清熱瀉火藥多糖多酚含量測定及其抗氧化性研究*

王文英，張海容

(忻州師范學(xué)院生化分析技術(shù)研究所，山西 忻州 034000)

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清熱瀉火藥多糖多酚含量測定及其抗氧化性研究*

王文英，張海容

(忻州師范學(xué)院生化分析技術(shù)研究所，山西 忻州 034000)

實(shí)驗(yàn)測定了清熱瀉火藥梔子、蘆根、天花粉、知母、淡竹葉、夏枯草中多糖、多酚含量，同時用DPPH法測定了中藥提取液的抗氧化性作用。結(jié)果表明多糖含量次序?yàn)椋褐?44.80%)>蘆根(21.47%)>梔子(16.36%)>淡竹葉(11.62%)>夏枯草(11.04%)>天花粉(10.30%)；多酚含量次序?yàn)椋旱袢~(0.667%)>知母(0.605%)>天花粉(0.536%)>夏枯草(0.322%)>梔子(0.162%)>蘆根(0.0523%)。清除自由基能力的大小與多糖多酚的含量有關(guān)，隨著中藥提取液濃度的增大清除率有升高的趨勢。

清熱瀉火中藥；多糖；多酚；抗氧化性；DPPH法

根據(jù)《中藥學(xué)》記載：梔子、蘆根、天花粉、知母、竹葉、夏枯草，六種藥材常被用來當(dāng)成制作清熱瀉火藥的原料[1],能夠清熱瀉火，生津利尿。如天花粉具體功效是清熱瀉火，生津止渴，排膿消腫[2]。知母具有清熱瀉火，生津潤燥的功效[3]。淡竹葉為禾本科，有清涼除煩、利尿之效[4]。夏枯草[5]為唇形科植物，具有清火明目、軟堅(jiān)散結(jié)之功效。研究表明，植物中存在的多酚多糖有深遠(yuǎn)的藥理作用。多酚類物質(zhì)作為植物中廣泛存在的一類酚羥基結(jié)構(gòu)的化合物，具有一種天然的功能成分，具有清除自由基、抗氧化等藥理活性以及保護(hù)心血管系統(tǒng)等重要的生物活性[6]。多糖具有免疫抑制作用，它能減少我們通常使用的免疫抑制劑的諸如細(xì)胞毒性、機(jī)體抗感染能力下降、對骨髓造血細(xì)胞的繁殖抑制等副作用[7]。

本實(shí)驗(yàn)初步研究了這6種清熱瀉火中藥多糖多酚的含量，進(jìn)一步研究了多糖多酚對自由基清除能力的影響，為6種清熱瀉火中藥的藥理功能研究提供了參考價值。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

材料：知母、梔子、淡竹葉、蘆根、天花粉、夏枯草，均購自忻州市五臺山大藥房。

試劑：濃硫酸，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；苯酚(5%)，中國醫(yī)藥公司天津公司試劑部；葡萄糖，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司；酒石酸鉀，浙江省溫州市甌海精細(xì)化工公司；七水硫酸亞鐵，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司；沒食子酸，中國貴州遵義市建強(qiáng)化工廠；緩沖溶液；DPPH，梯希愛(上海)化工業(yè)發(fā)展有限公司；無水乙醇，鄭州派尼化學(xué)試劑廠。

儀器：LG微波爐，東津電子(天津)電器有限公司；AB204-N型電子分析天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；723型可見分光光度計，上海光譜儀器有限公司； GB/T6003標(biāo)準(zhǔn)篩(40目，孔徑0.45 mm)，浙江上虞市道墟張興紗篩廠；FZ102微型植物粉碎機(jī)(功率250 W,轉(zhuǎn)速1400 r/min)，天津市泰斯特儀器有限公司；DRT-TW型電熱套，鞏義市英峪豫華儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 原料預(yù)處理

取知母、梔子、淡竹葉、蘆根、天花粉、夏枯草等中草藥用粉碎機(jī)粉碎、過60目篩、樣品保存待用。

1.2.2 硫酸-苯酚法[8]繪制多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取1 mg/mL葡萄糖儲備液10 mL至100 mL的容量瓶中，加水定容至100 mL得0.1 mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，用移液管分別移取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1，1.2，1.4 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液補(bǔ)水至2 mL，然后加入5%的苯酚溶液1 mL及濃硫酸5 mL，搖勻，恒溫沸水浴加熱15 min，靜置10 min后，在最大吸收波長490 nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，歸方程為:

A=0.6262C-0.0287，R2=0.9953

式中：C——濃度，mg/mL

1.2.3 酒石酸亞鐵法繪制多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線[9]

分別吸取1 mg/mL沒食子酸0，0.25，0.5，0.75，1，1.25，1.5 mL于10 mL比色管中，然后加入酒石酸亞鐵5 mL，用緩沖溶液定容至10 mL，搖勻，靜置1 h，在最大吸收波長540 nm處測吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為:

A=0.4634C+0.1107，R2=0.9951

式中：C——濃度，mg/mL

1.2.4 中藥中多糖、多酚的提取

各取0.5 g知母，梔子，淡竹葉，蘆根，天花粉，夏枯草用二次蒸餾水定容至10 mL于比色管中，在功率為800 W時微波2 min用紗布過濾用二次蒸餾水定容至50 mL的容量瓶中。在最大吸收波長測吸光度。

1.2.5 自由基清除率的測定(DPPH·法)[10]

將梔子的提取液稀釋5倍后，分別用移液管取0.2，0.4，0.8，1，1.5，2 mL提取液補(bǔ)水至2 mL然后加2 mLDPPH·溶液10 mL于比色管中，搖勻，30 min后用提取液作參比，測定吸光度A樣品，同時用無水乙醇作參比，測定2 mL DPPH·液與2 mL無水乙醇混合溶液的吸光度A對照,根據(jù)下面的公式計算清除率：

2 結(jié)果與討論

2.1 中藥中多糖的含量

多糖、多酚在植物體內(nèi)普遍存在，對人體免疫起著重要作用。研究不同中藥中多糖、多酚的含量對于醫(yī)學(xué)研究有著重要意義。表1是清熱瀉火藥六種中藥中多糖多酚的百分含量。

由表1可以看出：多糖含量大小為：知母>蘆根>梔子>淡竹葉>夏枯草>天花粉(其中知母的多糖含量達(dá)44%以上，是淡竹葉的四倍多)；多酚含量大小為：淡竹葉>知母>天花粉>夏枯草>梔子>蘆根(知母多酚含量與淡竹葉相近)。綜上所述，六種中藥中知母的多糖多酚含量最大。

表1 各種中藥中多糖和多酚的含量

2.2 中藥多糖的自由基清除率

多糖還有較強(qiáng)的還原能力，對脂質(zhì)體氧化，羥基自由基均有抑制或清除作用。清除率越高，抗氧化能力越強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)研究了6種中藥多糖對自由基清除率的影響，結(jié)果如圖1所示。

圖1 中藥多糖對自由基的清除作用

由圖1可知：梔子的自由基清除率增長最大，在濃度約為1 mg/mL時，清除率已達(dá)約90%；夏枯草的自由基清除率在開始便處于較大數(shù)值，隨著濃度增加清除率基本不變；知母、淡竹葉的自由基清除率隨濃度增加逐漸增加，在濃度達(dá)到2 mg/mL后清除率基本不變，約為80%；蘆根，天花粉的自由基清除率隨著濃度增大先增加后減少(轉(zhuǎn)折處：濃度約為4 mg/mL)。

由圖1可知,多糖清除率達(dá)50%時各中藥的濃度，具體如下：C50%蘆根(2.3 mg/mL)>C50%知母(0.61 mg/mL)>C50%淡竹葉(0.55 mg/mL)>C50%梔子(0.32 mg/mL)。

2.3 中藥多酚的自由基清除率

由于多酚結(jié)構(gòu)本身有多個共軛雙鍵，即使某些位置的電子被自由基搶走，靠共軛效應(yīng)分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定從而保護(hù)細(xì)胞，具有清除多種自由基功能。6種中藥多酚對自由基清除作用如圖2所示。

圖2 中藥多酚對自由基的清除作用

由圖2可知：夏枯草的多酚自由基清除率增長很快，在濃度較小時就已經(jīng)達(dá)到50%以上；知母的自由基清除率隨著濃度增加而增加；蘆根，天花粉，淡竹葉的自由基清除率隨著濃度增加而增加，在濃度大約為3 mg/mL時清除率達(dá)到50%。中藥多酚清除率達(dá)50%時，各物質(zhì)濃度具體數(shù)值如下:C50%天花粉(3.2 mg/mL)>C50%淡竹葉(2.95 mg/mL)>C50%蘆根(2.61 mg/mL)>C50%夏枯草(0.42 mg/mL)；抗氧化能力：天花粉<淡竹葉<蘆根<夏枯草。

