茉莉酸信號受體COI蛋白家族的分子進化與基因表達分析

段龍飛, 李文燕, 慕小倩, 張園園, 郭邦利, 陳國愛

(1.安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，陜西 安康 725021；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心，廣州510640；3.西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

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茉莉酸信號受體COI蛋白家族的分子進化與基因表達分析

段龍飛1,3, 李文燕2,3, 慕小倩3, 張園園1, 郭邦利1, 陳國愛1

(1.安康市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，陜西 安康 725021；2.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物基因研究中心，廣州510640；3.西北農(nóng)林科技大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，陜西 楊凌 712100)

茉莉酸(Jasmonic acid, JA)存在于所有高等植物中，是植物對病原微生物和蟲害防御反應(yīng)的關(guān)鍵激素。在茉莉酸信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中，COI1(COR-insensitive 1)作為茉莉酸信號受體蛋白在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究采用生物信息學(xué)方法, 從藻類、苔蘚類、蕨類、裸子及單、雙子葉植物多譜系對COI蛋白家族進行比較基因組學(xué)研究，并取得以下結(jié)果：(1)同源基因鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在所選的7種陸生植物中一共鑒定了55個COIs同源基因，然而，在低等的水生植物包括綠藻類(Chlorophytes)、紅藻類(Rhodophytes)、硅藻類(Bacillariophytes)、灰胞藻類(Glaucophytes)及褐藻類(Phaeophytes)等基因組中均未發(fā)現(xiàn)其同源基因;(2)系統(tǒng)進化樹分析表明，植物COI 蛋白家族可以分為4個保守的亞家族，且在陸生植物擴增的同時可能已發(fā)生功能分化;(3)基因結(jié)構(gòu)分析顯示，植物COI家族基因結(jié)構(gòu)表現(xiàn)多樣性，主要體現(xiàn)在內(nèi)含子的數(shù)目和長度上;(4)基因表達數(shù)據(jù)提示，COI基因家族成員參與植物生長發(fā)育的多個時期，且在不同組織器官以及不同的脅迫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮不同的作用。以上結(jié)果將為植物COI基因家族的深入研究提供參考。

茉莉酸信號；COI蛋白家族；系統(tǒng)發(fā)育；擴增與進化；基因表達

茉莉酸(Jasmonic acid, JA)是植物應(yīng)對病蟲害防御反應(yīng)的關(guān)鍵激素，可以調(diào)控植物的生長發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因表達以及應(yīng)答外界刺激等[1]。當(dāng)植物受到一系列生物或非生物刺激時，茉莉酸信號途徑上的關(guān)鍵基因就會激活并表達[2]。在JA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中需要多個基因的共同參與，而COI1/JAZ/MYC2則是其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中最為核心的基因[3]。COI1(COR-insensitive 1)作為茉莉酸信號的受體蛋白，在其中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。COI1(COR-insensitive1) 受體蛋白可以與SKP1(S-phase kinase-associated protein 1)、CUL1(Cullin1) 和RBX1(Ring-box1)組合并且形成SCFCOI1泛素連接酶復(fù)合體，進而參與介導(dǎo)JA信號[5]。Xie等從擬南芥中分離到COI1 基因，并證明COI1是F-box 蛋白超家族成員，COI1蛋白功能缺失直接影響JA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)[6]。隨后，Sheard等揭示了COI1與JAZ蛋白相互作用的感受機制，并且構(gòu)建了COI1 蛋白的晶體結(jié)構(gòu)：該結(jié)構(gòu)與TIR1(生長素受體)結(jié)構(gòu)相似。在其N 端有一個三螺旋的F-box 結(jié)構(gòu)域，可以和SKP1蛋白結(jié)合形成SCFCOI1復(fù)合物，C 端為LRRs 結(jié)構(gòu)域，可特異性識別底物[7]。

目前，盡管對擬南芥AtCOI1 基因進行生理生化等多方面的研究，然而，對COI基因家族在植物基因組中的進化規(guī)律仍不清楚。因此，本研究采用生物信息學(xué)方法, 從藻類植物、苔蘚植物、蕨類植物、裸子及單、雙子葉植物等多譜系角度對COI基因家族進行比較基因組學(xué)研究，揭示植物COI基因家族的起源與進化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 COI家族同源基因的鑒定

