定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架上兔軟骨細胞生長增殖觀察及新生組織生物力學(xué)檢測

張加廷 張東正 侯建雷 張仲文▲

1.武警后勤學(xué)院，天津300309；2.武裝警察部隊總醫(yī)院骨軟骨科，北京100039

定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架上兔軟骨細胞生長增殖觀察及新生組織生物力學(xué)檢測

張加廷1，2張東正2侯建雷2張仲文2▲

1.武警后勤學(xué)院，天津300309；2.武裝警察部隊總醫(yī)院骨軟骨科，北京100039

目的探討采用定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原軟骨支架復(fù)合軟骨細胞體外構(gòu)建生物力學(xué)性能更好的組織工程軟骨。方法利用牛跟腱和豬軟骨分別提?、裥湍z原和Ⅱ型膠原并以超微量分光光度計測定其最大紫外吸收峰。利用快速冷凍自然真空凍干篩選成型法制備垂直定向微孔結(jié)構(gòu)的Ⅰ/Ⅱ型膠原復(fù)合支架，同時采用普通冷凍干燥法制備非定向Ⅰ/Ⅱ型膠原復(fù)合支架。將兔軟骨細胞分別接種在兩組支架上，體外靜態(tài)培養(yǎng)3 d后掃描電子顯微鏡下觀察軟骨細胞生長情況，MTT法測量兩組支架體外靜態(tài)培養(yǎng)14 d內(nèi)細胞生長情況，通過測量第7天和第14天楊氏模量和抗拉強度檢測兩種新生組織工程軟骨的生物力學(xué)性能。結(jié)果掃描電鏡觀察在兩組支架上體外培養(yǎng)3 d后的軟骨細胞生長情況良好；定向Ⅰ/Ⅱ型膠原復(fù)合支架上種子細胞在5～11 d內(nèi)增殖速度高于非定向Ⅰ/Ⅱ型膠原復(fù)合支架，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原軟骨支架的壓縮彈性模量和抗拉強度高于非定向Ⅰ/Ⅱ型膠原軟骨支架，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原軟骨支架能夠在特定時間段內(nèi)促進細胞增殖，與軟骨細胞體外靜態(tài)培養(yǎng)后能夠成功生成具有定向纖維結(jié)構(gòu)、生物力學(xué)性能更好的組織工程軟骨，是有良好應(yīng)用前景的組織工程軟骨支架材料。

Ⅰ/Ⅱ型復(fù)合膠原膜；定向支架；軟骨細胞；軟骨組織工程；生物力學(xué)

臨床常見的關(guān)節(jié)軟骨缺損很難自愈，傳統(tǒng)治療方法不能實現(xiàn)透明軟骨修復(fù)［1］。組織工程軟骨植入是治療關(guān)節(jié)軟骨缺損效果較為確切且安全性好的治療方法［2］。Stark等［3］通過研究證明了軟骨細胞在膠原膜上能夠生存且進一步增殖。液態(tài)下的膠原蛋白形成一種膠狀溶液，其作用可刺激細胞分裂，同時膠原蛋白的一部分降解產(chǎn)物可被細胞利用合成新的細胞外基質(zhì)［4］。Yates等［5］的研究中使用Ⅰ型膠原海綿支架搭載牛軟骨細胞，共培養(yǎng)后觀察軟骨細胞可以正常增殖并維持其表型穩(wěn)定?；冖蛐湍z原蛋白具有促進去分化軟骨細胞再分化與活化的能力［6］，Ⅱ型膠原在組織工程軟骨中越來越受重視。

