不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷囊志涂寡趸芰Ρ容^研究

許春平，李萌姍，譚蘭蘭， 戴亞

1 鄭州輕工業(yè)學(xué)院 食品與生物工程學(xué)院 鄭州高新區(qū)科學(xué)大道166號 450002；2 四川中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心 成都市成龍大道1段56號610066；3 重慶中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心 重慶市南岸區(qū)南坪城大道197號 400060

不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷囊志涂寡趸芰Ρ容^研究

許春平1，李萌姍1，譚蘭蘭2， 戴亞3

1 鄭州輕工業(yè)學(xué)院 食品與生物工程學(xué)院 鄭州高新區(qū)科學(xué)大道166號 450002；2 四川中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心 成都市成龍大道1段56號610066；3 重慶中煙工業(yè)有限責(zé)任公司技術(shù)中心 重慶市南岸區(qū)南坪城大道197號 400060

為研究不同產(chǎn)地云煙87煙草花蕾精油的抑菌和抗氧化活性，從而為煙草廢棄物資源的綜合利用提供理論支持。本試驗采用水蒸汽蒸餾法制備煙草花蕾精油，并采用濾紙片法和最小抑菌濃度（MIC）、最小殺細(xì)菌濃度（MBC）和最小殺真菌濃度（MFC）方法測定精油的抑菌能力，采用清除DPPH、OH自由基和O2-以及還原能力測定其抗氧化能力。抑菌試驗結(jié)果表明，4種產(chǎn)地的煙草花蕾精油均能夠抑制細(xì)菌的生長，抑菌能力大小依次為云南文山>廣西賀州>重慶奉節(jié)>貴州正安，但對于真菌的抑菌效果較差?？寡趸芰υ囼灲Y(jié)果表明：4種產(chǎn)地的煙草花蕾精油均具有一定的抗氧化能力，基本上呈現(xiàn)出抗氧化能力隨著濃度的升高而增強(qiáng)的趨勢。其中，貴州正安煙草花蕾精油清除DPPH和還原能力測定的試驗效果最好，重慶奉節(jié)煙草花蕾精油清除OH自由基的效果最好，廣西賀州煙草花蕾精油清除O2-的效果最好。

煙草花蕾；精油；抑菌；抗氧化

植物精油是一類植物次生代謝物質(zhì)，分子量較小，可隨水蒸汽蒸出，具有一定的揮發(fā)性的油狀液體物質(zhì)[1]，具有廣譜的抑菌、抗癌、抗氧化等生理功能[2]。劉玉民等研究發(fā)現(xiàn)水蒸汽蒸餾法制備的楓香葉精油對革蘭氏陽性菌和霉菌的抑制作用較強(qiáng)，對革蘭氏陰性菌的抑制作用較弱，其抗氧化活性隨著濃度的增大而增強(qiáng)[3]。El-Shazly等[4]研究了唇形科植物 Teucrium leucocladum Boiss 精油的抑菌活性， 試驗表明精油對銅綠假單孢菌、白色念珠菌等呈現(xiàn)顯著的抑菌活性。Chanjirakul等[5]研究發(fā)現(xiàn)采用茉莉酸甲酯、茶樹油等涂抹處理可提高草莓和黑莓果實中的抗氧化能力，有效的清除過量的超氧陰離子自由基、羥基自由基、H2O2和單線態(tài)氧，延長果實保鮮期。為了剔除生長過程中的頂端優(yōu)勢，煙草生產(chǎn)中必須進(jìn)行打頂處理，棄去花蕾部分[6]。但煙草花蕾是天然植物香源之一，含有豐富的香味物質(zhì)，因而可以利用廢棄的煙草花蕾進(jìn)行精油的提取。許春平等通過CO2超臨界萃取法制備烤煙煙草花蕾揮發(fā)油，并通過GC/MS分析了不同添加比例的煙草花蕾揮發(fā)油對煙草薄片煙氣化學(xué)組成的影響[7]。國內(nèi)對煙草花蕾精油的抑菌、抗氧化活性等進(jìn)一步的研究鮮有報道。本試驗研究了不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷囊志涂寡趸钚?，旨在為煙草廢棄物資源的綜合利用提供理論支持。

1 材料與儀器

1.1 材料

廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司提供的2014年云煙87煙草花蕾（產(chǎn)地：貴州正安、云南文山、廣西賀州、重慶奉節(jié)）

