HPLC法測(cè)定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量

錢文慧 曹燕麗 吳晶晶 侯憶璠 蘇 華 巖林蘋

江蘇省南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

HPLC法測(cè)定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量

錢文慧 曹燕麗 吳晶晶 侯憶璠 蘇 華 巖林蘋▲

江蘇省南京軍區(qū)南京總醫(yī)院制劑科，江蘇南京210002

目的建立同時(shí)測(cè)定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦含量的分析方法。方法采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定醋酸地塞米松和樟腦的含量，以Lichrospher C18為色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），乙腈-水（60∶40）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫為25℃，流速：1.0 mL/min。結(jié)果醋酸地塞米松和樟腦檢測(cè)濃度分別在0.007 74～0.015 49 mg/mL（r2=0.9999）和0.487 28～1.949 13 mg/mL（r2=0.9999）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率分別為100.28%、99.72%，RSD為0.58%、0.56%。地丙醇搽劑中醋酸地塞米松平均含量為0.29 mg/mL，樟腦平均含量為28.84 mg/mL。結(jié)論本法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確可靠，適用于地丙醇搽劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法曰醋酸地塞米松曰樟腦曰地丙醇搽劑

地丙醇搽劑為南京軍區(qū)南京總醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）臨床廣泛使用的外用制劑，具有消炎抗敏、止癢止痛的療效，臨床上主要用于慢性濕疹、神經(jīng)性皮炎、皮膚瘙癢癥的治療，療效顯著。地丙醇搽劑處方中的主要成分為醋酸地塞米松和樟腦，其中醋酸地塞米松能降低毛細(xì)血管的通透性，減輕水腫，從而抑制炎性反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展［1-2］；樟腦則具有殺蟲止癢、消腫止痛的功效［3］，兩者是地丙醇搽劑發(fā)揮療效的主要有效成分。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)下僅要求采用紫外分光光度法測(cè)定醋酸地塞米松的含量，方法處理費(fèi)時(shí)，且未要求定量檢測(cè)揮發(fā)性成分樟腦的含量。為了全面控制制劑的質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)［3-8］，建立了采用同一波長(zhǎng)同時(shí)定量測(cè)定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量，該方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果可靠，為進(jìn)一步保障該制劑的質(zhì)量提供了依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agi1ent 1100 Series高效液相色譜儀，VWD檢測(cè)器；AE240電子分析天平（德國(guó)梅特勒-托利多儀器有限公司），KQ-250DB數(shù)控超聲波清洗器（江蘇昆山超聲儀器有限公司）；FA1604S電子天平（上海天平儀器廠）。

1.2 試藥

醋酸地塞米松對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)100122-201206，純度100%）；樟腦對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院提供，批號(hào)110747-201409，純度98.7%）；色譜醇甲醇（美國(guó)TEDIA公司）；地丙醇搽劑（規(guī)格：每瓶裝60 mL，我院制劑科自制，批號(hào)：140307），其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

本研究用紫外分光光度計(jì)分別對(duì)醋酸地塞米松和樟腦的對(duì)照品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)醋酸地塞米松和樟腦的的最大吸收波長(zhǎng)分別為239、290 nm，本應(yīng)選擇兩曲線的交叉點(diǎn)285 nm為測(cè)定波長(zhǎng)，但因該制劑中醋酸地塞米松和樟腦的比例相差很大，樟腦的濃度是醋酸地塞米松的10倍，因此測(cè)定波長(zhǎng)選擇了醋酸地塞米松吸收值較大的270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，在該檢測(cè)波長(zhǎng)下兩組分相互無(wú)干擾，且吸收值比較合適，因此選擇270 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，具體吸收?qǐng)D譜見圖1。