關(guān)節(jié)軟骨細胞外基質(zhì)的膠原成分中Ⅱ型膠原蛋白含量為90%～95%［7］。正常人體關(guān)節(jié)軟骨分為淺表層、移行層、柱狀層和鈣化層四層。鈣化層是軟骨與軟骨下骨的過渡層，起著隔離軟骨和軟骨下骨的作用，同時將二者牢固地整合在一起，軟骨營養(yǎng)主要來源于關(guān)節(jié)腔滑液，而關(guān)節(jié)液中的氧濃度明顯低于軟骨下松質(zhì)骨的氧供濃度，軟骨細胞適應(yīng)低氧環(huán)境，低氧條件下有利于軟骨細胞的分化、增殖，如果血液一旦侵入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，其中一些成分會因觸發(fā)炎性反應(yīng)而導(dǎo)致新生軟骨細胞凋亡或壞死［17］。Ⅰ/Ⅱ型膠原復(fù)合支架的結(jié)構(gòu)設(shè)計是與正常關(guān)節(jié)軟骨的分層結(jié)構(gòu)及軟骨細胞順膠原纖維方向呈柱狀排列相對應(yīng)，同時也有利于提高再生軟骨組織的生物力學(xué)性能［8］。有學(xué)者曾采用溫度梯度熱誘導(dǎo)相分離（temperaturegradient-guidedthermal-inducedphaseseparation，TIPS）技術(shù)成功制備了軟骨細胞基質(zhì)來源的定向結(jié)構(gòu)支架［9］，此種方式較為繁瑣，儀器設(shè)備要求較高，且其支架構(gòu)成材料為單一Ⅱ型膠原，不能兼顧Ⅰ、Ⅱ型膠原在軟骨細胞生長中的作用［10］。筆者在Ⅱ型膠原支架的制備中發(fā)現(xiàn)膠原在凝膠狀態(tài)轉(zhuǎn)置于超低溫冰箱迅速冷凍后部分纖維結(jié)構(gòu)可呈定向排列，經(jīng)過真空凍干后可篩選接切出定向結(jié)構(gòu)較為均勻的定向支架，再經(jīng)過化學(xué)交聯(lián)并與Ⅰ型膠原復(fù)合后可以制成具有縱向排列纖維結(jié)構(gòu)的膠原支架。尚未見使用快速冷凍真空凍干法制備定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型復(fù)合膠原支架并與軟骨細胞共培養(yǎng)體外構(gòu)建定向結(jié)構(gòu)組織工程軟骨的報道。

1 料與方法

1.1 材料

牛跟腱及關(guān)節(jié)軟骨：北京市屠宰場購買的新鮮牛跟腱及豬膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)軟骨。

1.2 主要試劑及儀器

主要試劑：碳化二亞胺（EDC）（分析純）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）（分析純）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；乙烷磺酸（MES）（分析純）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；氯化鈉（NaCl）（分析純）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；胃蛋白酶（美國Sigma）；Ⅱ型膠原酶（美國Sigma）；鹽酸胍（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；氫氧化鈉（NaOH）（分析純）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；超純水（武警總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實驗中心提供）；DMEM高糖培養(yǎng)基（Invitrogen，美國）；胎牛血清（HyClon-e，美國）。

主要儀器：系統(tǒng)冷凍干燥機（中國四環(huán)LGJ-10C）；磁力加熱攪拌器（中國國華78-1）；電子天平（美國DenverTB-2002/203）；臺式低溫高速離心機（美國貝克曼）；倒置熒光顯微鏡（日本奧林帕斯IX-71）；超微量分光光度計（美國Alphaspecul）；酸堿測定儀（美國貝克曼）；立式恒溫振蕩器（美國精騏）；Milliproe超純水機制造系統(tǒng)（英國ELAGACENTRA-200）；可調(diào)高速勻漿機（中國FS-1型）；低速冷凍離心機（中國長沙湘智DL-5）；-80℃低溫冰箱（日本SANYO-530L）；掃描電子顯微鏡（scanningelectronicmicroscope，SEM，Hitachi，日本）；生物材料力學(xué)測試機（Shimadzu，日本）。

1.3 方法

1.3.1 定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原軟骨支架制備及性能檢測1.3.1.1Ⅰ型膠原蛋白的提取以新鮮牛跟腱為原料，采用乙醇脫脂-乙酸溶脹-胃蛋白酶消化-鹽析-透析-真空冷凍干燥法提取Ⅰ型膠原蛋白，并用超微量分光光度計在220～800nm波長范圍內(nèi)，進行紫外吸收峰掃描，測定樣品最大紫外吸收峰的波長。

