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    仔豬豬瘟母源抗體消長規(guī)律測定

    2016-11-28 03:52:15羅先岑曉鵬應(yīng)清香范斯敏
    中國畜禽種業(yè) 2016年9期
    關(guān)鍵詞:移液器南平市母源

    羅先 岑曉鵬 應(yīng)清香 范斯敏

    (1,福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 350002;2,福建省南平市延平區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 353000;3,福建省南平市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 353000;4,福建省南平市建陽區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 354200)

    仔豬豬瘟母源抗體消長規(guī)律測定

    羅先1岑曉鵬2應(yīng)清香3范斯敏4

    (1,福建農(nóng)林大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院 350002;2,福建省南平市延平區(qū)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 353000;3,福建省南平市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 353000;4,福建省南平市建陽區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 354200)

    選擇福建省南平市某規(guī)?;i場豬瘟抗體檢測合格的10頭能繁母豬,分別從每頭母豬所生的仔豬中隨機(jī)抽取2頭,共20頭,25日齡斷奶,不注射豬瘟疫苗,分別于l日齡、5日齡、10日齡、15日齡、20日齡、25日齡、30日齡、35日齡、40日齡用豬瘟病毒抗體ELISA檢測試劑盒檢測豬瘟抗體水平,通過檢測數(shù)據(jù)掌握母源抗體的消長規(guī)律。結(jié)果表明,哺乳仔豬出生后5~10日齡血清抗體陽性率達(dá)到了100%,為最高。抗體水平于15日齡以后開始降低,至25日齡左右達(dá)到保護(hù)臨界值 (80%陽性率),40日齡時(shí)降低到5%。

    仔豬;豬瘟;母源抗體;消長規(guī)律

    哺乳仔豬在一段時(shí)間內(nèi)被動(dòng)地獲得抵御病毒的能力,完全依賴于母源抗體的存在,但母源抗體又會(huì)影響免疫接種。本研究監(jiān)測了斷奶前后不同日齡的仔豬豬瘟抗體水平,得出的數(shù)據(jù)便于掌握母源抗體消長規(guī)律,有利于豬瘟免疫程序的合理制定。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)樣品

    挑選的哺乳仔豬為福建省南平市某規(guī)?;i場同期分娩的10頭經(jīng)產(chǎn)母豬 (分娩前均經(jīng)過血清學(xué)檢測,判定為豬瘟抗體合格保護(hù)力)所產(chǎn),隨機(jī)抽取每頭母豬所產(chǎn)的仔豬中的2頭,共20頭。不接種豬瘟疫苗免疫,仔豬于25日齡斷奶。分別于l日齡、5日齡、10日齡、15日齡、20日齡、25日齡、30日齡、35日齡、40日齡采集血液分離血清,并進(jìn)行豬瘟抗體檢測,觀察母源抗體的消長規(guī)律。

    1.2 試劑

    IDEXX公司豬瘟病毒抗體 (CSFV-Ab)ELISA檢測試劑盒,批號43220-Y241。包括用CSFV-Ag包被的微量反應(yīng)板,陽性對照血清(Positive Control), 陰性對照血清(Negative Control), 樣品稀釋液(Sample Diluent), 酶標(biāo)抗體(Conjugate), 10 倍濃縮洗滌液(Wash Concentrate×10), TMB 底物溶液(TMB Substrate), 終止液(Stop Solution), 均購自北京IDEXX生物科技有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)器材

    MH-2微量振蕩器、QL-901 Vortex離心機(jī)、Eppendorf 10~100μl單道移液器、 BRAND30~300μl 8 道移液器、 AXYGEN 200μl移液器吸頭、Thermo Multiskan MK3型酶標(biāo)儀、BioTek洗板機(jī)、500ml量筒、超純水機(jī)、記時(shí)器等。

    1.4 試驗(yàn)方法

    (1)試驗(yàn)前,所有試劑需恢復(fù)到室溫(18~25℃)。通過輕輕旋轉(zhuǎn)使試劑均勻混合。

    (2)取出用抗體包被的微量反應(yīng)板,并將每個(gè)樣品的位置在記錄表上標(biāo)記好。

    (3)用8道移液器吸取50μl的樣品稀釋液加入每個(gè)反應(yīng)孔中。

    (4)陰陽性對照各設(shè)置2孔,余下的反應(yīng)孔為被檢樣品。用單道移液器吸取50μl陰性對照血清加入陰性對照孔,再吸取50μl陽性對照血清加入陽性對照孔,然后吸取50μl被檢樣品加入余下的反應(yīng)孔。