圖1 醋酸地塞米松和樟腦的紫外吸收光譜圖

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

按照高效液相色譜法（《中國(guó)藥典》2015年版一部附錄ⅥD）測(cè)定［4］。采用Lichrospher C18柱（4.6 mm× 250 mm，5 μm）色譜柱，以乙腈-水（60∶40）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，流速1.0 mL/min，柱溫25℃，進(jìn)樣量為20 μL，理論塔板數(shù)按醋酸地塞米松和樟腦峰計(jì)算不低于2000。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取醋酸地塞米松和樟腦對(duì)照品適量，置于25、50 mL量瓶中，加流動(dòng)相系統(tǒng)稀釋至刻度，搖勻，配制成分別含醋酸地塞米松4.9376 mg/mL和樟腦0.1936 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密吸取醋酸地塞米松對(duì)照品儲(chǔ)備液2 mL和樟腦對(duì)照品儲(chǔ)備液0.6 mL置于10 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至容量瓶刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

精密吸取地丙醇搽劑0.4 mL于10 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，過(guò)濾，除去初濾液，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.5 專屬性試驗(yàn)

按處方比例和供試品制備工藝不加醋酸地塞米松和樟腦，制成陰性對(duì)照，按照“2.3”項(xiàng)下方法制成陰性對(duì)照溶液。精密吸取如上所述的對(duì)照品溶液、供試品溶液與陰性對(duì)照溶液各20 μL，按上述方法進(jìn)行測(cè)定并記錄色譜圖。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在供試品色譜中，與對(duì)照品色譜相應(yīng)的保留時(shí)間處，有同一色譜峰，而陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)保留時(shí)間處則無(wú)色譜峰出現(xiàn)，表明其對(duì)樣品測(cè)定無(wú)干擾，具體圖譜見圖2。

圖2 地丙醇搽劑的HPLC圖

2.6線性關(guān)系考察

分別精密吸取醋酸地塞米松儲(chǔ)備液1.0、1.6、2.0、3.0、4.0 mL和樟腦儲(chǔ)備液0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL至10 mL的容量瓶中，采用流動(dòng)相稀釋至刻度，定容。按照上述色譜條件和方法進(jìn)樣20 μL，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸，分別得到醋酸地塞米松和樟腦的回歸方程：Y= 15 403X-3.18，r2=0.9999（n=5）和Y=171.6X-2.7954，r2=0.9999（n=5）。結(jié)果表明，醋酸地塞米松的濃度在0.007 74～0.015 49 mg/mL之間，樟腦的濃度在0.487 28～1.949 13 mg/mL之間，與峰面積呈良好的線性關(guān)系，方法可行。

2.7 精密度試驗(yàn)

分別取“2.2”項(xiàng)下的醋酸地塞米松和樟腦對(duì)照品溶液，按上述色譜條件和方法連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為20 μL，結(jié)果得醋酸地塞米松峰面積RSD為0.58%，樟腦峰面積RSD為0.56%，表明該方法精密度良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（批號(hào)：140307）的樣品1份，按照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，在常溫下分別于0、1、2、4、8 h進(jìn)樣20 μL，記錄醋酸地塞米松和樟腦的色譜圖并計(jì)算峰面積，RSD分別為0.80%、0.99%，表明樣品溶液的穩(wěn)定性良好。

2.9 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（批號(hào)：140307）的樣品5份，按照“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，按上述的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為20 μL，結(jié)果得醋酸地塞米松和樟腦峰面積的RSD分別為0.98%、1.00%，表明方法重復(fù)性好。

2.10 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量的樣品0.2 mL（批號(hào)：140307），共9份，分別置于10 mL量瓶中，精密加入低、中、高濃度的醋酸地塞米松儲(chǔ)備液0.18、0.3、0.42 mL和樟腦儲(chǔ)備液0.6、1、1.4 mL，按照“2.4.3”項(xiàng)下樣品方法制備。精密吸取上述試液各20 μL注入色譜儀，測(cè)定含量，計(jì)算回收率。醋酸地塞米松和樟腦的平均回收率分別為100.28%、99.72%，RSD分別為1.04%和0.90%。結(jié)果見表1～2。

表1 醋酸地塞米松加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

表2 樟腦加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

2.11 樣品含量測(cè)定

取三批地丙醇搽劑（批號(hào)：140103、140307、140819），按照“2.4.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 醋酸地塞米松和樟腦含量測(cè)定結(jié)果（n=3）

綜合3批樣品測(cè)定結(jié)果，本品含醋酸地塞米松為標(biāo)示量的90.0%～110.0%，因樟腦為揮發(fā)性成分，所以確定本品含樟腦為標(biāo)示量的85.0%～110.0%。