1.3.1.2 Ⅱ型膠原蛋白的提取將豬膝關(guān)節(jié)股骨髁軟骨以手術(shù)刀小心剃下，混入少量75%酒精后置于勻漿機打碎，采用乙醇浸泡脫脂-鹽酸胍去糖蛋白-胃蛋白酶消化-鹽析-透析-真空冷凍干燥提?、蛐湍z原蛋白［11］，并用超微量分光光度計進行紫外吸收峰掃描，測定樣品最大紫外吸收峰的波長。

1.3.1.3 定向與非定向結(jié)構(gòu)Ⅱ型膠原支架制備Wu等［12］研究證明了單向凍干法制備定向多空明膠支架的可行性。筆者將制備好的Ⅱ型膠原二次溶脹制成凝膠狀，濃度為150mg/mL，常溫下小燒杯中磁力攪拌器攪拌6h，將凝膠狀Ⅱ型膠原轉(zhuǎn)置入培養(yǎng)皿中。膠原凝膠置于未預(yù)冷的真空凍干機中，打開真空抽干機，可見大量氣泡逐漸膨脹破裂，待膠原凝膠膨脹至將要溢出器皿時關(guān)閉真空抽干機并放氣，重復(fù)此操作3～5次可見膠原凝膠中氣泡消失。將除完氣泡的凝膠置于-80℃超低溫冰箱快速冷凍24h，去除冷凍后的膠原凝膠快速置于提前遇冷至-35℃真空凍干機中真空冷凍抽干24h。觀察凍干后的膠原支架有部分區(qū)域呈均勻定向排列，以眼科剪剪取直徑5mm、厚度3mm具有垂直定向結(jié)構(gòu)的Ⅱ型膠原支架。同時采用傳統(tǒng)的真空凍干法制備非定向Ⅱ型膠原支架。

1.3.1.4 制備Ⅰ/Ⅱ復(fù)合膠原膜將制備好的Ⅰ型膠原二次溶脹，配制濃度為200mg/mL的Ⅰ型膠原凝膠，均勻鋪在直徑5 cm培養(yǎng)皿中，超凈工作臺中風(fēng)干。將直徑5mm、厚度3mm的定向結(jié)構(gòu)Ⅱ型膠原支架鋪于風(fēng)干后的Ⅰ型膠原膜上。非定向Ⅱ型膠原海綿采取同樣方法切割并鋪于風(fēng)干后的Ⅰ型膠原膜上，倒入配制好的碳二亞胺交聯(lián)劑（含0.05 mol/LMES、0.033 mol/L EDC和0.02 mol/L NHS，95%的乙醇溶液）并置入立式恒溫振蕩器室溫下交聯(lián)24 h后，配制交聯(lián)劑再次交聯(lián)24 h，超純水反復(fù)沖洗5次。普通光學(xué)顯微鏡及SEM觀察定向支架及非定向支架的微觀結(jié)構(gòu)特咖。

1.3.2 構(gòu)建新生組織工程軟骨及相關(guān)檢測

采用3周齡新西蘭大白兔膝關(guān)節(jié)軟骨為材料，經(jīng)Ⅱ型膠原酶消化法提取關(guān)節(jié)軟骨細胞［13］，體外擴增培養(yǎng)至第2代，移液器吸取細胞懸液分別接種兩組支架，細胞接種數(shù)量控制在10.0×105個/塊。培養(yǎng)3 d后利用SEM觀察軟骨細胞在定向Ⅰ/Ⅱ型膠原支架和非定向支架上的形態(tài)及分布特咖，采用MTT方法檢測細胞在兩組支架上的增殖情況。在共培養(yǎng)第7天和第14天利用生物材料力學(xué)測試機分別測定兩組新生組織工程軟骨的楊氏模量（0.05 N，速率0.01 mm/s，行程：初始高度的4%，松弛相：2000 s）和抗拉強度（5mm/min拉伸），檢測兩組新生組織的生物力學(xué)性能。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件，若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（表示。采用獨立樣本t檢驗（independent-tests）比較MTT法檢測的細胞在兩組支架上增殖情況，采用單因素方差分析（one-way ANOVA）比較兩組新生組織工程軟骨生物力學(xué)性能，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 膠原蛋白的紫外吸收峰