采用HMMsearch和BLAST兩種檢索方法對植物COI家族同源基因進行檢索。(1)HMMsearch檢索結(jié)果如下：首先，利用已報道AtCOI1 氨基酸序列進行BLASTp檢索PLAZA數(shù)據(jù)庫；其次，利用HMMER v3.0[8]軟件包的hmmbuild程序建立COI蛋白家族保守結(jié)構(gòu)域序列HMMprofile；最后，利用hmmsearch程序在默認參數(shù)下進行本地非冗余蛋白數(shù)據(jù)庫的檢索。(2)本地BLAST檢索方法如下：以擬南芥的AtCOI1 氨基酸序列為靶序列，利用BioEdit v7.0軟件中的BLASTp程序分別檢索本地蛋白數(shù)據(jù)庫(注：含有15種代表植物的非冗余蛋白序列，詳見表1)；同時，在線檢索NCBI數(shù)據(jù)庫〔注：含綠藻類(Chlorophyta)、紅藻類(Rhodophytes)、硅藻類(Bacillariophytes)、灰胞藻類(Glaucophytes)以及褐藻類(Phaeophytes)等低等藻類植物〕[9]。(3)利用SMART數(shù)據(jù)庫[10]對HMMsearch和BLASTp檢索所獲得的COI同源候選蛋白進行結(jié)構(gòu)域分析，并下載候選蛋白所對應(yīng)基因序列和CDS序列進行基因結(jié)構(gòu)分析[11]。

表1 不同植物中 COI同源基因及相關(guān)信息

1.2 COI基因家族系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

采用在線EBI中 Clustalw2 (http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2/)[12]在默認參數(shù)下對COI同源蛋白序列進行序列比對；然后，利用在線Gblock[13]對比對結(jié)果進行分析，并選擇序列保守區(qū)段；最后，利用PhyML3.0軟件，選擇Jones-Taylor-Thornton (JTT)模型，bootstrap檢驗選用100次重復(fù)，Maximum Likelihood[14]構(gòu)建COI蛋白家族系統(tǒng)發(fā)育樹[15-17]。

1.3 COI家族基因結(jié)構(gòu)、定位及區(qū)段重復(fù)分析

利用基因結(jié)構(gòu)系統(tǒng)(Gene Structure Display Server, GSDS)分析COI家族基因外顯子-內(nèi)含子的分布及相位[18]。利用PLAZA數(shù)據(jù)庫WGMapping工具(http://bioinformatics.psb.ugent.be/plaza/genoe_mapping/index)對COI家族基因進行染色體定位。利用植物區(qū)段重復(fù)數(shù)據(jù)庫(Plant Genome Duplication Database，PGDD)中Locus-Search在線工具(http://chibba.agtec.uga.edu/duplication/index/locus) 對COI家族基因進行區(qū)段重復(fù)分析[19]。

1.4 COI家族基因組織和誘導(dǎo)表達譜分析

利用Bio-Array Resource for Plant Biology (BAR)(http://142.150.215.220/)數(shù)據(jù)庫中的Rice eFP Browser[20]和 Arabidopsis eFP Browser[21]網(wǎng)頁工具， 對水稻和擬南芥COI家族基因進行分析，查找的不同發(fā)育時期以及誘導(dǎo)表達芯片數(shù)據(jù)[22]。

2 結(jié)果與分析

2.1 COI同源基因鑒定結(jié)果

通過HMMsearch和BLAST檢索結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在所選擇的7種陸生植物中一共發(fā)現(xiàn)了55個COIs同源基因。然而，在綠藻類(Chlorophytes)、紅藻類(Rhodophytes)、 硅藻類(Bacillariophytes)、灰胞藻類(Glaucophytes)、及褐藻類(Phaeophytes)等基因組中均未發(fā)現(xiàn)COI同源基因。這表明，在低等的水生藻類植物基因組中，COI及其同源基因并未出現(xiàn)，見圖1。

