不同炮制方法對(duì)中藥延胡索中有效成分含量的影響

江國(guó)榮　禤雪梅　潘雪蓮　劉少文　何玲玲（.佛山市第一人民醫(yī)院（中山大學(xué)附屬佛山醫(yī)院）藥劑科佛山58000；.佛山市中醫(yī)院藥劑科佛山58000）

不同炮制方法對(duì)中藥延胡索中有效成分含量的影響

江國(guó)榮1禤雪梅1潘雪蓮1劉少文2何玲玲2（1.佛山市第一人民醫(yī)院（中山大學(xué)附屬佛山醫(yī)院）藥劑科佛山528000；2.佛山市中醫(yī)院藥劑科佛山528000）

目的：比較醋炙、醋煮、酒炙、醋烘等炮制方法對(duì)延胡索中有效成分含量的影響。方法：將延胡索生品分別經(jīng)醋炙、醋煮、醋烘、酒炙后，以水超聲法對(duì)不同炮制品提取，高效液相色譜法測(cè)定去氫紫堇堿、延胡索乙素成分的含量，乙腈：0.1％磷酸溶液=72∶28作為試驗(yàn)的流動(dòng)相，色譜柱AgilentC18色譜柱，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為282nm。結(jié)果：延胡索經(jīng)不同炮制后生物堿去氫紫堇堿含量均有所升高，醋烘、醋炙、酒炙延胡索中延胡索乙素的含量有所上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：高效液相色譜法測(cè)定中藥延胡索不同炮制品中的2種有效成分，操作步驟簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，根據(jù)藥材的治療需要，采用醋烘、醋炙、酒炙等炮制方法可以增加延胡索有效成分的含量。

延胡索 去氫紫堇堿 延胡索乙素 不同炮制 高效液相色譜法

延胡索（Corydalis Rhizoma）為多年生罌粟科草本植物延胡索（Corydalis yanhusuo W.T.Wang）的干燥塊莖[1]，因有活血、止痛、利氣的功效，臨床上多用于治療脘腹疼痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻[2]。生物堿是中藥延胡索中的主要有效成分，其中藥材中含有的大部分為結(jié)合態(tài)的生物堿，只有堿性較弱的成分以游離態(tài)的形式存在[3]。延胡索多以炮制后入藥治療疾病，醋煮、醋烘、醋炙、酒炙均為2015年版《中國(guó)藥典（一部）》收載的炮制延胡索飲片經(jīng)典方法[4]，但是國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)中對(duì)于不同炮制方法對(duì)延胡索的有效成分研究報(bào)道較少[5]，因此，本文采用了高效液相色譜法（HPLC），以延胡索主要的有效成分去氫紫堇堿、延胡索乙素為參考指標(biāo)，探討上述四種炮制方法對(duì)延胡索有效成分含量的影響，以期為優(yōu)化延胡索炮制工藝提供參考，實(shí)驗(yàn)研究步驟如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)儀器：日本島津1100高效液相色譜儀（主要包括紫外檢測(cè)系統(tǒng)、色譜工作站），電子分析天平（美國(guó)梅特勒天平公司，精密度0.0001g），CO2真空干燥箱（北京實(shí)驗(yàn)儀器公司），超聲提取儀器（上海生物科技有限公司）。

1.2實(shí)驗(yàn)藥材與實(shí)驗(yàn)試劑：延胡索生品藥材購(gòu)于本市中藥材公司（批號(hào)為120825）；延胡索乙素對(duì)照品（批號(hào)：20120323）、去氫紫堇堿對(duì)照品（批號(hào)：20120620）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品生物制品檢定所；陳醋選擇山西老陳醋，黃酒為即墨市生產(chǎn)，乙腈、甲醇溶液均為色譜純，水為三蒸水。

2　方法與結(jié)果

2.1延胡索不同炮制品炮制方法

2.1.1醋炙延胡索：將從中藥材公司購(gòu)買的同一批號(hào)的延胡索生品洗凈，晾干，20％的陳醋作為浸泡劑將生品浸泡，醋液被藥材完全吸盡后，生品文火上炒干。

2.1.2醋煮延胡索：20％陳醋將延胡索生品浸潤(rùn)，浸潤(rùn)時(shí)間以醋液被生品完全吸盡為準(zhǔn)，后武火將浸潤(rùn)完成后的藥材藥液煮沸后，文火將溶液蒸煮，醋液吸收完全后置于CO2烘箱中進(jìn)行干燥。

2.1.3醋烘延胡索：延胡索生品適量，稱重后20％的陳醋進(jìn)行浸潤(rùn)，待藥材中的醋液被藥材吸盡后，置設(shè)定溫度為120℃的CO2烘箱中，烘烤40min，取出后在室溫下晾干。

2.1.4酒炙延胡索：中藥延胡索生品適量，20％的黃酒浸潤(rùn)待浸泡溶劑吸收完全后，文火將浸潤(rùn)生品炒干。

2.2色譜條件的選擇：AgilentC18（250mm×4.6mm，2.5μm）為實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的色譜柱，乙腈：0.1％磷酸溶液（三乙胺調(diào)節(jié)pH為5.2～5.4）=72∶28為流動(dòng)相，柱溫為室溫，檢測(cè)波長(zhǎng)為282nm，進(jìn)樣量為10μL，流速為1.0mL/min。延胡索乙素、去氫紫堇堿有較好的分離，按照延胡索乙素色譜峰進(jìn)行計(jì)算理論塔板數(shù)>3000。見(jiàn)圖1、圖2。

