八月札抗腫瘤作用的初步研究

張　瑜，鄭作文（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧　530001）

八月札抗腫瘤作用的初步研究

張瑜，鄭作文
（廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧530001）

［目的］研究八月札醇提物在小鼠H22肝癌細(xì)胞體內(nèi)的抗腫瘤作用。［方法］取80只昆明種小鼠，建立H22小鼠肝癌細(xì)胞移植瘤模型。隨機分為5組：模型組，5－氟尿嘧啶組，八月札高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組16只。八月札各組分別灌服高、中、低劑量的八月札醇提物（10 g/kg、5 g/kg、2．5 g/kg），5－氟尿嘧啶組予五氟尿嘧啶（0．2 g/kg）灌服給藥，模型組給予蒸餾水灌服。給藥后10 d取出腫瘤，以腫瘤重量為指標(biāo)，研究八月札醇提物對小鼠肝癌細(xì)胞移植瘤的抑制作用。［結(jié)果］八月札醇提物高劑量組（10 g/kg）及5－氟尿嘧啶組對H22細(xì)胞移植瘤重量有明顯減輕作用，與模型組比較有顯著性差異（P＜0．01），且抑瘤率＞30%；中、低劑量組（5 g/kg、2．5 g/kg）小鼠H22細(xì)胞移植瘤的重量小于模型組，但與模型組比較無顯著性差異。［結(jié)論］八月札醇提物對H22細(xì)胞小鼠移植瘤有抑瘤作用。

八月札；H22肝癌細(xì)胞；抗腫瘤；實驗研究

近年來隨著環(huán)境的污染和惡化，肝癌發(fā)病率逐年升高。廣西是肝癌的高發(fā)區(qū)，據(jù)報道21世紀(jì)初廣西肝癌的死亡率達(dá)到34．39/10萬［1］。目前，肝癌的治療方式主要有手術(shù)切除、化療、放療、生物治療等。手術(shù)切除雖然為主要治療方法，但是存在復(fù)發(fā)的可能性；化學(xué)藥物治療毒副作用大，給患者身心造成巨大傷害；放射性治療在殺死肝癌細(xì)胞的同時會相應(yīng)對周圍組織造成傷害；因此，無論是藥物還是手術(shù)都不可避免對肝臟和身體造成損害［2－3］。中草藥療法具有中醫(yī)特色，在防治肝癌方面具有良好的發(fā)展前景。八月札為木通科植物木通Akebia quinata（Thunb．）Decne、三葉木通A．trifoliata（Thunb．）Koidz．var．a(chǎn)ustralis（Dies）．Rehd．的成熟果實，具有疏肝和胃、活血止痛、軟堅散結(jié)、利小便的功效。八月札在廣西有著豐富的資源，廣西民間常用于治療肝癌。本實驗通過建立H22小鼠肝癌細(xì)胞移植瘤模型，探討八月札醇提物抗腫瘤的作用，現(xiàn)報道如下。

1　實驗材料

1．1實驗動物取昆明種小鼠80只，雌雄各半，體重20±2 g，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號：桂醫(yī)動字第11004號。

1．2實驗藥材和試劑八月札為市售品，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥用植物教研室韋松基教授鑒定為木通科植物木通Akebia quinata（Thunb．）Decne、三葉木通A．trifoliata（Thunb．）Koidz． var．a(chǎn)ustralis（Dies）．Rehd．的成熟果實；5－氟尿嘧啶（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H31020593）；H22細(xì)胞株（南京凱基生物科技發(fā)展有限公司）。

1．3受試藥物的提取取八月札藥材烘干粉碎，加8倍量80%酒精，浸泡過夜后進(jìn)行回流提取，保持微沸2 h，倒出回流液，再加入6倍量酒精回流1．5 h，倒出提取液，再如上述方法提取，合并3次回流液后使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收酒精，置蒸發(fā)皿上水浴濃縮成浸膏，得膏率為31．79%，每1 g浸膏相當(dāng)于4．146 g生藥。

1．4實驗儀器DMIRB型Leica光學(xué)倒置顯微鏡（德國Leica公司）；ZDX－3SBI座式自動電熱壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；DLE560型超凈工作臺（荷蘭Clean Air公司）；微量加樣器（法國Gilson產(chǎn)品）。

2　實驗方法與結(jié)果

2．1動物模型的建立取H22細(xì)胞株，通過無菌離心（1 000 rpm/min）收集H22細(xì)胞，用無菌生理鹽水懸浮，調(diào)整細(xì)胞濃度為8．0×106個/m l，經(jīng)臺盼藍(lán)拒染法檢測存活率≥95%，備用。取適應(yīng)3 d的雄性昆明小鼠15只，用75%酒精消毒腹部皮膚后，以0．2ml/只腹腔接種H22細(xì)胞懸液。接種3～4 d可看到小鼠腹部明顯隆起，顯示已形成腹水，8～10 d后無菌抽取腹水，于超凈工作臺內(nèi)用無菌生理鹽水稀釋，調(diào)整細(xì)胞濃度為1．0× 107個/m l，備用。

