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    小鵝瘟病毒抗原免疫雞對蛋黃抗體產(chǎn)生規(guī)律的實踐

    2016-11-24 07:53:56莊光陳祥珍
    鄉(xiāng)村科技 2016年14期
    關(guān)鍵詞:雷州市小鵝水劑

    莊光 陳祥珍

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    小鵝瘟病毒抗原免疫雞對蛋黃抗體產(chǎn)生規(guī)律的實踐

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    小鵝瘟疫是一種發(fā)生在3周齡以內(nèi)雛鵝身上的亞急性或急性的敗血傳染性疾病,這種病毒具有傳染速度快、致死亡率高、發(fā)病率高的特征。基于此,通過向產(chǎn)蛋雞注射不同劑量的小鵝瘟病毒抗原的試驗,來尋找抗體產(chǎn)生的規(guī)律,創(chuàng)造一種高質(zhì)量、高效率的抗體方法,降低養(yǎng)鵝的風(fēng)險。

    小鵝瘟病毒;免疫;抗體

    小鵝瘟病毒是一種發(fā)生在雛鵝身上的急性或亞急性敗血傳染病,這種病毒主要產(chǎn)生于3周左右的雛鵝身上,具有高死亡率、高傳播率、高發(fā)病率的特征[1]。該文闡述的試驗是對蛋雞注射不同劑型的小鵝瘟病毒免疫抗原,從蛋黃中檢測抗體產(chǎn)生的規(guī)律,為研究小鵝瘟病蛋黃抗體提供資料。

    1 蛋黃抗體的簡介

    蛋黃抗體是指蛋黃中存在的抗體,也稱蛋黃免疫球蛋白。科學(xué)家在鳥類的血液循環(huán)中發(fā)現(xiàn)了3種免疫球蛋白。母雞在細(xì)胞分裂產(chǎn)蛋的過程中,會將其免疫球蛋白轉(zhuǎn)移至雞蛋;母雞血漿中的IgA與IgM,會在輸卵管中與其他的蛋白質(zhì)結(jié)合而構(gòu)成雞蛋蛋白部分。比較特別的是,在成熟期中,血清IgG會經(jīng)蛋黃薄膜轉(zhuǎn)移到蛋黃中,蛋黃的IgG與哺乳類的IgG在分子量、等電點、細(xì)胞膜上Fc受質(zhì)的鍵結(jié)構(gòu)上存在著相異點而被特定稱為IgY。雞卵黃免疫球蛋白G抗體是一種7S免疫球蛋白,與哺乳動物IgG略有不同。該蛋白質(zhì)分子量約為180 KDA,含2個亞單位,即67-70KDA的重鏈和22-30KDA的輕鏈,存在于免疫后母雞的卵黃中。

    2 材料和試劑

    水劑抗原體,滅活的小鵝瘟病毒絨尿液與生理鹽水按照1∶1的比例稀釋。油劑抗原體,滅活的小鵝瘟病毒絨尿液與礦物油按照1∶1的比例混合在一起。標(biāo)準(zhǔn)劑量的小鵝溫瓊擴診斷抗原體。挑選健康的可以產(chǎn)蛋的雞35只。

    瓊擴平板:將1.0 g的優(yōu)質(zhì)瓊脂粉添加到含8%氯化鈉的溶液中,將混合液進(jìn)行加熱待完全溶化后再加入濃度約為0.01%的硫柳貢防腐,澆制凝膠板,冷卻后放置在溫度約為4℃的空間內(nèi)保存。

    表1 第一次免疫后蛋黃中的抗體水平

    表2 第二次免疫后蛋黃中的抗體水平

    3 試驗方法

    3.1 免疫的方式方法

    將35只雞分在7個雞籠中,每籠5只雞,給挑選出的35只健康雞注射抗原體,用肌肉注射的方式給每只雞注射水劑抗原體1 mL。每天都要注射,從第6天開始,每隔3、5 d就取雞蛋進(jìn)行測驗,當(dāng)雞的免疫力降到log2時開始注射二次疫苗。在進(jìn)行第2次疫苗接種時,將7籠進(jìn)行分類注射,前3籠的雞只給注射1 mL的水劑抗原體,后4籠的雞只注射1 mL的油劑抗原體。