    (5)將反應(yīng)板置于振蕩器中,振蕩混勻。

    (6)在恒溫箱室溫孵育2h。

    (7)用洗板機(jī)洗滌每個(gè)反應(yīng)孔,每孔加入300μl洗液,洗滌3次。最后一次洗滌后,將反應(yīng)板在折疊好的紗布上拍干。

    (8)用8道移液器吸取100μl酶標(biāo)抗體加入每個(gè)反應(yīng)孔中,在恒溫箱室溫下孵育30min。

    (9)重復(fù)步驟(7)。

    (10)用8道移液器吸取100μl的TMB底物溶液加入每個(gè)反應(yīng)孔中。在室溫條件下于避光處孵育10min。

    (11)用8道移液器吸取100μl終止液加入每個(gè)反應(yīng)孔中,終止反應(yīng)。

    (12)置于酶標(biāo)儀上,用450nm單波長測定樣本以及對照的吸光值(A450值)。

    (13)結(jié)果計(jì)算:阻斷率=(陰性對照平均A450值-樣品A450值)/陰性對照平均A450值×100%;

    (14)實(shí)驗(yàn)成立條件:陰性對照的平均A450值大于0.50, (陰性對照平均A450值-陽性對照平均A450值)/陰性對照平均A450值×100%的值大于50%。

    (15)判定標(biāo)準(zhǔn):具體見表1。

    表1 豬瘟抗體檢測結(jié)果判定

    2 結(jié)果

    母源抗體結(jié)果詳見表2。

    3 分析與討論

    從表2可以看出,仔豬出生后5~10日齡血清抗體陽性率達(dá)到了100%,為最高??贵w水平于15日齡以后開始降低,至25日齡左右達(dá)到保護(hù)臨界值 (80%陽性率),40日齡時(shí)已經(jīng)降低到了5%。因?yàn)楸驹囼?yàn)中規(guī)定仔豬在25日齡斷奶,所以母源抗體水平在25日齡后下降的速度變快,應(yīng)該與此有關(guān)。鑒于該場的現(xiàn)有情況看來,在不采用超前免疫的情況下,26日齡為較佳的豬瘟疫苗免疫時(shí)間。

    通過試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn),仔豬母源抗體水平下降速度取決于對應(yīng)母豬的抗體水平,這與以往的一些研究結(jié)果基本符合。Vandeputte[1]發(fā)現(xiàn),母源抗體能在哺乳仔豬吃奶后2h后被檢測到,并能持續(xù)7周以上。豬瘟強(qiáng)毒在仔豬7周齡免疫后不能感染機(jī)體,未免疫的對照組則呈現(xiàn)出典型的發(fā)病癥狀。劉莉等[2]通過檢測400頭仔豬的血清抗體發(fā)現(xiàn),豬瘟疫苗按常規(guī)免疫接種后,母豬產(chǎn)下的仔豬其母源抗體呈現(xiàn)出正態(tài)分布,從1日齡開始逐漸升高,可在11~16日齡達(dá)到最高峰值,之后母源抗體將隨著仔豬日齡的增長開始逐漸降低,大約有部分仔豬(將近50%)的抗體水平于21日齡時(shí)降到1:16甚至更低。在這個(gè)階段接種免疫疫苗不但能保持抗體在血清中的效價(jià),還能避開干擾的母源抗體。林毅等[3]應(yīng)用豬瘟Dot-ELISA試劑盒檢測仔豬的抗體結(jié)果如下:7日齡豬的瘟抗體保護(hù)率為80.0%、14日齡的保護(hù)率為60.0%、21日齡的保護(hù)率為33.3%、28日齡的保護(hù)率為13.4%、35日齡的保護(hù)率為6.7%。其中7日齡仔豬的母源抗體水平較高。

    表2 仔豬豬瘟母源抗體檢測結(jié)果

    綜上所述,仔豬的母源抗體消長規(guī)律決定了仔豬豬瘟的免疫日齡,而這一規(guī)律必須通過抗體監(jiān)測數(shù)據(jù)來確定。選擇的免疫時(shí)間應(yīng)該為仔豬母源抗體降低至保護(hù)率80%的這個(gè)最低臨界值的日齡,這樣既能維持抗體在血清中的效價(jià),又能不受母源抗體的干擾。由于母豬的血清抗體與仔豬的母源抗體水平有著緊密的聯(lián)系,所以在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)定期監(jiān)測母豬的母源抗體水平,根據(jù)檢測所得的數(shù)據(jù)對免疫程序進(jìn)行調(diào)整優(yōu)化,才能夠更科學(xué)地提高豬群對豬瘟病毒的免疫力,有效地控制和避免豬瘟疫情在豬場的發(fā)生。

    [1]災(zāi)andeputte J,Too HL.Adsorption of colostral antibodies against classical swine fever,persistence of maternal antibodies,and effect on response to vaccination in baby pigs[J].Am J災(zāi)et Res,2001,62(11):1805-1811.

    [2]劉莉,金璐娟,楊旭,等.規(guī)?;i場豬瘟母源抗體消退規(guī)律[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2004(10):46-47.

    [3]林毅,馮金傳,張道永.規(guī)模化豬場4種免疫程序的免疫效果比較[J].中國獸醫(yī)科技,2000,30(4):20-22.

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