圖2 定向結(jié)構(gòu)支架與非定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型支架示意圖及Ⅱ型膠原定向與非定向支架

2 果

2.1 膠原紫外吸收峰及大體和顯微鏡觀察支架結(jié)構(gòu)

經(jīng)過超微量分光光度計（Picdrop Application系統(tǒng)軟件）測定Ⅰ型膠原蛋白的紫外光吸收值在226.5 nm左右形成一個波峰（圖1a）；Ⅱ型膠原凝膠在233.8 nm左右形成一個較高的波峰（圖1b），這符合Ⅱ型膠原最大吸收峰特征［14］。支架大體結(jié)構(gòu)及顯微鏡觀察示Ⅰ/Ⅱ型雙層復(fù)合膠原膜結(jié)構(gòu)中，底層為高度致密、光滑、均勻的Ⅰ型膠原膜；頂層為相對低密度Ⅱ型膠原膜層，表面呈白色、粗糙、海綿樣結(jié)構(gòu)，鏡下孔徑致密，分布較均勻，為軟骨細胞提供良好的生長環(huán)境；Ⅰ、Ⅱ型雙層膠原膜之間經(jīng)過化學(xué)交聯(lián)，使它們結(jié)合緊密，堅固牢靠無空隙。交聯(lián)后的定向結(jié)構(gòu)支架顯微鏡下可見膠原纖維平行排列，非定向膠原支架纖維鏡下可見膠原纖維無序排列（圖2～3）。

2.2 掃描電鏡觀察定向與非定向雙層支架微觀結(jié)構(gòu)

對定向支架橫切面的SEM觀察發(fā)現(xiàn)，橫切面膠原纖維排列雖然缺少一定規(guī)律，但可見管狀空道，孔道間有空隙相互貫通（圖4a，封三）?？v切面觀察可見上方縱向規(guī)律排列的Ⅱ型膠原纖維及與之密切交聯(lián)、密度較大的Ⅰ型膠原底面（圖4b，封三）。非定向支架SEM觀察其橫向和縱向切面膠原纖維排列無顯著差異，纖維排列呈均勻多孔狀結(jié)構(gòu)，排列無序相互間有微孔貫通（圖5a、b）。

圖3 定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架大體觀察及顯微鏡下觀察

圖5 掃描電子顯微鏡下非定向支架微結(jié)構(gòu)觀察

2.3 掃描電鏡觀察軟骨細胞在兩組雙層支架上的生長情況

將兔軟骨細胞植入兩組膠原支架后共培養(yǎng)3 d，SEM觀察兩組支架上均能發(fā)現(xiàn)正常生長的軟骨細胞，軟骨細胞黏附于定向支架內(nèi)平行排列微觀孔道的孔壁上，細胞分布具有一定的規(guī)律性和方向性（圖4c，封三），可見細胞伸出偽足，生長狀況良好（圖4d，封三）；非定向軟骨支架中的軟骨細胞分布較為隨機和均勻，無明顯的方向性（圖5c），生長狀況良好（圖5d）。

圖6 軟骨細胞在定向支架及非定向支架上的增殖

2.4 MTT法檢測軟骨細胞不同時間段在兩組雙層膠原支架上的增殖情況

第1～4天時定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架與非定向Ⅰ/Ⅱ型膠原支架上細胞數(shù)量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；第5～11天定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架中細胞數(shù)量大于非定向支架組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；第12～15天兩組支架細胞數(shù)量再次趨于一致，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（圖6）。