2．2分組與給藥取昆明種小鼠80只，雌雄各半，體重20± 2 g，隨機分為5組：模型組，5－氟尿嘧啶組（0．2 g/kg），八月札高劑量組（10 g/kg）、中劑量組（5 g/kg）、低劑量組（2．5 g/kg），每組16只。模型組給予蒸餾水灌胃，其余各組給予相應(yīng)的藥物灌胃，給藥容積為0．2ml/10 g，每天1次，連續(xù)給藥5 d后準(zhǔn)備腋下接種。

2．3腫瘤接種抽取接種10 d左右種鼠腹水，呈乳白色，細(xì)胞計數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度至1．0×107個/ml，臺盼藍(lán)拒染法檢測存活率≥95%。將細(xì)胞懸液充分混勻后注射至給藥5 d后小鼠的右腋皮下，每只0．2m l，共接種80只，全程嚴(yán)格無菌操作。接種后繼續(xù)按照上述給藥方式給藥，在第10 d后觀察腫瘤大小。

2．4對H22細(xì)胞小鼠移植瘤的抑瘤作用末次給藥12 h后，將小鼠頸椎脫臼處死，迅速解剖取出瘤塊，剔除脂肪組織，稱取瘤體重量，按以下公式計算抑瘤率。瘤重抑制率＝（模型組平均瘤重量－給藥組平均瘤重量）/模型組平均瘤重量× 100%。八月札醇提物對H22細(xì)胞小鼠移植瘤的抑瘤作用結(jié)果見表1。

表1　八月札醇提物對H22細(xì)胞小鼠移植瘤的抑瘤作用結(jié)果

實驗結(jié)果表明，灌胃給藥10 d后，與模型組比較，陽性藥5－氟尿嘧啶組和八月札高劑量組均能明顯減輕小鼠瘤重（P＜0．01），抑制率分別為60．6%和33．4%；八月札中、低劑量組有減輕小鼠瘤重趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異，抑制率分別為19．9%和20．3%。

3　討　論

肝癌嚴(yán)重威脅人類健康，是死亡速度最快的惡性腫瘤之一，肝癌細(xì)胞快速惡性增殖導(dǎo)致肝功能衰竭甚至死亡，累及周圍組織及器官，給患者帶來極大身體負(fù)擔(dān)和精神負(fù)擔(dān)。

動物實體瘤實驗方法為抗腫瘤實驗研究的重要方法之一，其成瘤的可能性可以達(dá)到100%，可行性遠(yuǎn)大于誘發(fā)性成瘤。小鼠腹水型肝癌瘤株可在小鼠身上移植生長，且成瘤率高［4］。本實驗建立H22小鼠肝癌細(xì)胞移植瘤模型，通過接種H22小鼠肝癌細(xì)胞形成腹水，腹水形成后將其接種到小鼠腋下使其成瘤。八月札系廣西傳統(tǒng)抗腫瘤中藥材，原料來源豐富充足，造模成功給予以八月札醇提物，發(fā)現(xiàn)八月札醇提物對H22細(xì)胞移植瘤重量有明顯減輕作用。陽性藥5－氟尿嘧啶廣泛用于肝癌的治療［5］，雖然也可抑制腫瘤組織的生長，但在一定程度上會導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)精神萎靡、免疫力下降等不良影響。八月札組小鼠體重及生理指標(biāo)變化并無明顯差異，提示中醫(yī)藥在提高患者生存率的同時減輕了化療的毒副作用，體現(xiàn)出中醫(yī)藥的優(yōu)勢。

［1］張春燕，黃天壬，余家華，等．廣西肝癌高危人群隊列和高發(fā)家系樣本數(shù)據(jù)庫的建立［J］．廣東醫(yī)學(xué)，2012，32（23）：3121－3123．

［2］王悅?cè)A．肝癌多學(xué)科綜合治療的分級與集合治療模式的建立［J］．中華肝膽外科雜志，2010，16（4）：270－274．

［3］郭武華，張吉翔．肝癌綜合治療的現(xiàn)狀［J］．世界華人消化雜志，2008，16（20）：2199－2203．

［4］饒子亮，鄭佳琳，黃威，等．H22實體瘤小鼠的免疫功能指標(biāo)及環(huán)磷酰胺的影響［J］．中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，30（3）：083．

［5］姜軍梅，劉吉勇，朱菊人，等．5－氟尿嘧啶誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞凋亡的機理研究（英文）［J］．中華醫(yī)學(xué)雜志：英文版，2002，155（7）：8－11．

（編輯陳明偉）

R285．5

A

2095-4441（2016）03－0009－02

2016－06－15

廣西高校重點實驗室課題

張瑜（1990－），女，黑龍江人，碩士研究生，研究方向：中草藥抗腫瘤機制的研究

鄭作文，教授，碩士研究生導(dǎo)師，從事中草藥抗腫瘤工作，E－mail：zzw_nn＠163．com