    3.2 抗體的檢測方式

    在免疫前后要檢測蛋黃中的抗小鵝瘟病毒瓊擴抗體,將每組產(chǎn)出的雞蛋具體細(xì)化分組,在每只雞蛋中取相同等量的蛋黃,按照1∶1的比例將蛋黃混合在一起并稀釋,等到離心棄脂肪后取出蛋液留作檢測。再將瓊擴抗體凝膠板按照中央1孔,外圍6孔的方式進(jìn)行打孔,孔徑要控制在3 mm左右,間距約為4 mm,加入的樣本量為25 μL,并將樣本做陰陽性的血清對照。加入樣本后放置在恒溫為37℃的濕度空間內(nèi)進(jìn)行雞蛋孵卵24 h,再在室內(nèi)放置24~48 h。根據(jù)初步的觀察現(xiàn)象可以判斷出的結(jié)果為:蛋黃抗體的效價就是在標(biāo)準(zhǔn)抗原體形成的白色沉淀線的最大抗體稀釋倍數(shù)值。

    4 試驗過程與結(jié)果

    4.1 試驗過程

    取出小鵝瘟病毒水劑抗原體,給35只普通雞翅下肌肉注射陰性的1 mL小鵝瘟病毒抗原瓊擴抗體,據(jù)觀察發(fā)現(xiàn)35只雞并未出現(xiàn)應(yīng)激的現(xiàn)象,雞群仍在正常的生活、產(chǎn)蛋。注射后按時收集雞蛋并對蛋黃進(jìn)行檢測,推斷抗小鵝瘟病毒的蛋黃抗體水平。

    第27天檢測發(fā)現(xiàn)雞蛋中蛋黃抗小鵝瘟病毒體的抗體滴已經(jīng)下降到了log2,則需要給雞群進(jìn)行分組注射,第2次注射要按照分組的形式注射不同的抗原體,前3組注射水劑抗原體,后4組注射油劑抗原體。將收集到的雞蛋進(jìn)行分組并按照1∶1的比例稀釋,等到蛋黃離心棄脂肪后取出蛋液進(jìn)行檢測,檢測的結(jié)果具體如表1和表2所示。

    4.2 試驗結(jié)果

    ①水劑抗原體在第1次使用后,在第6天達(dá)到了有效的治療效果,其當(dāng)時的小鵝瘟病毒抗體效價約為2.8log2,平均抗體水平為5.7log2。

    ②第1次使用的水劑型抗原體對小鵝瘟病毒的抵抗時間為20 d左右,20 d后蛋黃的抗體水平在逐漸下降,已不能抵抗小鵝瘟病毒。等到27 d后就檢測不到蛋黃中的抗體水平。

    ③第2次免疫的劑型分為水劑和油劑,水劑型抗原體在再次免疫后,蛋黃的抗體水平有所上升,然后不再變化。油劑型抗原體注射后,蛋黃的抗原體水平上升的比較快且可以持續(xù)很久。

    5 結(jié)語

    本次試驗采用水劑型和油劑型2種抗原體,在第1次注射后雞群可以在短時間內(nèi)產(chǎn)生蛋黃抗原體,當(dāng)抗體水平下降到一定值的時候用油劑型與水劑型開始第2次注射,第2次注射后就產(chǎn)生了區(qū)別,油劑型抗原體對蛋黃抗體的產(chǎn)生效果較好。

    [1]蘭信海,馮永勝,衣服德,等.雞抗小鵝瘟精致高免蛋黃抗體的研制[J].山東畜牧獸醫(yī),2011(4):15-16.

    S858.33

    B

    1674-7909(2016)14-30-2

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