奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的應(yīng)用

王智聰，馮炫，余笑波，沙躍兵

（浙江省計(jì)量科學(xué)研究院，浙江杭州310018）

奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的應(yīng)用

王智聰，馮炫，余笑波，沙躍兵

（浙江省計(jì)量科學(xué)研究院，浙江杭州310018）

建立了奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量準(zhǔn)確測(cè)定的方法，以奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為質(zhì)控品進(jìn)行方法學(xué)的考察與評(píng)價(jià)。奶粉樣品經(jīng)低溫-酸沉淀/固相萃取凈化，采用離子色譜-電導(dǎo)檢測(cè)分析。結(jié)果表明，亞硝酸鹽（以NO2-計(jì)）和硝酸鹽（以NO3-計(jì)）分別在0.010 μg/mL～0.500 μg/mL和0.100 μg/mL～5.00 μg/mL的范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.99，在奶粉中的最低定量限分別為0.400/4.00mg/kg（NO2-/NO3-）；亞硝酸鹽和硝酸鹽測(cè)定方法中的基質(zhì)效應(yīng)分別為95.6%/99.6%（NO2-/NO3-）；基于基質(zhì)效應(yīng)的加標(biāo)回收率分別為90.3%/87.1%（NO2-/NO3-）；以奶粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行方法學(xué)考察，方法的準(zhǔn)確性分別為90.5%/89.9%（NO2-/NO3-），精密度（RSD）分別為2.1%/0.7%（NO2-/ NO3-）。奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為質(zhì)控品，可以用于分析測(cè)試方法的評(píng)價(jià)、實(shí)驗(yàn)室結(jié)果的比對(duì)，以及相關(guān)行業(yè)奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量監(jiān)測(cè)量值傳遞體系的建立，為奶粉的質(zhì)量控制和安全評(píng)價(jià)提供保障。

奶粉；亞硝酸鹽；硝酸鹽；奶粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

亞硝酸鹽可以在生物體內(nèi)與胺類物質(zhì)生成致癌性極強(qiáng)的亞硝基化合物，硝酸鹽在體內(nèi)能夠還原為亞硝酸鹽，并且還可以內(nèi)源性形成亞硝胺類物質(zhì)，從而威脅人體健康［1-3］。在我國(guó)，1999～2008年公開報(bào)道的亞硝酸鹽食物中毒案例有237起，中毒3500人，其中死亡35人［4］。奶粉中含有多種營(yíng)養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、礦物質(zhì)和多種營(yíng)養(yǎng)添加劑等，技術(shù)要求必須符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)乳粉》（GB 19644-2010）的規(guī)定。在奶粉的生產(chǎn)、加工、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸及使用過程中，可能會(huì)引入或產(chǎn)生微量的亞硝酸鹽和硝酸鹽。我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》（GB 2762-2012）中規(guī)定了相關(guān)污染物的限量，其中，乳粉中亞硝酸鹽的最大允許濃度為2.00 mg/kg（以NaNO2計(jì)），嬰幼兒配方食品中硝酸鹽的最大允許濃度為100 mg/kg（以NaNO3計(jì)）。

乳品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法是《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》（GB 5009.33-2010），在第二法“分光光度法”和第三法“乳及乳制品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定”中，亞硝酸鹽采用基于重氮-偶合反應(yīng)機(jī)理的分光光度法測(cè)定，而硝酸鹽均采用鎘柱還原為亞硝酸鹽后間接測(cè)定。其中，鎘柱還原法操作復(fù)雜繁瑣，亞硝酸鹽和硝酸鹽需分步測(cè)定，而且測(cè)定干擾因素多，專屬性差，重現(xiàn)性不好，不適宜大批量樣品的檢測(cè)；同時(shí)，鎘對(duì)試驗(yàn)操作人員具有潛在的危害，對(duì)環(huán)境也容易造成污染。第一法“離子色譜法”樣品前處理簡(jiǎn)便、快速，且容易批量制備，文獻(xiàn)中多采用離子色譜法進(jìn)行乳制品中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的測(cè)定［5-11］。但是該方法中亞硝酸鹽和硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)曲線的基質(zhì)和測(cè)試樣品不一致，并且奶粉中亞硝酸鹽的含量較低，由于奶粉基質(zhì)的干擾較大，對(duì)樣品前處理和色譜分離提出了較大的挑戰(zhàn)。另外，由于缺乏亞硝酸鹽和硝酸鹽的奶粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，不同的分析測(cè)試方法和不同實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果很難進(jìn)行比對(duì)。最近，李筱翠等［12］報(bào)道了脫脂乳粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備技術(shù)，可望用于乳粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的研究。本文改進(jìn)了國(guó)標(biāo)第一法“離子色譜法”，并考察了基質(zhì)效應(yīng)對(duì)奶粉樣品測(cè)定的影響，同時(shí)采用具有量值準(zhǔn)確的奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為質(zhì)控品，提高了分析過程的有效性和測(cè)試結(jié)果的可靠性。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

