)扎大鼠腹主動(dòng)脈所致壓力超負(fù)荷性心室重構(gòu)具有保護(hù)作用，可改善心室重構(gòu)大鼠的左心收縮和舒張功能，減少縮血管活性物質(zhì)對(duì)心肌的損傷，糾正PGI2/TXA2失衡〔6〕；對(duì)大鼠結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈伴低血壓所致實(shí)驗(yàn)性腦缺血模型具有明顯保護(hù)作用〔7〕。G-Rb是否也具有防治體內(nèi)、外血栓形成作用，目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文觀察G-Rb對(duì)大鼠體內(nèi)、外血栓形成的影響，為擴(kuò)大其治療缺血性腦中風(fēng)的適應(yīng)證提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar大鼠，雌雄各半，體重220～250 g，合格證號(hào)SCXK-(吉)2007-0003，吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥品 G-Rb 由吉林人參研究院提供，批號(hào)：20101220，人參皂苷Rb組分含量86.5%，實(shí)驗(yàn)時(shí)以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度；陽(yáng)性對(duì)照藥品：通心絡(luò)膠囊，石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，批號(hào)20110706；規(guī)格：0.38 g/粒；用法：口服，2～4粒/次，3次/d。功能主治：益氣活血、通絡(luò)止痛，用于冠心病心絞痛，證屬心氣虛乏、血瘀絡(luò)阻者。試驗(yàn)時(shí)以0.5%羧甲基纖維素鈉配制成所需濃度。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 對(duì)大鼠動(dòng)脈-靜脈旁路血栓形成的影響 50只Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，陽(yáng)性藥通心絡(luò)膠囊1 000 mg/kg組及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組，每組10只。G-Rb及陽(yáng)性藥組分別灌胃給藥，對(duì)照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，均1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后30 min，以戊巴比妥鈉30 mg/kg麻醉大鼠，按文獻(xiàn)方法制作大鼠動(dòng)脈-靜脈旁路血栓模型〔8〕，分離右頸總動(dòng)脈及左頸外靜脈，將充滿肝素的聚乙烯管(將兩根內(nèi)徑1 cm、長(zhǎng)10 cm的聚乙烯管2根，接于內(nèi)徑2 cm、長(zhǎng)8 cm聚乙烯管1根，粗管段上放入1根6 cm已稱重的線)一端插入靜脈，另一端插入頸總動(dòng)脈。開(kāi)啟動(dòng)脈，血流由頸總動(dòng)脈流入頸靜脈。15 min后中斷血流，取出絲線用微量電子秤取濕重(mg)，計(jì)算血栓重量及抑制率。血栓濕重(mg)= 總重量-線重量。抑制率=〔(對(duì)照組血栓重-給藥組血栓重)/ 對(duì)照組血栓重〕×100%。

1.3.2 對(duì)大鼠電刺激血栓形成時(shí)間、凝血時(shí)間及凝血酶原濃度的影響 50只Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，陽(yáng)性藥(予通心絡(luò)膠囊1 000 mg/kg)組及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組，每組10只。G-Rb及陽(yáng)性藥組分別灌胃給藥，對(duì)照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，均1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后30 min，以戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，分離右頸總動(dòng)脈15 mm，將不銹鋼電極放置在該動(dòng)脈處，并在其遠(yuǎn)端放置溫度測(cè)量探頭備測(cè)血管表面的溫度。1.5 mA直流電持續(xù)刺激7.5 min。當(dāng)頸總動(dòng)脈內(nèi)因血栓形成堵塞血流時(shí)，血管遠(yuǎn)端溫度突降，從刺激開(kāi)始到溫度突降所需時(shí)間為血栓形成時(shí)間(OT)。以O(shè)T值和延長(zhǎng)率作為判斷藥效的指標(biāo)。延長(zhǎng)率=(給藥組血栓形成時(shí)間-空白對(duì)照組血栓形成時(shí)間)/空白對(duì)照組血栓形成時(shí)間×100%。大鼠取血，測(cè)凝血時(shí)間；離心，取血清，測(cè)定大鼠凝血酶原濃度〔9〕。

1.3.3 對(duì)大鼠體外血栓形成的影響 50只Wistar大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組，陽(yáng)性藥(予通心絡(luò)膠囊1 000 mg/kg)組及G-Rb 17.5、35、70 mg/kg組，每組10只。G-Rb及陽(yáng)性藥組分別灌胃給藥，對(duì)照組灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉，均1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后30 min，按文獻(xiàn)方法〔8〕制作體外血栓模型，腹主動(dòng)脈取血2.0 ml加入體外血栓管中，將血栓管環(huán)狀套在體外血栓形成儀轉(zhuǎn)動(dòng)盤上，開(kāi)動(dòng)儀器，圓盤轉(zhuǎn)動(dòng)速度為17 r/min。轉(zhuǎn)動(dòng)15 min后停轉(zhuǎn)，迅速取下血栓管，把管內(nèi)血液及形成血栓倒在培養(yǎng)皿中，將血栓放在干濾紙上，測(cè)量其長(zhǎng)度，吸干表面鮮血，稱重，減去紙片重量后記錄血栓的濕重，將濕血栓連同紙片放入烤箱中(64℃)20 min，取出稱其重量，減去紙片重量為血栓干重。

2 結(jié) 果

2.1 G-Rb對(duì)大鼠動(dòng)脈-靜脈旁路血栓形成的影響 與對(duì)照組比較，G-Rb 35、70 mg/kg組及陽(yáng)性藥組的血栓濕重均明顯降低(P<0.05)，其抑制率分別為23.94%、26.06%及24.65%，見(jiàn)表1。