此外，保守結(jié)構(gòu)域分析表明(見圖2b)，55個陸生植物COIs同源基因保守結(jié)構(gòu)域可分為四種類型。第一種含有典型的F-box和LRR結(jié)構(gòu)域(AtCOI2、AtCOI3和AtCOI5)；第二種類型僅含有典型的F-box結(jié)構(gòu)域(AtCOI4)；第三種類型僅含有典型的LRR結(jié)構(gòu)域(AtCOI6)；第四種類型既沒有典型的F-box結(jié)構(gòu)域，也沒有典型的LRR結(jié)構(gòu)域(AtCOI1和AtCOI7)。由此推測，COIs蛋白家族結(jié)構(gòu)域分化可能會產(chǎn)生功能的分化。

圖1 植物COI家族基因在不同植物中同源基因的拷貝數(shù)Fig. 1 the number of COI homologue genes among different plant

2.2 COI家族基因系統(tǒng)進化分析

為了探究COI家族基因的進化規(guī)律，本研究利用檢索的COI同源蛋白序列構(gòu)建系統(tǒng)進化樹。根據(jù)COI家族進化樹的拓撲結(jié)構(gòu)，可分為4個亞家族，命名為Subs.I～IV(見圖2a)。序列比對結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SmCOI7保守性較差，因此未包含于進化樹。其中Sub.I和Sub.III兩個亞家族包含了苔蘚類、蕨類、裸子及單、雙子葉植物的COIs；Sub. II中也有苔蘚類、蕨類、單子葉及雙子葉植物的COIs；而Sub.IV只包含苔蘚植物的COIs，并且在進化樹的最下端。與此同時，苔蘚植物的PpCOIs也分布于其它三個亞家族Subs. I～III。由此提示，植物COI家族基因可能最先起源于苔蘚植物中，且在陸生植物中發(fā)生基因擴增后進而形成多個COI亞家族。

進一步分析發(fā)現(xiàn)，Sub.I亞家族的AtCOI3即AtTIR1是生長素信號途徑的受體蛋白，該亞家族所包含的COIs基因可能是參與生長素信號途徑的候選基因。而Sub. III亞家族中的AtCOI1是茉莉酸信號途徑的受體蛋白，該亞家族中包含的COIs基因可能是參與茉莉酸途徑的候選基因。由此表明，植物COI家族在陸生植物發(fā)生擴增后形成的多個亞家族已開始發(fā)生功能分化。

2.3 COI基因家族擴增與進化機制

COI家族基因進行染色體定位結(jié)果發(fā)現(xiàn)(見圖3)，在高粱、水稻、毛果楊和擬南芥染色體上均未發(fā)現(xiàn)串聯(lián)重復(fù)現(xiàn)象。而利用PDGG數(shù)據(jù)庫進行區(qū)段重復(fù)分析發(fā)現(xiàn)(見圖3)， 植物COI家族基因在進化過程中存在物種內(nèi)區(qū)段重復(fù)，其中，在單子葉植物高粱基因組中有1對重復(fù)區(qū)段即SbCOI1/SbCOI2；而雙子葉植物擬南芥和毛果楊基因組中共存在6對區(qū)段重復(fù)即AtCOI4/AtCOI5、AtCOI6/AtCOI7、PtCOI3/PtCOI4、PtCOI5/PtCOI6、PtCOI8/PtCOI9和PtCOI7/PtCOI10。

此外，在COI基因家族系統(tǒng)發(fā)育樹中存在11對旁系同源基因，其中，苔蘚類植物小立碗蘚4對即PpCOI1/PpCOI2、PpCOI7/PpCOI8、PpCOI9/PpCOI11和PpCOI10/PpCOI12。蕨類植物江南卷柏1對即SmCOI3/SmCOI4，雙子葉植物擬南芥和毛果楊共6對即AtCOI4/AtCOI5、AtCOI6/AtCOI7、PtCOI3/PtCOI4、PtCOI5/PtCOI6、PtCOI7/PtCOI10和PtCOI8/PtCOI9。旁系同源基因主要發(fā)生在物種內(nèi)的基因復(fù)制，因此，該結(jié)果提示COI家族基因在各個物種內(nèi)可能發(fā)生了特異性的擴增。