乙酸（分析純）：購(gòu)自Sigma-Aldrich公司；試驗(yàn)用水為Milli-Q制備的超純水；亞硝酸鹽水溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（以NO2-計(jì)，1 000 μg/mL，Urel=2%，k=2）、硝酸鹽水溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（以NO3-計(jì)，1 000 μg/mL，Urel=1%，k= 2）、奶粉中亞硝酸鹽（以NO2-計(jì)，17.0 mg/kg）和硝酸鹽（以NO3-計(jì)，168 mg/kg）成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：均由浙江省計(jì)量科學(xué)研究院提供；C18固相萃取柱：購(gòu)自美國(guó)Waters公司；奶粉樣品：購(gòu)自當(dāng)?shù)爻小?/p>

1.2儀器與設(shè)備

ICS-2100型離子色譜系統(tǒng)，配淋洗液在線發(fā)生裝置、ASRS型抑制器、電導(dǎo)檢測(cè)器和50 μL定量環(huán)：美國(guó)戴安公司；SQP型精密電子天平：瑞士梅特勒公司；2-16KL型冷凍離心機(jī)：美國(guó)Sigma公司；Milli-Q超純水系統(tǒng)：美國(guó)Millipore公司；KQ-100DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山超聲儀器有限公司；電子連續(xù)等分移液器：德國(guó)Brand公司。

1.3方法

1.3.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確移取亞硝酸根離子（NO2-）標(biāo)準(zhǔn)溶液2.00 mL和硝酸根離子（NO3-）標(biāo)準(zhǔn)溶液20.0 mL于1 000 mL容量瓶中，用含0.06%（體積分?jǐn)?shù)）的乙酸水溶液稀釋至刻度，配成濃度分別為2.00/20.0 μg/mL（NO2-/NO3-）的亞硝酸鹽和硝酸鹽混合標(biāo)準(zhǔn)使用液；再用含0.06%（體積分?jǐn)?shù)）的乙酸水溶液系列稀釋，配成含亞硝酸根/硝酸根離子濃度為分別為0.010/0.100、0.020/0.200、0.040/0.400、0.060/0.600、0.080/0.800、0.100/1.00、0.150/ 1.50、0.200/2.00、0.500/5.00 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.2供試樣品的制備

稱取奶粉試樣1.25 g（精確至0.01 g），置于50 mL離心管中，加超純水40.0 mL，搖勻，超聲30 min，加入3%乙酸水溶液1.00 mL，于4℃放置20 min，取出放置至室溫，再加10.0 mL超純水，搖勻，于9 000 r/min離心15 min。取上清液適量過C18柱（使用前依次用10.0 mL甲醇、15.0 mL超純水通過，靜置活化30 min），棄去前面5 mL，收集后面洗脫液待測(cè)。

1.3.3色譜條件

陰離子色譜分析柱為IonPac AS19（4×250 mm），保護(hù)柱為IonPac AG19（4×50 mm）；柱溫為30℃；電導(dǎo)檢測(cè)池溫度為35℃；進(jìn)樣體積為50 μL；淋洗液為氫氧化鉀溶液，由淋洗液自動(dòng)發(fā)生器在線產(chǎn)生；流速為1.3 mL/min；梯度程序?yàn)? mmol/L保持33 min，1 min上升至50 mmol，50 mmol/L保持5 min，1 min降至5 mmol，5 mmol/L保持5 min。

