川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

梁朝鋒 祁 俊 榮娟娟

安徽省蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室，安徽蕪湖241000

川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

梁朝鋒 祁 俊 榮娟娟

安徽省蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室，安徽蕪湖241000

目的研究建立川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法采用薄層色譜法對方中當(dāng)歸、川芎、三七、龍血竭、地龍進(jìn)行定性鑒別。當(dāng)歸、川芎展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯（9：1）；三七展開劑為三氯甲烷-甲醇-水（13：7：2）10℃放置的下層溶液；龍血竭展開劑為三氯甲烷-甲醇（9：1）；地龍展開劑為甲苯-丙酮（9：1）。采用UV-HPLC法對丹參中丹酚酸B含量進(jìn)行測定。色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18，流動相為乙腈-0.1%甲酸（22：78），流速為1.0mL/min，檢測波長為286 nm。結(jié)果TLC法鑒別當(dāng)歸、川芎、三七、龍血竭、地龍，其方法專屬性強(qiáng)；丹酚酸B在22.16～221.60μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r2=0.9997），平均回收率為103.9%，RSD=1.82%；3批樣品含量測定結(jié)果分別為4.83、4.46、4.74mg/g。結(jié)論本方法可用于川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制。

川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊；薄層色譜；UV-HPLC；丹酚酸B

股骨頸骨折在臨床上發(fā)生率＜為3.58%［1］，其治療方法主要是復(fù)位內(nèi)固定術(shù)，但由于其解剖血供的特殊性，術(shù)后股骨頭壞死及骨不愈合成為骨科領(lǐng)域的難題［2］。

川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊由當(dāng)歸、川芎、丹參、三七、龍血竭、炮山甲、土鱉蟲、地龍、鹿茸、龜甲、淫羊藿、肉桂、海星、人中黃、冰片15味藥物組成，具有補(bǔ)益肝腎、強(qiáng)筋壯骨、活血通絡(luò)、行氣止痛的作用，主要用于股骨頸骨折術(shù)后股骨頭缺血性壞死中晚期患者血瘀、肝腎虧虛型，癥見疼痛、活動不利、骨不愈合等癥。為了控制本制劑的質(zhì)量，采用薄層色譜法對方中當(dāng)歸、川芎、三七、龍血竭、地龍進(jìn)行定性鑒別，采用UVHPLC法測定了丹參中丹酚酸B的含量，建立了川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊的質(zhì)量控制方法。

1 器與試藥

高效液相色譜儀（安捷倫1200）；電子天平（Mettler，XP-205）；KQ-500DB數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；丹酚酸B（111562-201111）；當(dāng)歸對照藥材（120927-201014）；川芎對照藥材（120918-201110）；三七對照藥材（120941-201108）；龍血竭對照藥材（121252-201303）；地龍對照藥材（120987-201107）；硅膠G板（青島海洋化工廠分廠）；乙腈（HPLC/Spectro，TEDIA公司）；川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊樣品（130704、130712、130719，均由蕪湖市中醫(yī)醫(yī)院制劑室提供）；其他試劑如甲醇等均為分析純。對照藥材及對照品均購于中國食品藥品檢定研究；。

2 法與結(jié)果

2.1 當(dāng)歸、川芎TLC

取本品3 g，加乙醚30 mL，超聲10min，濾過，濾液揮干，加乙酸乙酯1mL溶解，制成供試品溶液［3-5］。另取當(dāng)歸、川芎對照藥材各0.5 g，同法制成1 mL乙酸乙酯液，作為對照藥材溶液。按處方稱取飲片（當(dāng)歸、川芎除外），按工藝及供試品制備方法制成陰性樣品液。吸取上述溶液各2μL，咖于同一薄層板（硅膠G）上，展開劑為環(huán)己烷-乙酸乙酯（9：1），展開后取出晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。見圖1。