3 結(jié) 論

(1) 六種清熱瀉火藥均含有多糖和多酚。多糖含量大小依次為：知母>蘆根>梔子>淡竹葉>夏枯草>天花粉；多酚含量大小為：淡竹葉>知母>天花粉>夏枯草>梔子>蘆根。

(2)不同種中藥都有一定的抗氧化能力，其抗氧化能力與多糖、多酚的含量有關(guān)。多酚，多糖都是清除自由基的有效成分，但多酚的自由基清除率較多糖要高。本實(shí)驗(yàn)對提取多糖多酚，測定不同中藥的抗氧化能力進(jìn)行了初步探究。因?qū)嶒?yàn)條件所限，未能結(jié)合臨床實(shí)驗(yàn)開展研究，但如何有效地將植物活性成分抗氧化能力與臨床療效相結(jié)合，尚需進(jìn)一步深入研究。

[1] 方道碩,鐘亞玲,宋英.清熱瀉火膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[J].中國藥師，2008,11(4):406-408.

[2] 黃曉蘭,吳惠勤,王蔚,等.天花粉多糖的提取、分離與純化研究[J].中草藥，2008,39(11):1662-1665.

[3] 陸兔林,宋珅,季德,等.知母鹽炙工藝研究[J].中國中藥雜志，2007,32(11):1098-1099.

[4] 劉明,吳啟南,宋秋燁,等.淡竹葉清熱作用藥效植物基礎(chǔ)研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2009,20(8):1934-1936.

[5] 封亮,賈曉斌,陳彥，等.夏枯草化學(xué)成分及抗腫瘤機(jī)制研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥雜志，2008,23(5):428-434.

[6] 王桂林,董晶,弓志花,等.超聲波輔助提取藜麥多酚及其活性的研究[J].食品研究與開發(fā)，2016，37(6):68-71.

[7] 何培新,吳雙雙,林莉,等.甘草多糖超聲輔助提取工藝優(yōu)化及分子表征[J].食品研究與開發(fā), 2016,37(6):72-76.

[8] 張海容,劉露琛.超聲提取青蒿多糖的工藝優(yōu)化[J].食品研究與開發(fā),2006(5):46-48.

[9] 陳金娥,張海容,豐慧君.紅茶、綠茶、烏龍茶活性成分抗氧化性研究[J].食品科學(xué),2009,30(3):62-64.

[10]魏雪,張清安,黎梅雨.茶葉沖泡中茶多酚溶出及其對DPPH自由基的清除[J].食品研究與開發(fā),2016,37(6):1-5.

Determination of Contents of Polysaccharide and Polyphenol of Heat Purging Fire Chinese Herbs and Study of Antioxidant Activity*

WANGWen-ying,ZHANGHai-rong

(Institute of Biochemical Analysis Technology, Xinzhou Teachers University, Shanxi Xinzhou 034000, China)

The contents of polysaccharide, polyphenol of heat purging fire Chinese herbs for fruit of cape jasmine, reed rhizome, root of Mongolian snakegourd, all-grass of common lophantherum, fruit-spike of common selfheal were determined, and the antioxidative effect of the Chinese herbs extracts was studied by DPPH method.The results showed that the polysaccharide content of Chinese herbs extracts was as follows: rhizome of common anemarrhena(44.80%)>reed rhizome(21.47%)>fruit of cape jasmine(16.36%)>all-grass of common lophantherum(11.62%)>fruit-spike of common selfheal(11.04%)>root of Mongolian snakegourd(10.30%), the polyphenols contents was as follows: all-grass of common lophantherum (0.667%)>rhizome of common anemarrhena(0.605%)>root of Mongolian snakegourd(0.536%)>fruit-spike of common selfheal(0.322%)>fruit of cape jasmine(0.162%)>reed rhizome(0.0523%).The capacity of free radical scavenging had related to the content of polysaccharide and polyphenols in Chinese herbs, the trend was increasing of free radical scavenging with the increasing of concentration of Chinese herbal extract.

heat purging fire Chinese herbs; polysaccharides; polyphenol; antioxidant activity; DPPH method

忻州師范學(xué)院大學(xué)生科技創(chuàng)新項(xiàng)目(院政字2015-99)；忻州師范學(xué)院應(yīng)用化學(xué)創(chuàng)新實(shí)踐基地(2013-31)。

王文英(1993-)，女，忻州師范學(xué)院2013級本科生，研究方向: 植物活性成分提取分離研究。

張海容(1957-)，男，教授，研究方向: 有機(jī)分析。

R284

A

1001-9677(2016)019-0078-03