2　結(jié)果與討論

2.1樣品前處理方法的優(yōu)化

奶粉基體成分復(fù)雜，除含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物之外，還添加多種食品添加劑，如不同種類的功能成分維生素類、植物油類、核苷酸類、氨基酸類、糖類和無機(jī)鹽類等。去除蛋白質(zhì)及脂肪常用的方法有無機(jī)鹽沉淀法、酸沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法、低溫沉淀法、透析法和固相萃取法等。無機(jī)鹽沉淀法如醋酸鋅/亞鐵氰化鉀、鎢酸鈉/硫酸、乙酸鉛/三氯乙酸等方法，會(huì)引人大量的金屬離子，從而干擾結(jié)果的測(cè)定；有機(jī)溶劑沉淀法不利于無機(jī)離子從奶粉樣品中析出，高含量的有機(jī)溶劑也不利于后續(xù)固相萃取進(jìn)一步凈化；而低溫-酸沉淀結(jié)合固相萃取法操作簡(jiǎn)單、回收率高，國(guó)標(biāo)GB 5009.33-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》第一法“離子色譜法”即采用這樣的樣品前處理方法。但國(guó)標(biāo)方法中采用容量瓶進(jìn)行沉淀，操作繁瑣、不易批量進(jìn)行、效率低；同時(shí)，沉淀后采用濾紙過濾的方法除去顆粒沉淀，濾液再進(jìn)行固相萃取時(shí)容易堵塞固相萃取柱。本文改進(jìn)了國(guó)標(biāo)方法，采用離心管作為沉淀器皿，所需液體體積采用電子連續(xù)等分移液器進(jìn)行準(zhǔn)確吸??；同時(shí)，沉淀后樣品直接離心，取上清液即可進(jìn)行固相萃取，改進(jìn)后的方法簡(jiǎn)便易行、效率高、批次重復(fù)性好，適于大批量樣品測(cè)定。

2.2色譜條件的優(yōu)化

試驗(yàn)比較了不同濃度氫氧化鉀洗脫的情況，如20、15、10 mmol/L和5 mmol/L氫氧化鉀等度洗脫以及梯度洗脫的方式。采用高濃度的氫氧化鉀，亞硝酸根和硝酸根離子雖然洗脫較快，但與雜質(zhì)的分離度較差，如采用20 mmol/L氫氧化鉀，亞硝酸根離子與氯離子后面的雜質(zhì)不能基線分離；采用5 mmol/L氫氧化鉀等度洗脫，亞硝酸根和硝酸根離子均與雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)基線分離，含量較高的氯離子對(duì)測(cè)定也無影響，如圖1所示。由于奶粉基質(zhì)組成復(fù)雜，亞硝酸根和硝酸根離子洗脫之后還需要高濃度的氫氧化鉀清洗色譜柱，從圖1也可看出，在清洗階段有大量雜質(zhì)洗脫出來。

圖1　奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽的離子色譜分析譜圖Fig.1　Ion chromatogram of nitrite and nitrate in milk powder sample

2.3工作曲線、檢出限和最低定量限

按1.3.1節(jié)所述試驗(yàn)方法配制亞硝酸根和硝酸根離子的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，以峰面積（μS·min）為縱坐標(biāo)，亞硝酸根或硝酸根離子的濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性分析，如圖2所示。

圖2　亞硝酸根和硝酸根離子的線性標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2　Calibration curves of nitrite and natrate

由圖2可知，回歸方程分別為Y=0.306 52X+ 0.003 21和Y=2.713 04X+0.016 82，相關(guān)系數(shù)（r）分別為0.999 62和0.999 87。亞硝酸根和硝酸根離子的線性范圍分別是0.010 μg/mL~0.500 μg/mL和0.100 μg/mL~ 5.00 μg/mL。以3倍信噪比計(jì)算檢出限，亞硝酸根和硝酸根離子的檢出限分別為0.005 μg/mL和0.009 μg/mL，對(duì)應(yīng)奶粉的檢出限分別為0.200 mg/kg和0.36 mg/kg。

國(guó)標(biāo)GB 5009.33-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》第一法“離子色譜法”給出奶粉中亞硝酸鹽（以NO2-計(jì)）和硝酸鹽（以NO3-計(jì)）的檢出限分別為0.200 mg/kg和0.400 mg/kg，國(guó)標(biāo)方法中對(duì)亞硝酸根和硝酸根離子的曲線擬合，采用通過原點(diǎn)的線性擬合方式，標(biāo)準(zhǔn)曲線中除零點(diǎn)之外的最低點(diǎn)分別為0.020 μg/mL和0.200 μg/mL。由于國(guó)標(biāo)中沒有給出最低定量限（LOQ），如以零計(jì)算，顯然不合理，因?yàn)樽畹投肯薏豢赡艿陀跈z出限；如以標(biāo)準(zhǔn)曲線中非零的最低點(diǎn)為最低定量限，對(duì)亞硝酸根和硝酸根離子，在奶粉中則分別為0.800 mg/kg和8.00 mg/kg。但在奶粉樣品的實(shí)際測(cè)定過程中，通常遇到奶粉中亞硝酸根離子的含量小于0.800 mg/kg以及硝酸根離子的含量小于8.00 mg/kg的情況，這樣就很難給出實(shí)際測(cè)定值，否則，則是最低定量限外推計(jì)算得到的濃度。本文在國(guó)標(biāo)方法的基礎(chǔ)上作了改進(jìn)，在標(biāo)準(zhǔn)曲線下線增加一個(gè)濃度點(diǎn)0.010/0.100 μg/mL（NO2-/NO3-），這樣，以此點(diǎn)為最低定量限，對(duì)應(yīng)奶粉中亞硝酸根和硝酸根離子的最低定量限分別為0.400 mg/kg和4.00 mg/kg。