1.2 供試菌種

1.3 試劑

氯化鈉、無水硫酸鈉（天津市凱通化學(xué)試劑有限公司）、二氯甲烷、無水乙醇（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）、BHT、吐溫80、三氯化鐵、硫酸亞鐵、蔗糖、葡萄糖（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司）、DPPH（梯希愛（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司）、PBS緩沖溶液（Solarbio北京索萊寶科技有限公司）、鐵氰化鉀（天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所）、30%雙氧水（天津市華東試劑廠）、鄰二氮菲、EDTA（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）、鄰苯三酚（天津市瑞金特化學(xué)品有限公司）、Tris（GEN-VIEW SCIENTIFIC INC）、HCL（開封市芳晶化學(xué)試劑有限公司），以上試劑均為分析純。青霉素鈉（華北制藥股份有限公司），頭孢噻肟鈉（華北制藥河北華民藥業(yè)有限責(zé)任公司），瓊脂（北京索萊寶科技有限公司），肉湯培養(yǎng)基（北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司）。

1.4 儀器與設(shè)備

水蒸汽蒸餾裝置（鄭州科技玻璃儀器廠）、電加熱套、HS-4恒溫水浴鍋（上海醫(yī)療器械五廠）、Q-100A3旗箭粉碎機(jī)（上海冰都電器有限公司）、DGX-9143電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱（上海福瑪設(shè)備有限公司）、PL203電子分析天平（梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司）、UV-17001C紫外分光光度計（上海鳳凰光學(xué)科儀有限公司）、MicroCen16臺式離心機(jī)（德國Herolab公司）、移液槍（大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）有限公司）、蘇凈安泰超凈工作臺（廣州市深華生物技術(shù)有限公司）、SHINVA-2540型臺式滅菌器（山東新華醫(yī)療器械股份有限公司）。

2 試驗方法

2.1 原料的預(yù)處理

將云煙87煙草花蕾采集后，立即置于45℃烘箱中烘干，粉碎，過60目篩，密封保存，備用。

2.2 煙草花蕾精油的制備

采用水蒸汽蒸餾法制備煙草花蕾精油[8]。稱取30g煙草花蕾置于燒瓶中，加入600mL蒸餾水和72g氯化鈉，混合均勻后，靜置2h后，加入玻璃珠數(shù)顆。將燒瓶置于電加熱套內(nèi)，然后連接揮發(fā)油提取器與冷凝回流管，并向揮發(fā)油提取器中加入蒸餾水，使其溢流回?zé)恐袨橹?。打開電加熱套，使其緩慢加熱至沸騰。從有餾出液滴出開始計時，蒸餾4h后停止加熱，冷卻。將油水分離器下端的活塞打開，使水緩慢流出，待快到油層時，關(guān)閉活塞。使用二氯甲烷沖洗提取器，反復(fù)沖洗至油水分離器中無殘留精油為止，合并沖洗液。向沖洗液中加入無水硫酸鈉過夜，除去水分后，低溫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去二氯甲烷，得到煙草花蕾精油。將制備好的煙草花蕾精油置于4℃冷藏室中冷藏，備用。

2.3 抑菌性能研究

2.3.1 培養(yǎng)基的制備

肉湯固體培養(yǎng)基：稱取25g肉湯培養(yǎng)基，18g瓊脂，加入1000mL蒸餾水，加熱溶解后，分裝，121℃高壓滅菌15min，備用。用于大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和多粘性芽孢桿菌的培養(yǎng)和抑菌試驗。

PDA固體培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）：稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮，切碎，加入1000mL蒸餾水，煮沸，30min后，用8層紗布過濾。然后再加入20g蔗糖，18g瓊脂，充分溶解后，分裝，121℃高壓滅菌15min，備用。用于黑曲霉、毛霉、青霉和畢赤酵母的培養(yǎng)和抑菌試驗。其中，制作液體培養(yǎng)基時，不加入瓊脂。

2.3.2 菌懸液的制備

將待試菌種活化后，用生理鹽水配制成菌懸液。采用平板計數(shù)法測定細(xì)菌菌懸液的菌體個數(shù)，選用含菌體濃度為106～107cfu /mL的菌懸液，真菌采用顯微鏡直接計數(shù)法測定菌體個數(shù)，選用含孢子濃度為106～107個 /mL的菌懸液，備用。

