不同來源芍藥的質(zhì)量分析

張宏蓮，孫輯凱，張梅娟，董巍，沙偉，朱巍巍

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161000；2.齊齊哈爾大學(xué)，黑龍江齊齊哈爾161000

不同來源芍藥的質(zhì)量分析

張宏蓮1，孫輯凱1，張梅娟2，董巍1，沙偉2，朱巍巍2

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾161000；2.齊齊哈爾大學(xué)，黑龍江齊齊哈爾161000

目的通過實(shí)驗(yàn)，檢視野生、市售及藥用植物園栽培赤芍中所含成分的數(shù)目，測定指標(biāo)成分芍藥苷含量，作為評價(jià)栽培赤芍質(zhì)量優(yōu)劣的科學(xué)依據(jù)。方法采用薄層色譜法，將對照溶液及供試液點(diǎn)樣10 μL于GF254板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，254 nm下檢視；采用HPLC法，條件是采用Waters E2695色譜系統(tǒng)，Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱（250×9.4 mm，5 μm）；以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（50∶50）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長230 nm，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果在254 nm下檢視，野生、市售及藥用植物園栽培赤芍的TLC板明顯的熒光斑個(gè)數(shù)分別為6、11、10；芍藥苷的保留時(shí)間是5.078 min，野生、市售、栽培赤芍中芍藥苷的含量分別為6.6%、7.4%、7.0%。結(jié)論依據(jù)TLC檢視及HPLC結(jié)果可知，野生、市售及藥用植物園栽培赤芍所含化學(xué)成分的種類有顯著差異，不同來源的芍藥中芍藥苷的含量相近、相差不顯著。

芍藥；芍藥苷；薄層色譜法；質(zhì)量分析

芍藥科（Paeonia）植物世界上僅一屬（芍藥屬Paeontia L），約35種，原產(chǎn)于我國，栽培歷史悠久，其根供藥用亦有悠久的歷史，主產(chǎn)于內(nèi)蒙古、遼寧、河北、黑龍江、吉林、陜西、甘肅、山西等地。來源于芍藥根的中藥有赤芍、白芍兩種，雖然都源于同一種植物，但是它們各自的功能主治卻相差甚遠(yuǎn)，幾乎沒有相近之處[1-4]。2015年版《中國藥典》第一部正文部分收載赤芍為毛艮科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）或川赤芍（Paeonia veitchii Lynch）的干燥根，具有清熱涼血、散瘀止痛、斂陰止汗的功效[2-8]，而白芍則為芍藥的根經(jīng)水煮、曬干后的炮制品。

通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料可知，對赤芍化學(xué)成分及指標(biāo)成分芍藥苷定量的報(bào)道屢見不鮮。該單位藥用植物園從齊齊哈爾市周邊地區(qū)引種道地赤芍，在仿野生環(huán)境下對赤芍種子做催熟處理后，人工栽培兩年，采用TLC、HPLC法對其進(jìn)行成分比較及芍藥苷的定量檢測，與內(nèi)蒙古野生、產(chǎn)自山東的市售赤芍相比較，以初步評價(jià)栽培赤芍的質(zhì)量。

1　儀器與材料

儀器：Waters E2695高效液相色譜儀、自動薄層色譜儀。

試劑和材料：芍藥苷對照品、甲醇（默克化工技術(shù)有限公司）、磷酸二氫鉀、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇、甲酸、去離子水。實(shí)驗(yàn)樣品經(jīng)鑒定為赤芍的野生品、市售、栽培品的干燥根，編號分別為Y、S、C。

2　方法

2.1TLC檢查

2.1.1對照品溶液的制備取芍藥苷對照品，加乙醇制成2 mg/mL的溶液，以備TLC檢定用。

2.1.2供試品溶液的制備取三個(gè)赤芍樣品粉末0.5 g，加乙醇10 mL，超聲處理后過濾蒸干溶劑后，加乙醇2 mL，溶解，備用。

2.1.3TLC檢查吸取“2.1.1”、“2.1.2”項(xiàng)溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254板上，點(diǎn)樣10 μL于GF254板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，于254 nm下檢視。

2.2芍藥苷含量測定

2.2.1對照品溶液的制備精密稱取芍藥苷對照品適量，加甲醇制成0.464 42 mg/mL的溶液，備用。

2.2.2供試品溶液的制備分別精密稱取三種來源的赤芍樣品粉末約0.5 g，各兩份，見表1，精密加甲醇25 mL，浸泡4 h后超生處理，放冷，補(bǔ)齊失重，搖勻后過濾，取續(xù)濾液，備用。

表1　樣品稱量數(shù)據(jù)

2.2.3色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜條件Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱（250×9.4 mm，5 μm）；以甲醇-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（50∶50）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長230 nm。

2.2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)精密吸取取對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5針，計(jì)算RSD；測定溶液時(shí)，理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2.5含量測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

3　結(jié)果

3.1TLC檢視結(jié)果

從TLC結(jié)果可知，野生、市售及藥用植物園栽培赤芍均含有芍藥苷，Rf=2.8；此外，野生赤芍有4個(gè)顯著斑點(diǎn)、市售赤芍有5個(gè)。顯著斑點(diǎn)及藥用植物園栽培赤芍中有5個(gè)顯著斑點(diǎn)，成分種類數(shù)目相差不大。