表1 G-Rb對(duì)大鼠動(dòng)脈-靜脈旁路血栓形成的影響

與對(duì)照組比較：1)P<0.05

2.2 G-Rb對(duì)大鼠電刺激血栓形成時(shí)間、凝血時(shí)間及凝血酶原濃度的影響 與對(duì)照組比較，G-Rb 35、70 mg/kg組及陽(yáng)性藥組均能明顯延長(zhǎng)血栓形成時(shí)間及凝血時(shí)間(P<0.05 或P<0.01)，G-Rb 70 mg/kg組亦能顯著提高凝血酶原濃度(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 G-Rb對(duì)電刺激血栓形成及凝血時(shí)間、凝血酶原濃度的影響

與對(duì)照組比較:1)P<0.05，2)P<0.01；下表同

2.3 G-Rb對(duì)大鼠體外血栓形成的影響 與對(duì)照組比較，G-Rb 35、70 mg/kg組及陽(yáng)性藥組均能明顯降低大鼠體外血栓濕重及干重(P<0.05 或P<0.01)，G-Rb 70 mg/kg組亦能明顯降低大鼠血栓長(zhǎng)度(P<0.05 )，見(jiàn)表3。

表3 G-Rb對(duì)大鼠體外血栓形成的影響±s，n=10)

3 討 論

動(dòng)脈粥樣硬化是心腦缺血的病理基礎(chǔ)。血栓形成不僅與動(dòng)脈粥樣硬化斑塊有關(guān)，在斑塊破裂、斑塊內(nèi)出血與斑塊碎屑等導(dǎo)致動(dòng)脈閉塞等一系列變化的過(guò)程中起主要作用〔10〕。血栓形成的直接因素為血液凝固及血小板黏附與聚集，也與血管壁損傷、血液黏度的升高及血流速度減慢有關(guān)。Chandler法形成血栓的組織結(jié)構(gòu)與人的動(dòng)脈血栓相似，其中含有血小板、紅細(xì)胞、纖維蛋白和水分等〔11〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，G-Rb可使體外旁路循環(huán)法所致血栓濕重明顯減輕，明顯延長(zhǎng)電刺激法所致頸總動(dòng)脈血栓形成時(shí)間及凝血時(shí)間，顯著提高凝血酶原濃度，并可使體外血栓形成實(shí)驗(yàn)所致血栓濕重及血栓干重均明顯減輕，提示其對(duì)大鼠體內(nèi)、外血栓形成均具有明顯的拮抗作用，這種活性對(duì)防治缺血性腦血管疾病非常有價(jià)值。G-Rb抑制血栓形成的作用可能與延長(zhǎng)凝血時(shí)間、提高凝血酶原濃度有關(guān)，確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

1 睢大員，陳滿秋，于曉風(fēng)，等.人參Rb組皂苷對(duì)犬實(shí)驗(yàn)性心肌梗死的保護(hù)作用〔J〕.中草藥，2001;32(2):136-9.

2 覃秀川，睢大員，楊景文，等.人參Rb組皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性心梗大鼠血液粘度和游離脂肪酸水平的影響〔J〕.中草藥，2002;32(6):540-4.

3 孫 乾，睢大員，于曉風(fēng)，等.人參Rb組皂苷對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗死犬心臟血流動(dòng)力學(xué)和氧化謝的影響〔J〕.中草藥，2002;33(8):718-22.

4 覃秀川，睢大員，楊景文，等.人參Rb組皂甙對(duì)急性心肌梗死大鼠自由基代謝的影響〔J〕.吉林中醫(yī)藥，2002;22(3)：51-3.

5 徐華麗，翟玉榮，曲紹春，等.人參Rb組皂苷對(duì)小鼠心肌營(yíng)養(yǎng)性血流量的影響〔J〕.人參研究，2003;15(3):2-4.

6 王天曉，于曉風(fēng)，曲紹春，等.人參Rb組皂苷對(duì)壓力負(fù)荷性心肌肥厚大鼠心室重構(gòu)的影響及其作用機(jī)制〔J〕.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008;19(7)：1615-7.

7 張涵亮，于曉風(fēng)，曲紹春，等.人參Rb 組皂苷對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性腦缺血的影響〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2011;31(12)：2247-9.

8 石鶴坤，甘 雨，秦文艷，等.贏絡(luò)復(fù)欣顆粒對(duì)大鼠血栓形成及小鼠腸系膜微循環(huán)障礙的影響〔J〕.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011;17(3)：167-9.

9 岳海濤，李金成，呂銘洋，等.紅花注射液對(duì)大鼠血栓形成的影響及其作用機(jī)制〔J〕.中草藥，2011;42(8)：1585-7.

10 劉澤霖，賀石林，李家增，等.血栓性疾病的診斷與治療〔M〕.北京：人民衛(wèi)生出版社，2000;262-3.

11 殷蔚荑，孟娟如，劉進(jìn)揚(yáng)，等.四甲基吡嗪對(duì)實(shí)驗(yàn)性血栓形成的影響〔J〕.中國(guó)藥理學(xué)報(bào)，1981;2(4)：238-40.

〔2015-11-12修回〕

(編輯 徐 杰)

吉林省科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20085060)

睢大筼(1957-)，男，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事心腦血管藥理學(xué)研究。

曲 莉(1963-)，女，主任醫(yī)師，主要從事老年病、慢性疾病防控研究。

R-322

A

1005-9202(2016)21-5258-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.21.019

1 吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室