其次，工作與生活的壓力，是產(chǎn)后抑郁的重要原因。部分女性因為懷孕與分娩，可能會錯失職場上升的機(jī)會，甚至?xí)G掉工作，加之因為寶寶的誕生，經(jīng)濟(jì)支出增加，會無形中給年輕媽媽增加焦慮。

2.3.3 抑菌圈的測定

采用濾紙片法[9]測定精油的抑菌性能。將濾紙用打孔器切割成直徑為6mm的小圓型紙片，然后置于干燥的試管中，121℃滅菌30min后，在無菌操作臺上將其放入濃度為140mg/mL的精油-乙醇溶液中。用無菌移液槍吸取0.2mL含菌體濃度為106～107cfu /mL的菌懸液，滴加到新鮮無菌的固體培養(yǎng)基上，涂布均勻。用無菌鑷子將浸有精油的濾紙片貼在固體培養(yǎng)基中心，每個菌種平行測定3次。恒溫培養(yǎng)（細(xì)菌：37℃/24h；真菌：28℃/48h），測定抑菌圈直徑，比較抑菌效果。采用3mg/mL的青霉素鈉和10mg/mL的頭孢噻肟鈉作為陽性對照，以經(jīng)高壓滅菌但未浸泡精油的無菌濾紙片作空白對照。測定抑菌圈直徑，比較抑菌效果。

2.3.4 最小抑菌濃度（MIC），最小殺細(xì)菌濃度（MBC）和最小殺真菌濃度（MFC）

采用倍比稀釋法在96孔板中測定最小抑菌濃度（MIC）[10]。首先第1列8個孔分別加入200μL液體培養(yǎng)基做空白對照，第2列加入180μL液體培養(yǎng)基和20μL濃度為30mg/mL的煙草花蕾精油，從第3列到第11列均加入100μL的液體培養(yǎng)基。從第2列中分別吸取相應(yīng)的100μL精油到對應(yīng)的第3列各孔，依次稀釋到第11列，最后從第11列中吸出100μL廢棄。各列精油的濃度為（14、7、3.5、1.75、0.875、0.4375、0.2188、0.1094、0.0547、0.0273mg/mL）。最后向2到11列各孔加入100μL菌懸液，其中第4行加100μL培養(yǎng)液做對照，第12列各孔加200μL菌液做陰性對照，細(xì)菌的第4行以3mg/mL的青霉素鈉的倍比稀釋做陽性對照，真菌不做陽性對照。

在MIC和MFC測定試驗中，將無菌生長的液體培養(yǎng)基中取出20μL涂布平板，繼續(xù)培養(yǎng)（細(xì)菌37℃/24h；真菌30℃/48h）。觀察有無菌落生長。無菌落生長的最小濃度即為MBC或MFC。MIC和MBC的試驗中，為了保證精油與培養(yǎng)液的互溶性，需在培養(yǎng)液中加入1%（v/v）的吐溫80做乳化劑。

2.4 抗氧化能力研究

2.4.1 DPPH（1,1-二苯基-2-三硝基苯肼）清除能力測定

用50%的無水乙醇分別配置濃度為0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL的煙草花蕾精油、BHT溶液（2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚溶液）作為樣品溶液。取樣品溶液1mL，分別加入50μL吐溫80溶解，然后再加入2mL濃度為1mmol/L的DPPH溶液（50%乙醇溶解），暗處放置0.5h后在517nm處測吸光值，記為A。對照組用蒸餾水代替各個樣品，重復(fù)上述操作，在517nm處測吸光度，記為A1?？瞻捉M用50%乙醇代替DPPH溶液，重復(fù)上述操作，在517nm處測吸光度，記為A0。每組試驗設(shè)3組平行試驗[11]。DPPH清除率（%）=[1-（A-A0）/A1]×100

2.4.2 還原能力測定

用50%的無水乙醇分別配置濃度為0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL的煙草花蕾精油、BHT溶液作為樣品溶液。取樣品溶液0.5mL，分別加入50μL吐溫80溶解，然后再加入2.5mL的PBS緩沖溶液（磷酸鹽緩沖液）（pH=6.6），2.5mL濃度為 1%的鐵氰化鉀（w/w），50℃恒溫水浴30min，后快速冷卻。然后再分別加入2.5mL蒸餾水和0.5mL濃度為 0.1%的三氯化鐵溶液（w/w），3000 r/min離心后靜置10 min，在700nm處測吸光度記為A?？瞻捉M用蒸餾水代替鐵氰化鉀和三氯化鐵溶液，重復(fù)上述操作，在700nm處測吸光度記為A0。每組試驗設(shè)3組平行試驗[12]。還原能力的大小用吸光度（A-A0）表示。

