金昌市金川區(qū)小反芻獸疫免疫效果檢測(cè)與分析

李曉霞，楊開(kāi)山，車小蛟，張登基

（1.甘肅省金昌市金川區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，金昌 737100；2.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，蘭州 730046）

金昌市金川區(qū)小反芻獸疫免疫效果檢測(cè)與分析

李曉霞1，楊開(kāi)山1，車小蛟2，張登基2

（1.甘肅省金昌市金川區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，金昌 737100；2.甘肅省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，蘭州 730046）

為掌握甘肅省金昌市金川區(qū)小反芻獸疫的實(shí)際免疫效果，為科學(xué)防控小反芻獸疫疫情提供可靠依據(jù)，對(duì)金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡和雙灣免疫規(guī)模羊場(chǎng)（戶）和散養(yǎng)戶羊進(jìn)行免疫注射小反芻獸疫活疫苗，分別于免疫后21 d和1年，采用C-ELISA對(duì)采集的羊只血清樣品進(jìn)行抗體水平檢測(cè)。結(jié)果顯示：免疫后21 d和1年后免疫抗體平均合格率分別為94.53%和79.20%，表明金川區(qū)的小反芻獸疫免疫羊在免疫后21 d和1年后免疫合格率均可達(dá)到國(guó)家規(guī)定的70%的標(biāo)準(zhǔn)。

小反芻獸疫；C-ELISA；免疫效果；抗體檢測(cè)

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）是由小反芻獸疫病毒（peste des petits ruminants virus，PPRV）引起的綿羊、山羊等小反芻動(dòng)物急性、熱性、高度接觸性傳染病，臨床上以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為特征［1］，山羊和綿羊易感，山羊發(fā)病率和病死率均較高，嚴(yán)重爆發(fā)時(shí)，本病的發(fā)病率高達(dá)100%，羔羊感染時(shí)病死率可達(dá)100%。PPR主要通過(guò)直接接觸傳染，患病動(dòng)物的排泄物和分泌物是主要傳染源，尤其是感染后帶毒的羊更為危險(xiǎn)。該病常呈現(xiàn)地方流行性，當(dāng)易感動(dòng)物增多時(shí)，可造成爆發(fā)流行［2］。

該病作為一種重大跨國(guó)界動(dòng)物傳播疫病，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。該病自1942年在非洲西部的象牙海岸首次報(bào)道以來(lái)，10年內(nèi)小反芻獸疫幾乎遍及了從撒哈拉沙漠到赤道的所有國(guó)家。該病于1987年在印度首發(fā)，然后蔓延到印度許多地區(qū)，此后一直嚴(yán)重危脅我國(guó)畜牧經(jīng)濟(jì)和動(dòng)物衛(wèi)生安全。我國(guó)在2007年首次在西藏自治區(qū)阿里日土縣和革吉縣發(fā)現(xiàn)該病以來(lái)，先后在新疆、甘肅、貴州、湖南以及黑龍江等21個(gè)省、自治區(qū)、直轄市發(fā)生，給當(dāng)?shù)仞B(yǎng)羊業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。目前，小反芻獸疫尚無(wú)有效治療措施，注射疫苗是目前預(yù)防該病最有效的方法［3-5］。甘肅省自古浪縣發(fā)生小反芻獸疫疫情以來(lái)，全省對(duì)14個(gè)市州重點(diǎn)區(qū)域的羊只進(jìn)行免疫接種，構(gòu)建免疫屏障。為監(jiān)測(cè)甘肅省金昌市金川區(qū)羊注射小反芻獸疫疫苗后抗體應(yīng)答水平，評(píng)估防控效果，為今后制定防控措施提供科學(xué)依據(jù)，本研究特開(kāi)展了免疫效果檢測(cè)與分析。

1 材料與方法

1.1 疫苗和檢測(cè)試劑

小反芻獸疫活疫苗由新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)為2014015；檢測(cè)試劑為中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心（青島）提供的小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，批號(hào)為201428，201517。

1.2 被檢血清

2015年4月和2016年4月分別采集金昌市金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡鄉(xiāng)和雙灣鄉(xiāng)小反芻獸疫活疫苗免疫后21 d和1年的規(guī)模羊場(chǎng)（戶）和散養(yǎng)戶羊血樣896份和572份，離心分離血清，編號(hào)，-20℃保存待檢。

1.3 儀器

單道移液器、多道移液器、生化培養(yǎng)箱、洗板機(jī)（COLUMBUS）、酶標(biāo)儀（TecanSunrise）、普通離心機(jī)、一次性移液器吸頭等。

1.4 檢測(cè)方法

向酶標(biāo)板陽(yáng)性對(duì)照孔加入陽(yáng)性血清50 μL；陰性對(duì)照孔加入陰性血清50 μL；酶標(biāo)單抗對(duì)照孔加入稀釋液50μL；樣品孔每孔加入稀釋液25μL，加入待檢血清25μL。37℃生化培養(yǎng)箱孵育60 min。棄去反應(yīng)孔的液體，用洗滌液洗4次，每次每孔加洗滌液300 μL。每孔加入酶標(biāo)單抗50 μL，37℃孵育30 min，用洗滌液洗4次。每孔加入底物溶液50 μL，室溫避光作用10～15 min。最后，每孔加入終止液50 μL，終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔OD450值，計(jì)算阻斷率。

1.5 判定標(biāo)準(zhǔn)

陽(yáng)性對(duì)照阻斷率（PB）＞60，陰性對(duì)照阻斷率（PB）＜40，則試驗(yàn)結(jié)果有效，否則，應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。待檢樣品阻斷率（PB）＞50，判為陽(yáng)性；待檢樣品阻斷率（PB）≤50，判為陰性。