2.4 COI家族基因結(jié)構(gòu)進化

基因結(jié)構(gòu)分析顯示(見圖2c)，植物COI家族基因結(jié)構(gòu)表現(xiàn)多樣性，主要體現(xiàn)在內(nèi)含子的數(shù)目和長度上。從內(nèi)含子數(shù)目上發(fā)現(xiàn)，COI家族基因的內(nèi)含子數(shù)在2～5個之間，其中有31個COIs基因含有2個內(nèi)含子，約占59.6%，15個COIs基因含有3個內(nèi)含子，約占28.8%，4個COIs基因含有4個內(nèi)含子，約占7.7%，2個COIs基因含有5個內(nèi)含子，約占3.8% (見圖2c)；從內(nèi)含子長度上發(fā)現(xiàn)，該家族最短的內(nèi)含子僅有47 bp(SmCOI7的第三個內(nèi)含子)，而最長的內(nèi)含子有3236 bp(OsCOI9基因的第一個內(nèi)含子)。內(nèi)含子數(shù)目和長度的變化提示，COI家族基因在物種的進化過程中可能發(fā)生內(nèi)含子的插入缺失。另外，鑒于裸子植物云杉(Picea sitchensis)基因組尚未完成測序，故PsCOIs基因的結(jié)構(gòu)未能確定。

圖2 植物COI蛋白家族系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系、保守結(jié)構(gòu)域及基因結(jié)構(gòu)*Fig. 2 Phylogenetic relationship, domain organization and exon-intron structure of COI genes in plants

注：*圖中綠方框代表外顯子，線條代表內(nèi)含子；數(shù)字0，1和2分別代表內(nèi)含子的相位。

*彩圖見電子版(http://swxxx.alljournals.cn/ch/index.aspx)(2016年第3期doi:10.3969/j.issn.1672-5565.2016.03.04)。

進一步分析發(fā)現(xiàn)，苔蘚類植物小立碗蘚PpCOIs含有2～5個內(nèi)含子，蕨類植物江南卷柏SmCOIs含有2～3個內(nèi)含子，單子葉植物水稻OsCOIs和高粱SbCOIs含有2～4個內(nèi)含子，雙子葉植物擬南芥AtCOIs和毛果楊PtCOIs含有2～3個內(nèi)含子。而COI家族基因中內(nèi)含子的數(shù)目以2個或3個為主，約占88%。結(jié)合系統(tǒng)進化樹發(fā)現(xiàn)，苔蘚植物的PpCOI4和PpCOI6都含有5個內(nèi)含子，且位于進化樹的最下端。由此提示，COI基因家族在陸生植物發(fā)生擴增同時可能發(fā)生了內(nèi)含子的丟失。

2.5 COI基因家族不同發(fā)育時期和誘導(dǎo)表達結(jié)果分析

為了闡明COI基因家族在植物生長發(fā)育過程中可能存在的功能分化現(xiàn)象，我們對擬南芥和水稻基因芯片表達譜數(shù)據(jù)進行收集和分析。分析結(jié)果表明，擬南芥的7個AtCOIs在不同組織器官中均有表達，但是表達量存在差異(見圖4)。其中AtCOI2根和花發(fā)育12期花瓣中的表達量明顯高于其他家族成員；AtCOI6在莖、葉和花發(fā)育12期心皮中的表達量也顯著高于其他家族成員；AtCOI3在干種子的表達量最高。不同脅迫條件下，擬南芥AtCOIs家族成員的表達量也存在差異，具體表現(xiàn)為，在冷脅迫下(見圖5a～b)，擬南芥幼芽中AtCOI7表達量有所上調(diào)，其他6個AtCOIs表達量均表現(xiàn)為下調(diào)；在擬南芥根中除AtCOI1表現(xiàn)為上調(diào)，其他6個AtCOIs表達量也表現(xiàn)為下調(diào)。在鹽脅迫下(見圖5c～d)，擬南芥幼芽中AtCOI2、AtCOI4和AtCOI5表達量明顯下調(diào)，AtCOI3、AtCOI6和AtCOI7表現(xiàn)為上調(diào)；而在擬南芥根中除了AtCOI3表達量上調(diào)，其他6個6個AtCOIs表達量均出現(xiàn)下調(diào)。在干旱脅迫下(見圖5e～f)，擬南芥COIs幼芽和根中表達規(guī)律一致，其中AtCOI1、AtCOI2和AtCOI4表達量明顯下調(diào)，AtCOI3、AtCOI5、AtCOI6和AtCOI7表現(xiàn)為上調(diào)。