2.4.3 清除OH自由基

用50%的無水乙醇分別配置濃度為0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL的煙草花蕾精油、BHT溶液作為樣品溶液。取樣品溶液0.5mL，分別加入50μL吐溫80溶解，然后加入1mL PBS緩沖溶液（pH=7.4），1mL濃度為7.5mmol/L的鄰二氮菲溶液，1mL濃度為3.25mmol/L的硫酸亞鐵溶液，2mL濃度為1.5%的雙氧水，充分混合后于37℃下放置1h，在536nm處測吸光度記為A。對照組用蒸餾水代替各個樣品，重復(fù)上述操作，在536nm處測吸光度記為A1，空白組用蒸餾水代替鄰二氮菲、硫酸亞鐵溶液和雙氧水，重復(fù)上述操作，在536nm處測吸光度記為A0。每組試驗設(shè)3組平行試驗[13]。

OH自由基清除率（%）=[（A-A0）/（A1- A0）]×100

2.4.4 清除O2-自由基

用50%的無水乙醇分別配置濃度為0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL的煙草花蕾精油、BHT溶液作為樣品溶液。取樣品溶液1mL，分別加入50μL吐溫80溶解，然后加入4.5mL濃度為0.05mol/L的Tris-HCL 緩沖液(三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液)（pH=8.2），1mL濃度為1mmol/L的EDTA（乙二胺四乙酸）溶液，0.4mL濃度為25mmol/L的鄰苯三酚溶液，置于25℃水浴鍋中恒溫4min后，迅速用1mL濃度為12mol/L的HCL終止反應(yīng)。在320nm處測吸光度，記為A。對照組用蒸餾水代替各個樣品，重復(fù)上述操作，在320nm處測吸光度，記為A1?？瞻捉M用蒸餾水代替EDTA、鄰苯三酚和HCL溶液，重復(fù)上述操作，在320nm處測吸光度，記為A0。每組試驗設(shè)3組平行試驗[14]。

超氧陰離子清除率（%）=[1-（A-A0）/A1]×100

3 結(jié)果與分析

3.1 抑菌試驗結(jié)果

不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬鸵约扒嗝顾剽c、頭孢噻肟鈉對不同微生物的抑菌圈測定見表1。

表1 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷囊志χ睆絋ab. 1 Diameter of inhibition zone of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas mm

抗菌素抑菌圈實驗結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)為： 抑菌圈直徑>15mm為最敏感，10～15mm 為中度敏感,7～9mm 時為低度敏感， 無抑菌圈者為不敏感。因此，從表1中可以看出4種產(chǎn)地的精油對細(xì)菌均有一定的抑菌性。重慶奉節(jié)煙草花蕾精油對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和多粘類芽孢桿菌的抑菌圈直徑處于21.34～31.52之間，均屬最敏感，且對枯草芽孢桿菌的抑制最強(qiáng)。貴州正安煙草花蕾精油對多粘類芽孢桿菌的抑菌圈直徑為12.755±3.30，屬中度敏感，對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑為19.75±8.13，屬中高度敏感，而對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑為26.25±6.01，屬最敏感。廣西賀州煙草花蕾精油對3種細(xì)菌的抑菌圈直徑處于22.19～50.06之間，均屬最敏感，且對大腸桿菌的抑菌能力最強(qiáng)。云南文山煙草花蕾精油對3種細(xì)菌的抑菌圈直徑處于30.30～60.92之間，均屬最敏感，且對大腸桿菌的抑菌能力最強(qiáng)。4種產(chǎn)地的煙草花蕾精油對黑曲霉、青霉和畢赤酵母的抑菌圈直徑處于6.47～9.62之間，屬于低度敏感，而對毛霉的抑菌圈直徑均為0，沒有抑菌性，因而對毛霉不敏感。

綜合比較來看，云南文山煙草花蕾精油的抑菌性能最好，其次廣西賀州煙草花蕾精油。抑菌效果最差的是貴州正安煙草花蕾精油。同時，由表1中還可以看出，4種產(chǎn)地的煙草花蕾精油對真菌的抑菌效果無明顯差異，抑菌效果較差。尤其是對毛霉沒有抑菌效果。