2 結(jié)果

對(duì)在金昌市金川區(qū)寧遠(yuǎn)堡和雙灣分別于免疫后21 d和免疫后1年采集的羊血清樣品進(jìn)行小反芻獸疫免疫抗體檢測(cè)，免疫抗體合格血清分別為847份和453份，平均合格率分別為94.53%和79.20%，詳見(jiàn)表1、表2。

表1 2015年金川區(qū)小反芻獸疫抗體檢測(cè)結(jié)果（免疫后21 d）

表2 2016年金川區(qū)小反芻獸疫抗體檢測(cè)結(jié)果（免疫后1年）

3 討論

小反芻獸疫又稱羊瘟，是由小反芻獸疫病毒引起的山羊和綿羊的急性、接觸性病毒傳染病，臨床上以高熱、口炎、眼和鼻分泌物、腹瀉與肺炎為主要特征，該病嚴(yán)重威脅畜牧業(yè)的發(fā)展，特別是養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展和食品安全。據(jù)農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局公布的疫情數(shù)據(jù)顯示，自2013年以來(lái)，我國(guó)新疆、甘肅、內(nèi)蒙古等20多個(gè)省、市、自治區(qū)先后爆發(fā)該病，在新發(fā)疫點(diǎn)內(nèi)，易感羊群的發(fā)病率和死亡率均很高，該病已造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展，目前小反芻獸疫的防控形勢(shì)非常嚴(yán)峻［6-7］。

2014年1月22日，甘肅省武威市古浪縣發(fā)生一起羊小反芻獸疫疫情，古浪縣黃花灘鄉(xiāng)黃花灘村部分養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的羊出現(xiàn)疑似小反芻獸疫癥狀，發(fā)病羊951只，死亡133只。2014年1月24日，經(jīng)國(guó)家外來(lái)動(dòng)物疫病研究中心確診，該起疫情為小反芻獸疫疫情［8］。

為切實(shí)做好小反芻獸疫消滅工作，有效保障養(yǎng)羊業(yè)穩(wěn)定健康發(fā)展，甘肅省金昌市金川區(qū)對(duì)羊只進(jìn)行了PPR疫苗強(qiáng)制性免疫，并在免疫接種21 d和1年后，分別采集血樣896份和572份進(jìn)行抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，免疫后21 d和免疫后1年的免疫抗體合格血清分別為847份和453份，平均合格率分別為94.53%和79.20%，本次使用新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司的PPR活疫苗對(duì)本轄區(qū)內(nèi)的各種健康羊只進(jìn)行免疫接種，接種后未見(jiàn)PPR新病例和不良接種反應(yīng)，表明PPR活疫苗的副作用小，安全可靠。

免疫后21 d，免疫羊群的整體合格率達(dá)到94%以上，免疫后1年整體合格率保持在將近80%，整體免疫效果超過(guò)了農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)局提出抗體合格率不低于70%的要求。從數(shù)據(jù)上來(lái)看，金川區(qū)小反芻獸疫免疫效果整體較好，在預(yù)防和控制PPR的流行中發(fā)揮了重要作用。由此可見(jiàn)，本研究采取的防控措施是有效的。

當(dāng)前，對(duì)小反芻獸疫尚無(wú)有效的治療措施，疫苗免疫是最為有效的手段之一。在防疫工作中，要嚴(yán)格按照本地區(qū)動(dòng)物疫病流行情況制定科學(xué)有效的免疫方案，切實(shí)做好小反芻獸疫的免疫工作，及時(shí)開(kāi)展抗體檢測(cè)，認(rèn)真做好補(bǔ)免工作，確保有效保護(hù)。大量研究表明，許多野生偶蹄動(dòng)物亦是小反芻獸疫疫病的帶毒者和易感動(dòng)物，因此，應(yīng)嚴(yán)密監(jiān)控易感野生動(dòng)物的活動(dòng)，加大在野生小反芻獸群的遷移路線周圍及野生小反芻獸群活動(dòng)區(qū)域羊只的監(jiān)測(cè)和免疫，防止帶毒野生動(dòng)物向家養(yǎng)畜傳播，做好相關(guān)工作。雖然疫苗免疫可以有效預(yù)防和控制小反芻獸疫，但PPR疫苗存在毒力返祖的風(fēng)險(xiǎn)，這些都不利于我國(guó)PPR長(zhǎng)期防控，其他流行該病的國(guó)家的實(shí)踐也證明了這一點(diǎn)，因此，不能盲目采取大規(guī)模強(qiáng)制免疫該病，要嚴(yán)格區(qū)分疫區(qū)和非疫區(qū)，對(duì)疫區(qū)采取嚴(yán)格的處置措施。一旦確診，應(yīng)迅速采取嚴(yán)格的封鎖、撲殺、隔離檢疫等措施，對(duì)病死畜尸體進(jìn)行無(wú)害化處理，徹底對(duì)污染區(qū)進(jìn)行清潔消毒［9-11］。

［1］ 駱學(xué)農(nóng)，鄭亞?wèn)|，才學(xué)鵬.小反芻獸疫的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（11）：994-999.

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S858.26

B

2095-3887（2016）05-0071-02

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.05.021

2016-08-02

甘肅省農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究與應(yīng)用開(kāi)發(fā)項(xiàng)目（GNSW-2013-26）

李曉霞（1974-），女，畜牧師，主要從事動(dòng)物疫病防控與技術(shù)推廣工作。通訊作者：張登基（1979-），男，高級(jí)獸醫(yī)師，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防控制工作。