圖3 植物COI家族基因在染色體上的定位及物種內(nèi)區(qū)段重復(fù)Fig. 3 Chromosomal locations and intra-specie segmental duplications of COI family genes in monocots and eudicots

注：虛線表示在物種內(nèi)的COI同源基因重復(fù)區(qū)段。

圖4 擬南芥COI家族基因在不同器官中的表達Fig. 4 The expression profiles COI family genes among different organs in Arabidosis

注：擬南芥的不同器官包括根、莖、第7葉(葉柄, 葉近端半、葉遠側(cè)半)、花發(fā)育12期(萼片、花瓣、雄蕊)和種子。

圖5 擬南芥 COI家族基因在不同脅迫下的表達Fig. 5 The expression profiles of COI family genes among different stress in Arabidosis

與擬南芥相比，水稻的9個OsCOIs在所選的7個不同組織器官中均有不同程度的表達(見圖6)。其中OsCOI2在水稻葉、花以及種子的表達量顯著高于其他8個OsCOIs，相反，OsCOI4和OsCOI6在所選的7個組織器官中表達量顯著低于其他OsCOIs家族成員。應(yīng)對冷脅迫、鹽脅迫以及干旱脅迫，水稻的7個OsCOIs發(fā)生了不同的響應(yīng)。其中，三種脅迫下OsCOI2在水稻根和幼芽中的表達量出現(xiàn)明顯的上調(diào)，而OsCOI4和OsCOI6表達量仍然沒有明顯的響應(yīng)(見圖7)。

以上結(jié)果表明，COIs基因家族成員參與植物生長發(fā)育的多個時期，且在不同組織器官以及在不同的脅迫應(yīng)答反應(yīng)中發(fā)揮不同的作用。COI基因家族在擬南芥和水稻中表達出現(xiàn)了顯著差異分化, 有可能導(dǎo)致家族成員出現(xiàn)功能差異, 從而增加了COI基因家族功能多樣性和豐富度, 但COI家族基因的表達也不是完全獨立的, 而是存在一定的規(guī)律, 這說明他們之間的功能也存在一定的協(xié)作和相互作用。

圖6 水稻COI家族基因在不同器官中的表達Fig. 6 The expression profiles COI family genes among different organs in rice

注：水稻不同器官包括根、葉(成熟葉、未成熟葉)、苗端分生組織、花和種子。

圖7 水稻COI家族基因在不同脅迫下的表達Fig. 7 The expression profiles of COI family genes among different stress in rice

3 討論及結(jié)論

通過HMMsearch和BLAST檢索結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在低等的藻類基因組中均未發(fā)現(xiàn)COI同源基因。然而，在所選的代表陸生植物中均發(fā)現(xiàn)了COI同源基因，且存在多個拷貝。已有研究表明，在低等水生藻類植物中有發(fā)現(xiàn)F-box家族成員，但是數(shù)量相對較少；而在陸生植物中發(fā)現(xiàn)大量的F-box家族成員，其中擬南芥和水稻中分別有692和779個[23]。結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn)，茉莉酸受體COI1含有F-box-like，而 F-box-like(PF12937)結(jié)構(gòu)域即分化的F-box(PF00646)結(jié)構(gòu)域。由此推測，F(xiàn)-box基因家族在由水生到陸生植物的進化過程中發(fā)生大量基因擴增，同時，在陸生植物中形成了一類新的家族即COI基因家族。