2.5 生物力學(xué)檢測

培養(yǎng)第7天，定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架與非定向Ⅰ/Ⅱ型膠原支架壓縮彈性模量分別為（0.21± 0.04）、（0.11±0.03）MPa，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗拉強度分別為（0.88±0.05）、（0.53±0.04）MPa，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。培養(yǎng)第14天，定向Ⅰ/Ⅱ型膠原支架壓縮彈性模量為（0.33±0.09）MPa，非定向Ⅰ/Ⅱ型膠原支架壓縮彈性模量為（0.20±0.06）MPa，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；抗拉強度分別為（1.01±0.08）、（0.63±0.07）MPa，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。但兩組均明顯低于正常關(guān)節(jié)軟骨的壓縮彈性模量［（0.69± 0.09）MPa］、抗拉強度［（5.20±0.72）MPa］，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（圖7～8）。

3 論

當(dāng)前國內(nèi)臨床醫(yī)生在治療關(guān)節(jié)軟骨缺損時采取的主要方法有骨髓刺激技術(shù)，如軟骨下鉆孔術(shù)、微骨折手術(shù)等，而這些技術(shù)新生軟骨大多為纖維樣軟骨，另一種常用的手術(shù)為馬賽克技術(shù)，該技術(shù)取自體非負重區(qū)軟骨作為移植供體，對于患者本身可能造成二次損傷［15］。近年蓬勃發(fā)展的基質(zhì)誘導(dǎo)的自體軟骨細胞移植（MACI）技術(shù)已應(yīng)用于臨床且被證明是一種臨床效果顯著、再生軟骨以透明軟骨為主的軟骨缺損理想治療方法［16］。但是當(dāng)前國內(nèi)用于構(gòu)建組織工程軟骨的細胞支架材料各不相同且多為單一類型支架，實驗研究中若沒有類似軟骨基底層的隔離，來源于軟骨下骨的血液會侵入關(guān)節(jié)腔內(nèi)，其中一些成分不僅會對軟骨缺損修復(fù)研究產(chǎn)生干擾，更嚴(yán)重地會觸發(fā)炎性反應(yīng)而導(dǎo)致新生軟骨細胞凋亡或壞死。這也就要求我們在制備軟骨細胞支架時要模擬正常關(guān)節(jié)的骨軟骨分層結(jié)構(gòu)，才能更好地促進關(guān)節(jié)骨軟骨缺損的修復(fù)［17］，其在臨床中對人體關(guān)節(jié)軟骨缺損的治療作用尚待進一步試驗證實。膠原纖維和軟骨細胞整體上具有柱狀排列的趨勢并垂直于關(guān)節(jié)表面，這種高度方向性的排列方式對于正常關(guān)節(jié)軟骨機械力學(xué)性能的維持尤為重要［18］。