圖1　TLC檢視結(jié)果

表3　樣品含量測定結(jié)果

3.2系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

對照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5針，理論塔板數(shù)均＞3 000，結(jié)果見表2。

3.3含量測定結(jié)果

含量測定實(shí)驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液分別進(jìn)樣2針，結(jié)果見表3。

表2　樣品系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

在同一測定條件下，野生、市售及藥用植物園栽培赤芍所含芍藥苷分別為1.8%、4.4%、6.5%，均符合相關(guān)法定標(biāo)準(zhǔn)要求，且藥用植物園栽培赤芍品種的含量最高。

4　結(jié)語

該實(shí)驗(yàn)通過TLC法檢查3種來源赤芍是否含有指標(biāo)成分芍藥苷，并通過HPC法進(jìn)行定量檢測，以初步判定藥用植物園栽培赤芍的品質(zhì)優(yōu)劣，為化學(xué)成分的進(jìn)一步檢定極其藥理活性的研究奠定基礎(chǔ)。2015年版《中國藥典》正文“赤芍”項(xiàng)下主要以芍藥苷為對照品對其進(jìn)行含量測定，限度是不低于1.8%，從該實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，此標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的下限略顯偏低，本課題組也會在以后的研究中向橫向擴(kuò)展研究，以期建立更科學(xué)的赤芍質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]段文娟.赤芍的化學(xué)成分研究及炮制品中主要化學(xué)成分的含量測定[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2008.

[2]王鳳紅,王麗,侯慧卿,等.赤芍藥化學(xué)成分及抗腫瘤活性研究進(jìn)展[J].河北中醫(yī),2015,37(4):614-618.

[3]陸小華,馬驍,王建,等.赤芍的化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥,2015,46(4):595-602.

[4]楊媛媛,周剛,馬曉康,等.赤芍的研究進(jìn)展[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2008(1):67-69.

[5]俞敬波,章軍,王文全,等.赤芍野生品與栽培品4種化學(xué)成分含量的比較[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17(18):107-111.

[6]王薇.赤芍化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展[J].黑龍江科技信息,2015(17):109.

[7]胡媛，趙梓辰，楊昌林，等.野生赤芍和栽培芍藥的芍藥苷、苯甲酸含量測定[J].中藥與臨床,2014,5(6):3-5.

[8]李彥程，王玲燕，李瑞，等.赤芍乙酸乙酯部位化學(xué)成分的研究[J].中國中藥雜志,2016,41(12):2255-2260.

Analysis of Quality of Chinese Herbaceous Peony of Different Sources

ZHANG Hong-lian1,SUN Ji-kai1,ZHANG Mei-juan2,DONG Wei1,SHA Wei2,ZHU Wei-wei2
1.Qiqihar Medical College，Qiqihar,Heilongjiang Province,161000 China；2.Qiqihar University，Qiqihar,Heilongjiang Province, 161000 China

Objective To measure the peoniflorin content of marker substances as a scientific basis of evaluating the cultivated red paeonia quality degree by experiment and viewing the content number in the in the wild,commercially available and cultivated red paeonia in the medicinal botanical garden.Methods The 10 μL contrast solution and test solution samples were put on the GF254 plate by the thin-layer chromatography,and viewed under 254 nm with chloroform-ethyl acetate-methanol-formic acid(40:5:10:0.2)as the agent,HPLC method and Waters E2695 chromatographic system were adopted,chromatography was performed on Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 column(250×9.4 mm,5 μm),with methanol-0.05 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution(50:50)as the mobile phase at a flow rate of 1.0 ml·min-1. The absorbance was monitored at 230 nm.The injection volume was 10 μL.Results Under the view of 254 nm,the obvious fluorescent spot numbers on TLC plate in the wild,commercially available and the cultivated red paeonia in the medicinal botanical garden were respectively 6,11 and 10,and the retention time of paeoniflorin was 5.078 min,and the content of paeoniflorin in the wild,commercially available and cultivated red paeonia was respectively 6.6%,7.4%and 7.0%.Conclusion The TLC view and HPLC results show that there are obvious differences in the chemical component type in the wild,commercially available and cultivated red paeonia in the medicinal botanical garden,and the content of paeoniflorin in the Chinese herbaceous peony of different sources is similar and the difference is not obvious.

Paeonia；Paeoniflorin；Thin layer chromatography；Quality analysis

R914.1

A

1672-5654（2016）11（a）-0042-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.31.042

齊齊哈爾市科技局農(nóng)業(yè)攻關(guān)項(xiàng)目《野生赤芍種子繁育及發(fā)育機(jī)理研究》，項(xiàng)目編號：NYGG-201404。

張宏蓮(1984.10-)，女，江蘇沛縣人，碩士，中級，研究方向：天然藥物化學(xué)成分分析。

孫輯凱，男，碩士研究生，高級實(shí)驗(yàn)師，研究方向：中藥資源學(xué)，E-mail：zhanghonglian_2006@163.com。

（2016-08-02）