2.3供試品溶液的配制：取中藥延胡索生品及不同炮制品，精密稱定后粉碎機(jī)打成細(xì)粉，分別過(guò)40目篩后置于帶瓶塞的三角錐形瓶中，150mL水溶液定量，超聲30min，后靜置到室溫后將上層溶液濾過(guò)，按照上述步驟重復(fù)操作2次，合并3次超聲濾液后蒸干，殘?jiān)尤?0mL水溶解后加入濃氨水10mL，乙醚溶液作為萃取劑連續(xù)萃取3次，每次30mL，合并3次萃取液后置于燒杯中，水浴鍋上蒸干，蒸干后的濃縮品適量，精密稱定，置于5mL容量瓶中，甲醇溶液溶解后定溶至刻度，得供試品溶液。

2.4對(duì)照品溶液的制備：稱取延胡索乙素、去氫紫堇堿對(duì)照品適量，精密稱定，置于10mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，即得對(duì)照品溶液。

2.5線性關(guān)系考察：精密吸取延胡索乙素、去氫紫堇堿對(duì)照品0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.0mL置于2mL容量瓶中，甲醇溶液定溶至刻度，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，以色譜峰面積作為縱坐標(biāo)，對(duì)照品的含量作為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸處理，得到線性回歸方程分別為：Y=4.12×105-2.52×103（r=0.9998）（去氫紫堇堿在0.345～3.315μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好）；Y=2.43×105-3.12×104（r= 0.9997）（延胡索乙素在0.190～1.359μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好）。

2.6精密度考察：吸取延胡索乙素對(duì)照品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，峰面積的RSD值為0.21％，表明高效液相色譜儀的精密度好。

2.7穩(wěn)定性考察：取“2.3”項(xiàng)下的供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24h按照色譜條件進(jìn)樣10μL，測(cè)定峰面積值，其RSD值為1.95％，表明供試品溶液在24h內(nèi)有較好的穩(wěn)定性。

2.8重復(fù)性考察：取同一批延胡索樣品分別重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定延胡索乙素的含量，其RSD值為1.75％，表明該方法的重復(fù)性較好。

2.9加樣回收率試驗(yàn)：取5份已知含量的樣品，延胡索乙素含量為測(cè)定參照，將適量的延胡索乙素對(duì)照品溶液加入5份樣品，按照色譜條件進(jìn)樣，以回歸方程進(jìn)行樣品含量的測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，見(jiàn)表1。

表1　延胡索乙素加樣回收率

2.10樣品含量測(cè)定：各炮制品供試品溶液，按照“2.2”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，按照線性回歸方程對(duì)含量進(jìn)行計(jì)算，見(jiàn)表2。

表2　樣品中延胡索乙素、去氫紫堇堿的含量

3　小結(jié)

中藥延胡索作為臨床上經(jīng)常用于治療疾病的藥物，多數(shù)均以炮制品的形式應(yīng)用于臨床，經(jīng)酒炙后的延胡索有效成分生物堿會(huì)生成易溶性的醋酸鹽，提高了溶出率[6]。從上述表格中的數(shù)據(jù)可見(jiàn)，延胡索生品與延胡索炮制后的水煎液含有的成分性質(zhì)完全一致，生物堿的含量經(jīng)醋炙后的延胡索水煎液中含量最高，而不經(jīng)過(guò)任何炮制的延胡索生物堿的含量最低，酒炙品的含量居中。治療疾病的有效成分的增加可以增強(qiáng)藥材在臨床上的療效，進(jìn)而證實(shí)延胡索經(jīng)醋炙后治療效果的有效性。

由上述可知，幾種延胡索炮制品經(jīng)比較，延胡索的醋炙品以及酒炙品是臨床上最為常用的藥材炮制品種，本次實(shí)驗(yàn)中采用的超聲提取方法對(duì)延胡索各種炮制品，提取方式簡(jiǎn)單，容易操作，另HPLC法在檢測(cè)延胡索乙素、去氫紫堇堿時(shí)精密度高、重復(fù)性好，醋炙、酒炙、醋烘等炮制方法均可以增加延胡索有效成分的含量。

[1]徐捷.不同炮制方法對(duì)延胡索有效成分影響研究[J].河北醫(yī)藥，2013，35（3）：454-456.

[2]沈志沖.元胡不同炮制方法對(duì)延胡索乙素含量的影響[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，38（21）：4454-4457.

[3]鄭弘，許紅瑋.延胡索不同炮制方法的薄層色譜鑒別對(duì)比研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（5）：695-696.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：121-125.

[5]劉傳統(tǒng)，祁紅.HPLC法測(cè)定益氣養(yǎng)陰合劑中厚樸酚和延胡索乙素的含量[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2015，36（1）：59-61.

[6]李榮，蔡青青，牛彥兵，等.熟延胡索飲片藥理作用的對(duì)比研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（19）：133-137.

·藥物與臨床·

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1672-8351（2016）11-0005-02