3.2 最小抑菌濃度（MIC），最小殺細(xì)菌濃度（MBC）和最小殺真菌濃度（MFC）

不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬鸵约扒嗝顾剽c對不同微生物的最小抑菌濃度（MIC）以及最小殺菌濃度（MBC）測定見表2和表3。

表2 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷淖钚∫志鷿舛龋∕IC）Tab.2 Minimum inhibitory concentration (MIC) of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas mg/mL

表3 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷淖钚⒓?xì)菌濃度（MBC）和最小殺真菌濃Tab.3 Minimum bactericidal concentration (MBC) and minimum fungicide concentration of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas mg/mL

由表2和表3可知，不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬蛯?xì)菌和真菌都具有一定的抑菌能力。其中云南文山煙草花蕾精油對大腸桿菌的抑菌效果最好，其最小抑菌濃度（MIC）為1.75mg/mL，最小殺菌濃度為3.5mg/mL。另外，重慶奉節(jié)煙草花蕾精油對枯草芽孢桿菌的抑菌效果較好，而廣西賀州煙草花蕾精油對多粘類芽孢桿菌的抑菌效果較好，兩者的MIC和MBC均為3.5mg/mL。4種不同產(chǎn)地的煙草花蕾精油對真菌的抑菌效果均較差，尤其是對于青霉的抑菌效果最差，其最小殺菌濃度均大于或等于14mg/mL。

3.3 DPPH清除能力測定

如圖1所示，4種產(chǎn)地的煙草花蕾精油與BHT均具有一定的清除DPPH能力且DPPH清除能力隨著濃度的增加均有所變化。其中BHT隨著濃度的增加，DPPH清除率也呈上升趨勢。貴州正安煙草花蕾精油在濃度0.5～1.0mg/mL范圍內(nèi)快速增長，其后基本保持不變。重慶奉節(jié)煙草花蕾精油和廣西賀州煙草花蕾精油隨著濃度的增大，DPPH清除率緩慢增加。而云南文山煙草花蕾精油的DPPH清除率隨著濃度的增加，在1.5mg/mL處略有回落，隨后又繼續(xù)增長。從圖1中還可以看出，在濃度高于1mg/mL時，貴州正安煙草花蕾精油的DPPH清除能力高于其他3種煙草花蕾精油。當(dāng)濃度達(dá)到2.0mg/mL時，4種煙草花蕾精油清除DPPH的能力相差不大，均可以達(dá)到BHT的一半左右。整體上在濃度為0.5～2.0mg/mL范圍內(nèi)，4種煙草花蕾精油清除DPPH的能力大小為：貴州正安>重慶奉節(jié)>廣西賀州>云南文山。

圖1 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷腄PPH清除率Fig.1 Radical scavenging rate of DPPH of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas

3.4 還原能力測定

圖2可以看出，4種煙草花蕾精油與BHT均有一定的還原能力，且均隨著濃度的升高，還原能力增強(qiáng)，但增加速率不同。其中BHT>貴州正安>重慶奉節(jié)>云南文山>廣西賀州，4種煙草花蕾精油的還原能力在0.5mg/mL時，最接近BHT。在濃度為2.0mg/mL時，4種煙草花蕾精油的還原能力達(dá)到最大，BHT的吸光度為0.453±0.005，貴州正安的吸光度達(dá)到BHT的一半，為0.235±0.004，重慶奉節(jié)的吸光度為0.149±0.018，云南文山的吸光度為0.110±0.002，廣西賀州的還原能力最低，吸光度為0.101±0.001。

圖2 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷倪€原能力Fig.2 Reduction ability of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas

3.5 清除OH自由基

如圖3所示，4種產(chǎn)地的煙草花蕾精油與BHT均有一定的OH自由基清除能力。BHT的OH自由基清除能力在濃度1.5mg/mL時，略有升高，隨后基本保持不變。由圖3中可以看出，重慶奉節(jié)煙草花蕾的OH自由基清除能力在濃度低于1.5mg/mL時，均高于BHT，在濃度為2.0mg/mL時，與BHT無明顯差異。廣西賀州和云南文山的煙草花蕾精油在濃度為0.5和1.0mg/mL時的OH自由基清除能力高于BHT，在濃度為1.5和2.0mg/mL時，與BHT無明顯差異。貴州正安煙草花蕾精油的OH自由基清除能力，除在1.0mg/mL時，與BHT無明顯差異外，均低于BHT。4種煙草花蕾精油的OH自由基清除能力大小為：重慶奉節(jié)>云南文山>廣西賀州>貴州正安。