圖7 新生組織工程軟骨壓縮彈性模量檢測

圖8 新生組織工程軟骨抗拉強度檢測

Ⅰ/Ⅱ型雙層復(fù)合膠原膜結(jié)構(gòu)中，底層為高度致密、光滑、均勻的Ⅰ型膠原膜，鏡下孔徑微小；頂層為高濃度Ⅱ型膠原膜層，表面呈白色、粗糙、海綿樣結(jié)構(gòu)，鏡下孔徑致密，分布較均勻，為軟骨細胞提供良好的生長環(huán)境；Ⅰ、Ⅱ型雙層膠原膜之間經(jīng)過化學(xué)交聯(lián)，使它們結(jié)合緊密，堅固牢靠無空隙［19］。在培養(yǎng)第5～11天細胞增殖量定向Ⅰ/Ⅱ型膠原支架明顯多于非定向支架，原因可能為培養(yǎng)初期軟骨細胞沿著定向支架中縱向排列的微觀孔道向支架內(nèi)部快速遷移，同時代謝產(chǎn)物交換和營養(yǎng)物質(zhì)輸送得到了促進，因而導(dǎo)致細胞增殖速度明顯提高［20］。隨著支架上種子細胞的數(shù)量及軟骨細胞不斷分泌的基質(zhì)成分持續(xù)增多，可能部分堵塞定向微管孔壁上相互貫通的孔隙，抵消了定向支架所具有的優(yōu)勢，導(dǎo)致兩組支架上的細胞數(shù)量最終趨于一致。通過壓縮彈性模量檢測和抗拉強度檢測說明定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架的機械力學(xué)性能高于傳統(tǒng)非定向支架，原因可能是定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架所具有的垂直平行排列微管結(jié)構(gòu)提高了組織工程軟骨力學(xué)性能，在一定時間段內(nèi)促進了軟骨細胞的增殖和自分泌，這也可能有助于提高組織工程軟骨的力學(xué)性能。雖然筆者在實驗中未檢測比較定向結(jié)構(gòu)Ⅰ/Ⅱ型膠原支架與傳統(tǒng)的定向結(jié)構(gòu)支架間生物力學(xué)性能間的差別，但傳統(tǒng)的定向結(jié)構(gòu)微觀通道軟骨支架多為單純Ⅱ型膠原，而本研究在此基礎(chǔ)上于Ⅱ型膠原底部增加了較為致密且生物力學(xué)性能更強的Ⅰ型膠原，這也就大大增強了復(fù)合膠原膜的生物力學(xué)性能，而其增強程度有待于進一步研究。

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Observation of chondrocytes proliferation in oriented com posite typeⅠ/Ⅱcollagen scaffold and biomechanical property of new tissue

ZHANG Jiating1，2ZHANG Dongzheng2HOU Jianlei2ZHANG Zhongwen2▲
1.logistic University of People's Armed Police Force，Tianjin 300309，China；2.Department of Cartilaginous Orthopeadics，General Hospital of Armed Police Forces，Beijing 100039，China

Objective To fabricate an oriented composite typeⅠ/Ⅱcollagen scaffold combined with chondrocytes for enhancement of the biomechanical property of tissue-engineered cartilage in vitro.M ethods The typeⅠand typeⅡcollagen extracted from bovine tendon and pig knee articular cartilage were prepared.Collagen maximum UV absorption peak was detected by themicroliter spectrophotometer.Oriented composite typeⅠ/Ⅱcollagen scaffoldswere fabricated composed ofmicrotubules arranged in parallel in vertical sectionvia quick freezing and vacuum freeze-drying process.At the same time，non-oriented typeⅠ/Ⅱcollagen scaffolds were fabricated via the vacuum freeze drying method.Oriented typeⅠ/Ⅱcollagen scaffolds and non-oriented typeⅠ/Ⅱcollagen scaffolds were seeded with rabbit chondrocytes and the growth of chondrocytes were observed with scanning electronic microscope 3 days later.Cellscaffold constructs were measured by MTTmethod to observe the growth of chondrocytes within 14 days.Mechanical properties of oriented and non-oriented scaffolds were determined by measurement of Young modulus and tensile strength on the 7th day and 14th day after co-cultured vitro.Resu lts Under the scanning electron microscope，the cells adhered to both oriented scaffolds and non-oriented scaffolds grew well on the third day after co-culture.The proliferation was statistically significantly higher in the oriented typeⅠ/Ⅱcollagen scaffold group than in the non-oriented scaffold group from day 5 to day 11（P＜0.05）.The compressivemodulus and tensile strength of oriented scaffoldswere higher than thatof a typical non-oriented scaffold（P＜0.05）.Conclusion The results indicate that composite typeⅠ/Ⅱcollagen scaffolds can promote cell proliferation within certain time periods and enhance the biomechanical property of tissue-engineered cartilage in vitro and thus represent a promisingmaterial to tissue engineering cartilage.

TypeⅠ/Ⅱcollagen scaffold；Oriented scaffold；Chondrocytes；Cartilage tissue engineering；Biomechanical property

R684.3；R318.01

A

1673-7210（2016）05（c）-0025-06

2016-02-02本文編輯：張瑜杰）

武裝警察部隊總醫(yī)院課題（WZ2012016）。

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