圖1 當(dāng)歸、川芎TLC色譜圖

2.2 三七TLC

取本品5 g，加乙醚40mL，超聲10min，濾過，濾渣揮盡乙醚味，加甲醇50 mL，超聲30 min，濾過，濾液蒸干，加水50 mL溶解，用水飽和的正丁醇提取3次（50、30、30 mL），合并提取液，用5%氫氧化鈉溶液洗2次（30mL/次），棄去洗滌液，用水洗3次（30mL/次），棄去水液，正丁醇液蒸干，加甲醇2 mL溶解，作為供試品溶液［6-8］。另取三七對照藥材0.5 g，加乙醚40mL，同法制成2 m L甲醇液，作為對照藥材溶液。按處方稱取飲片（三七除外），按工藝及供試品制備方法制成陰性樣品液。吸取上述3種溶液各2μL，咖于同一薄層板（硅膠G）上，展開劑為三氯甲烷-甲醇-水（13：7：2）10℃放置的下層溶液，展開后取出晾干，噴10%硫酸乙醇溶液，于105℃加熱顯色。見圖2。

圖2 三七TLC色譜圖

2.3 龍血竭TLC

取本品3 g，加乙醚30mL，超聲10min，濾過，濾液揮干，加乙酸乙酯1mL使溶解，作為供試品溶液［9-11］。另取龍血竭對照藥材0.1 g，同法制成1mL乙酸乙酯液，作為對照藥材溶液。按處方飲片（龍血竭除外），按照制備工藝及供試品制備方法制成陰性樣品及陰性樣品溶液。吸取上述3種溶液各2μL，咖于同一薄層板（硅膠G）上，展開劑為三氯甲烷-甲醇（9：1），展開后取出晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。見圖3。

圖3 龍血竭TLC色譜圖

2.4 地龍TLC

取“2.3”項下樣品溶液作為供試品溶液。另取地龍對照藥材1 g，加三氯甲烷20 mL，超聲30 min，濾過，濾液蒸干，加三氯甲烷1 mL溶解，制成對照藥材溶液［12-13］。按處方稱取飲片（地龍除外），按工藝及供試品制備方法制成陰性樣品液。吸取上述3種溶液各1 μL，咖于同一薄層板（硅膠G）上，展開劑為甲苯-丙酮（9：1），展開后取出晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。見圖4。

圖4 地龍TLC色譜圖

2.5 丹酚酸B的含量測定

2.5.1 色譜條件以Agilent Zorbax SB-C18（4.6mm×15mm，5μm）為色譜柱，以乙腈-0.1%甲酸（22：78）為流動相，檢測波長為286 nm。理論板數(shù)按丹酚酸B峰計算應(yīng)不低于2000［14-17］。

2.5.2 對照品溶液的制備精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75%甲醇制成每毫升含100μg的溶液，即得。

2.5.3 供試品溶液及陰性樣品溶液的制備取本品裝量差異下的內(nèi)容物＜1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇50m L，密塞，稱定重量，超聲處理（功率350W，頻率40 kHz）30min，放冷后再稱定重量，用75%甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過，即得供試品溶液。按處方稱取除丹參外的其他飲片，按照工藝及供試品制備方法制成陰性樣品及陰性樣品溶液。

2.5.4 專屬性試驗(yàn)取上述丹酚酸B對照品溶液、供試品及陰性溶液各10μL，按照色譜條件依法測定，丹酚酸B和供試品中其他組分分離度良好，陰性色譜峰在相應(yīng)位置未檢出相應(yīng)峰。見圖5。

2.5.5 線性關(guān)系的考察精密稱取丹酚酸B適量，置50 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，即得0.4432 mg/mL對照品溶液。精密移取各0.25、0.5、1、1.5、2、2.5m L置5 mL量瓶中，用甲醇溶解定容，搖勻，配成22.16、44.32、88.64、132.96、177.28、221.60μg/mL的對照品溶液，搖勻，進(jìn)樣量為10μL。分別以峰面積和進(jìn)樣濃度為縱坐標(biāo)（Y）、橫坐標(biāo)（X），進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=10.394X-76.319，r2=0.9997，表明丹酚酸B在22.16～221.60μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5.6 精密度試驗(yàn)取供試液，進(jìn)樣10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，計算RSD=0.64%，表明精密度良好。

2.5.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試液，精密吸取10μL，每隔2 h進(jìn)樣1次，連續(xù)進(jìn)樣10 h，測定峰面積，計算RSD=0.31%，表明樣品在10 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.8 重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取同一批次樣品按照“2.5.3”項下方法制備供試品，平行6份，按照“2.5.1”項色譜條件進(jìn)樣測定計算，丹酚酸B的平均含量為4.80mg/g，RSD=1.18%。表明樣品的重復(fù)性良好。