圖3 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷腛H自由基清除率Fig.3 Radical scavenging rate of OH of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas

3.6 清除O2-自由基

由圖4可以看出，4種煙草花蕾精油均具有一定的O2-自由基清除能力，且隨著濃度的升高而增大。其中廣西賀州煙草花蕾精油的O2-清除能力最好，在1.0mg/mL時接近BHT，在2.0mg/mL時達(dá)到最大，為（38.57±0.27）%。重慶奉節(jié)煙草花蕾精油的O2

-清除能力較其他幾種精油差，尤其是在濃度為0.5mg/mL時，清除率僅有（17.20±0.19）%，但是隨著濃度的增大，清除能力逐漸增大，在濃度為2.0mg/mL時，達(dá)到（35.37±1.27）%。

圖4 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷腛2-自由基清除率Fig.4 Radical scavenging rate of O2- of tobacco essential oils of flower bud from different growing areas

4 結(jié)論

本試驗結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的煙草花蕾精油具有一定的抑菌和抗氧化能力，因此可以作為天然抑菌劑和抗氧化劑進(jìn)行開發(fā)利用。但不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷囊志涂寡趸芰τ兴煌?，可能是由于煙草生長環(huán)境不同，如溫度、水分、土壤結(jié)構(gòu)、日照時間等不同，造成所提出的煙草花蕾精油的成分有所不同，從而導(dǎo)致其生物活性有所差異，后期可以進(jìn)一步對不同產(chǎn)地的煙草花蕾精油的成分進(jìn)行分析，從而確定影響其抑菌和抗氧化能力的成分，進(jìn)而有針對性的對其生物活性進(jìn)行開發(fā)利用。

本試驗所采用的煙草花蕾均為云煙87品種花蕾，未來可進(jìn)一步研究不同品種煙草花蕾精油的成分、抑菌、抗氧化等能力的不同，進(jìn)而為煙草花蕾精油的研究及綜合開發(fā)利用提供理論支持。

[1] 周曉薇, 王靜, 顧鎳,等. 植物精油對果蔬防腐保鮮作用研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(21):427-430.Zhou Xiaowei，Wang Jing，Gu Nie，et al. Research progress in preservative effect of plant essential oil on fruits and vegetables[J]. Food Science, 2010, 31(21):427-430. (in Chinese)

[2] Guenther E．The essential oils［M］．Now York: REK Publishing Company，1950.

[3] 劉玉民, 劉亞敏, 李鵬霞. 楓香葉精油抑菌活性及抗氧化活性研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(11):134-137.Liu Yumin, Liu Yamin, Li Pengxia. Study on antimicrobial activities of essential oil from leaves of Liquidambar formosana Hance as well as its antioxidant activity[J]. Food Science, 2009,30(11):134-137. (in Chinese)

[4] El-Shazly A M, Hussein K T. Chemical analysis and biological activities of the essential oil of Teucrium leucocladum Boiss.(Lamiaceae)[J]. Biochemical Systematics & Ecology, 2004,32:665–674.

[5] Chanjirakul K, Wang S Y, Wang C Y, et al. Natural volatile treatments increase free-radical scavenging capacity of strawberries and blackberries [J]. Journal of the Science of Food & Agriculture, 2007, 87(8):1463-1472(10).

[6] 林中麟, 石健林, 周益. 煙草打頂研究進(jìn)展[J]. 江西農(nóng)業(yè)學(xué)報, 2009, 21(6):32-36.Lin Zhonglin, Shi Jianlin, Zhou Yi. Research developments on tobacco topping[J]. Acta Agriculture Jiangxi, 2009, 21(6):32-36. (in Chinese)

[7] 許春平, 肖源, 孫斯文,等. 烤煙花揮發(fā)性成分的萃取及分析[J]. 中國煙草學(xué)報, 2014(4):23-27.Xu Chunping, Xiao Yuan, Sun siwen, et al. Extraction and analysis of volatile components from flue-cured tobacco flower[J]. Acta Tabacaria Sinica, 2014(4):23-27. (in Chinese)

[8] 吉禮, 車振明, 黃偉,等. 水蒸汽蒸餾法提取橙皮精油的研究[J]. 食品研究與開發(fā), 2008, 29(4):92-94.JI Li, Che Zhenming, Huang Wei, et al. Research of extraction orange peel oil by steam distillation[J]. Food Research and Development, 2008, 29(4):92-94.