在擬南芥中，AtCOI1是茉莉酸的受體，AtCOI3(TIR1)是生長素的受體[24]，兩者在序列和結(jié)構(gòu)上均有較高的同源性，然而，在功能上已出現(xiàn)了分化現(xiàn)象。此外，從擬南芥中鑒定的AtCOIs家族成員中，除AtCOI1外，其他6個家族成員AtCOI2(AFB1) 、AtCOI3(TIR1)、AtCOI4(AFB3)、AtCOI5(AFB2)、AtCOI6(AFB5)和AtCOI7(AFB4)都是生長素信號的關(guān)鍵組分[14]。值得一提的是，系統(tǒng)發(fā)育樹提示，AtCOI1和其他6個AtCOIs有明顯的聚類分歧關(guān)系。具體表現(xiàn)為，Sub. III亞家族中僅存在一個擬南芥基因即(AtCOI1)。同時，SMART結(jié)構(gòu)域分析顯示，該亞家族中COIs基因都沒有典型的F-box和LRR 結(jié)構(gòu)域(見圖2b)。但是利用Pfam (http://pfam.janelia.org/)對AtCOI1進行結(jié)構(gòu)域分析顯示，AtCOI1含有F-box-like和LRR_4結(jié)構(gòu)域，但是均為insignificant即不典型，E值分別為0.009 7和0.069。由此推測，植物COI家族基因的主要功能是參與植物激素的信號調(diào)控，而在進化的過程中發(fā)生了功能的分化現(xiàn)象，既有參與生長素信號的調(diào)控，也有參與茉莉酸信號的調(diào)控。

同源基因在不同的組織器官中表達, 可為該家族基因的生理、生化、基因功能分化研究提供重要的信息。通過分析擬南芥和水稻COIs基因表達數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，COIs基因在不同組織器官中都有表達, 但在不同組織部位以及不同脅迫下的表達存在著差異。由此推測，植物COIs家族在由低等到高等植物的進化的過程中，為適應(yīng)外界環(huán)境而分化出不同的家族成員，且不同家族成員之間存在明顯的功能差異，進而增加了COI蛋白功能多樣性和豐富度。

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Molecular evolution and gene expression of Jasmonic acid receptor COI protein family

DUAN Longfei1,3, LI Wenyan2,3*, MU Xiaoqian3, ZHANG Yuanyuan1, GUO Bangli1, CHEN Guoai1

(1.InstituteofAgriculturalSciencesofAnkang,AnkangShaanxi725021,China;2.Agro-biologicalGeneResearchCenter,GuangdongAcademyofAgriculturalSciences,Guangzhou510640,China;3.CollegeofLifeSciences,NorthwestA&FUniversity,YanglingShaanxi712100,China)

Jasmonic acid as a plant hormone, which is important on pathogenic microorganisms and insect defense response in high plant. COI1 (COR-insensitive 1) as the receptor of JA signal, plays a key role in the signal transduction. Comparative genomic analysis was performed to investigate the original and evolutionary relationship among COI paralogs in plants. The main results are as follows: (1) 55 COI homologs were identified from 7 representative terrestrial species.Moreover, there were no COI homologs in aquatic algae. Phylogenetic analysis revealed 4 well-conserved subfamilies in plants. Lineage-specific expansion and functional differentiation exists among COI gene family. (3) Exon-intron structure analysis revealed that the gene structures of COI gene family is diversity，which has a variable number and length of introns. (4)Gene data suggest that COI gene family is involved in plant growth and development, and play different roles in different tissues and stress response. We provide valuable information for investigating the COI protein family in plants.

JA signaling pathway;COI gene family;Phylogenetic analysis;Expansion and evolution; Gene expression

2016-04-14；

2016-07-26.

國家自然科學(xué)基金項目(31401300)和廣東省自然科學(xué)基金項目(2015A030313572)。

段龍飛，男，碩士，研究方向：基因家族進化；E-mail: duanlongfei88888@126.com.

*通信作者：李文燕，男，博士，研究方向：作物逆境分子生物學(xué)；E-mail:Liwy1023@foxmail.com.

10.3969/j.issn.1672-5565.2016.03.04

Q344+.13

A

1672-5565(2016)03-146-10