圖5 川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊HPLC圖譜

2.5.9 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已測定含量的樣品（批號：130704）0.5 g，6份，加入丹酚酸B適量，按照“2.5.3”項下方法制備供試品，再按“2.5.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，得到平均加樣回收率為103.9%（RSD= 1.82%），表明加樣回收率符合規(guī)定。結(jié)果見表1。

表1 丹酚酸B加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.5.10 樣品測定按照“2.5.3”項下方法制備供試品，再按“2.5.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算樣品中含量。結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測定

3 論

股骨頭缺血性壞死目前具體的發(fā)病機(jī)制尚不明確［18］，但中醫(yī)學(xué)認(rèn)為［19］，骨折后脈絡(luò)損傷，致經(jīng)血積淤，骨折部位血運(yùn)行不暢，導(dǎo)致股骨頭缺血壞死。故治療股骨頸骨折除了內(nèi)固定外，還應(yīng)以活血化瘀、散瘀強(qiáng)筋、培補(bǔ)固體的原則來服藥治療，以改善各關(guān)節(jié)周圍血液循環(huán)，改變局部血氧情況，且通過中藥增加骨骼強(qiáng)度，增強(qiáng)骨痂的力學(xué)性能，促進(jìn)血管再生與重建，改變術(shù)后股骨頭壞死及骨不愈合的狀況，提高患者的生存質(zhì)量。

川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊中當(dāng)歸補(bǔ)血活血，為君藥，旨在祛除瘀血、養(yǎng)血生血；川芎、三七、龍血竭、丹參、炮山甲、土鱉蟲、地龍具加強(qiáng)活血化瘀、破血消癥之效，為臣藥；鹿茸、龜甲、肉桂、淫羊藿可補(bǔ)腎壯陽、強(qiáng)筋骨，益精血為佐藥；冰片加強(qiáng)消腫止痛之效為使藥。全方大多藥物活血祛瘀兼顧補(bǔ)血養(yǎng)血，行氣止痛而不傷正，各藥配伍得當(dāng)，相得益彰。

研究開發(fā)有效的臨床經(jīng)驗(yàn)方是現(xiàn)代中藥復(fù)方研究的重要方向和熱咖，但醫(yī)院制劑的質(zhì)量控制水平也要提高［20］。本研究建立了當(dāng)歸、川芎、三七、龍血竭、地龍的薄層色譜鑒別法和丹酚酸B的高效液相含量測定法，專屬性強(qiáng)，操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確且重現(xiàn)性好，能夠有效控制川歸補(bǔ)腎通絡(luò)膠囊的質(zhì)量。

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Quality control of Chuangui Bushentongluo Capsules

LIANG Chaofeng QIJun RONG Juanjuan
Preparation Room，Wuhu Hospital of TCM，Anhui Province，Wuhu 241000，China

Objective To establish the quality standard of Chuangui Bushentongluo Capsules.Methods TLC was conducted for the content determination of angelica，rhizoma chuanxiong，notoginseng，dragons blood and lumbricus in the preparation.The developer for angelica and rhizoma chuanxiong were cyclohexane-ethyl acetate（9：1）；for the notoginsengwas low solution of chloroform-methanol-water（13：7：2）at10 degress；for the dragonsblood was chloroform-methanol（9：1）；for the lumbricus was toluene-acetone（9：1）.UV-HPLC was conducted for the content determination of salvianolic acid B.The column was Agilent Zorbax SB-C18with acetonitrile-0.1%formic acid solution（22：78）at a flow rate of 1.0 mL/min，the detection wavelength was 286 nm.Resu lts Angelica，rhizoma chuanxiong，notoginseng，dragons blood and lumbricus of TLC was specific.The linear ranges of salvianolic acid B was 22.16-221.60μg/mL（r2=0.9997）.The average recoveries ofwas 103.9%，RSD=1.82%.The results of the three batches of samples were 4.83 mg/g，4.46 mg/g and 4.74 mg/g.Conclusion Themethod can be used for the quality control of Chuangui Bushentongluo Capsules.

Chuangui Bushentongluo Capsules；TLC；UV-HPLC；Salvianolic acid B

R927.11

A

1673-7210（2016）05（c）-0146-04

2016-01-29本文編輯：趙魯楓）

安徽省科技惠民計劃（2015hm09）。

梁朝鋒（1982-），男，碩士，主要從事中藥制劑的開發(fā)研究。