3 討論

3.1 流動(dòng)相的選擇

參照《中國(guó)藥典》2015版二部中關(guān)于醋酸地塞米松和樟腦的含量測(cè)定方法及部分參考文獻(xiàn)［5，9-12］，對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行了選擇試用：發(fā)現(xiàn)甲醇-水（60∶40）出峰時(shí)間太慢，40 min內(nèi)樟腦都未出峰，且該流動(dòng)相下醋酸地塞米松的樣品峰形不太好；而乙腈-水（70∶30）出峰時(shí)間又稍快，且樣品峰分離度不好；最終采用乙腈-水（60∶40）為流動(dòng)相，兩樣品色譜峰出峰時(shí)間合適，分離度較好，故選擇其為最佳流動(dòng)相。

3.2 稀釋溶劑的選擇

文獻(xiàn)報(bào)道［5，13-16］，醋酸地塞米松和樟腦都為非極性物質(zhì)，易溶于甲醇或無(wú)水乙醇等溶劑。筆者經(jīng)過(guò)比較和實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)乙腈-水（60∶40）流動(dòng)相系統(tǒng)作為稀釋溶劑對(duì)醋酸地塞米松和樟腦的溶解性都較好，同時(shí)也能避免樣品出現(xiàn)溶劑峰。

3.3 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂

原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅測(cè)定地丙醇搽劑中醋酸地塞米松的含量，對(duì)制劑中另一揮發(fā)性成分樟腦的含量并未檢測(cè)，因此為了全面控制制劑的質(zhì)量，需要同時(shí)測(cè)定制劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量。筆者檢索了相關(guān)文獻(xiàn)［17-20］，關(guān)于采用同一波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定兩個(gè)成分的相關(guān)報(bào)道較少，因此為了進(jìn)一步提高醫(yī)院制劑的質(zhì)量以及確保臨床用藥的安全，本文根據(jù)地丙醇搽劑中兩個(gè)主藥的成分性質(zhì)以及含量的多少，建立了采用同一波長(zhǎng)同時(shí)測(cè)定制劑中醋酸地塞米松和樟腦的含量。最后結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況，綜合多批樣品測(cè)定結(jié)果，確定本品含醋酸地塞米松為標(biāo)示量的90.0%～110.0%；而樟腦為揮發(fā)性成分，且之前只對(duì)樟腦僅進(jìn)行定性鑒別，未進(jìn)行定量控制，因此確定本品含樟腦為標(biāo)示量的85.0%～110.0%。

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Determination of dexamethasone acetate and camphor in Dibingchun Liniment by HPLC

QIAN WenhuiCAO YanliWu JingjingHou YifanSU HuaYAN Linping▲
Department of Preparation Division，Nanjing Genera1 Hospita1 of Nanjing Mi1itary Command，PLA，Jiangsu Province，Nanjing210002，China

Objective To estab1ish the method for the determination of dexamethasone acetate and camphor in Dibingchun Liniment.Methods The HPLC method was used to determine their contents and the Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）co1umn was used，the detection wave1ength was set at 270 nm and the co1umn temperature was maintained at 25℃.The mobi1e phase system was acetonitri1e-water（60∶40）and the f1ow rate was 1.0 mL/min.Results The 1iner range of dexamethasone acetate and camphor were 0.007 74-0.015 49 mg/mL（r2=0.9999）and 0.487 28-1.949 13 mg/mL（r2=0.9999）respective1y and the average recovery was 100.28%and 99.36%.The average contents of dexamethasone acetate and camphor for determination in Dibingchun Liniment were 0.29，28.84 mg/mL.Conclusion This method is simp1e，practica1 and accurate，the resu1t can be used to contro1 the qua1ity of Dibingchun Liniment.

HPLC；Dexamethasone acetate；Camphor；Dibingchun Liniment

R914.1

A

1674-4721（2016）07（c）-0142-04

2016-04-13本文編輯：趙魯楓）

全軍醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)提高科研專項(xiàng)課題重點(diǎn)項(xiàng)目（14ZJZ08）

▲通訊作者