[9] Parvathamma S, Shanthamma C. Antimicrobial Activity of Mollugo cerviana ser. (Molluginaceae)[J]. Anc Sci Life, 2000,20(20): 11–13.

[10] Eloff J N. A sensitive and quick microplate method to determine the minimal inhibitory concentration of plant extracts for bacteria[J]. Planta Med, 1999, 64(8):711-3.

[11] Bondet V, Brand-Williams W, Berset C. Kinetics and Mechanisms of Antioxidant Activity using the DPPH Free Radical Method[J]. LWT - Food Science and Technology, 1997,30(6):609–615.

[12] 李慎新, 曹新志, 鐘俊波,等. 幾種中草藥抗氧化性成分的還原能力及總酚含量比較研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2008,36(29):12755-12756.Li Shenxin, Cao Xinzhi, Zhong Junbo, et al. Comparative study on reducing power of anti-oxidative of constituents several Chinese herbal medicines and their total phenols content[J].Anhui Agricultural Science, 2008, 36(29):12755-12756. (in Chinese)

[13] 許綱, 張虹, 董建紅. 竹葉提取物清除O2-和OH自由基的研究[J]. 營養(yǎng)學(xué)報, 2001, 23(1):79-81.Xu Gang, Zhang Hong, Dong Jianhong. Studies on superoxide and hydroxyl radicals scavenging capacity of bamboo leave extracts. Acta Nutrimenta Sinica, 2001, 23(1):79-81. (in Chinese)

[14] 郝桂霞. 羅漢果提取液對自由基的清除作用[J]. 江西化工,2005（4）:89-90.Hao Guixia. The scavenging effect of Siraitia grosvenorii extracts on free radical[J]. Jiangxi Chemical Engineering, 2005,4:89-90. (in Chinese)

Comparative study on antimicrobial and antioxidant capacity of essential oils of tobacco flower bud from different growing areas

XU Chunping1, LI Mengshan1, TAN Lanlan2, DAI Ya3
1 College of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China;2 Technology Center, China Tobacco Sichuan Industrial Co. Ltd, Chengdu 610066, China;3 Technology Center, China Tobacco Chongqing Industrial Co. Ltd, Chongqing 400060, China

Experiments were conducted to investigate antimicrobial and antioxidant activity of essential oils of tobacco flower bud from different growing areas and to provide theoretical basis for comprehensive utilization of tobacco waste. Essential oils were prepared by water vapor distillation and antimicrobial activity of essential oil was determined by disc diffusion method, minimum inhibitory concentration (MIC), minimum of bactericidal concentration (MBC), and minimal fungicide concentration (MFC). Antioxidant capacity was measured by radical scavenging of DPPH, OH and O2-and reduction abilities were determination. Antimicrobial test results showed that tobacco flower bud essential oils from four different growing areas could inhibit bacterial growth with antimicrobial capacity in the order of Yunnan Wenshan > Guangxi Hezhou > Chongqing Fengjie > Guizhou Zhengan. However, antifungal effects of the four oils were poor. Antioxidant activity test results showed that: all four essential oils of tobacco flower bud had certain antioxidant capacity, and antioxidant capacity increased with the increase of oil concentration. Among them, tobacco flower bud essential oil from Zhengan, Guizhou province had the best results in DPPH scavenging and reduction ability, while essential oil from Fengjie, Chongqing municipality had the best effect on OH radical scavenging, and essential oil from Hezhou, Guangxi Autonomous Region featured the best in O2-clearance.

tobacco flower bud, essential oil, antimicrobial, antioxidant

許春平，李萌姍，譚蘭蘭,等. 不同產(chǎn)地?zé)煵莼ɡ倬偷囊志涂寡趸芰Ρ容^研究[J]. 中國煙草學(xué)報，2016,22（3）

重慶中煙合作項目“以低次煙葉為原料制備煙用香料的研究（20151011）”

許春平（1977—），教授，博士，研究方向：煙草工程領(lǐng)域的研究；Email：xuchunping05@163.com

戴 亞（1946—），教授，研究方向：煙草化學(xué)、原料學(xué)，Email: dycy@263.net

2015-09-01

:XU Chunping, LI Mengshan, TAN Lanlan, et al. Comparative study on antimicrobial and antioxidant capacity of essential oils of tobacco flower bud from different growing areas[J]. Acta Tabacaria Sinica, 2016,22(3)