2.4基質(zhì)效應(yīng)

在國(guó)標(biāo)GB 5009.33-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》第一法“離子色譜法”中，亞硝酸鹽和硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)工作溶液用水進(jìn)行系列稀釋后直接測(cè)定，并通過該標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣品的含量；在奶粉樣品的前處理方法中，采用乙酸低溫沉淀蛋白的方法去除蛋白質(zhì)等。由于在奶粉樣品的前處理過程中添加了乙酸，以及由于奶粉基質(zhì)的影響，待測(cè)奶粉樣品與標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液的基質(zhì)不一致，在電導(dǎo)檢測(cè)中造成信號(hào)響應(yīng)的差異，即產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。為評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng)的影響，分別用超純水和含0.06%（體積分?jǐn)?shù)）的乙酸水溶液稀釋亞硝酸鹽和硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制低濃度（0.050/0.500 μg/mL，NO2-/NO3-）和高濃度（0.400/4.00 μg/mL，NO2-/NO3-）的混合溶液，進(jìn)行離子色譜分析并比較峰面積。對(duì)亞硝酸根離子，在低濃度和高濃度水平，基質(zhì)效應(yīng)分別為94.5%和96.6%，平均值為95.6%；對(duì)硝酸根離子，在低濃度和高濃度水平，基質(zhì)效應(yīng)分別為99.3%和99.8%，平均值為99.6%。可見，對(duì)亞硝酸根離子，基質(zhì)效應(yīng)影響比較大。究其原因，雖然亞硝酸根和雜質(zhì)實(shí)現(xiàn)基線分離，但是乙酸峰拖尾對(duì)亞硝酸根的電導(dǎo)檢測(cè)造成影響；相比而言，硝酸根的保留時(shí)間較大，乙酸峰對(duì)其影響也較小，其基質(zhì)效應(yīng)較小。文獻(xiàn)中對(duì)奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的測(cè)定均采用水配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液［6-11］，基于離子色譜-電導(dǎo)檢測(cè)法中測(cè)定亞硝酸鹽的基質(zhì)效應(yīng)，在奶粉樣品測(cè)定中造成亞硝酸鹽的含量偏低。因此，為了矯正基質(zhì)效應(yīng)的影響，配制標(biāo)準(zhǔn)工作溶液應(yīng)該采用含0.06%（體積分?jǐn)?shù)）的乙酸水溶液進(jìn)行稀釋。

2.5基于基質(zhì)效應(yīng)的加標(biāo)回收率

稱取奶粉樣品1.25 g，加入適量的亞硝酸根和硝酸根離子標(biāo)準(zhǔn)溶液，再加入適量超純水使得總體積為40 mL，其余步驟按1.3.2節(jié)進(jìn)行樣品的前處理，每個(gè)試樣平行制備3份，按試驗(yàn)方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1　奶粉中亞硝酸根和硝酸根離子的加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果（n=3）Table 1　Recoveries of nitrite and nitrate in milk powder（n=3）

由表1可以看出，添加2種不同濃度水平的亞硝酸根和硝酸根離子，平均加標(biāo)回收率分別為90.3%和87.1%。

2.6方法準(zhǔn)確性和精密度

稱取奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1.25 g，按照1.3.2節(jié)所述方法進(jìn)行預(yù)處理，平行制備6份，按照1.3.3節(jié)色譜方法進(jìn)行測(cè)定分析，結(jié)果如表2所示，其中準(zhǔn)確性為6次測(cè)定的平均值與標(biāo)準(zhǔn)值比值的百分含量，精密度為6次測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

表2　奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)測(cè)試方法的準(zhǔn)確性和精密度Table 2　Accuracy and precision of matrix reference material of nitrite and nitrate in milk powder

在奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道中［6-11］，有些沒有進(jìn)行方法準(zhǔn)確性的測(cè)定，有些是利用加標(biāo)回收的方法進(jìn)行評(píng)估，但是，加標(biāo)回收后測(cè)定的濃度并不能真實(shí)地反映奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽的含量，一方面是涉及到奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽的絕對(duì)提取效率和加標(biāo)部分的回收率；另一方面是在測(cè)定方法中，由于標(biāo)準(zhǔn)曲線和奶粉基質(zhì)的差異，產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。因此，需要亞硝酸鹽和硝酸鹽含量準(zhǔn)確的奶粉基質(zhì)樣品進(jìn)行方法準(zhǔn)確性的評(píng)價(jià)。本試驗(yàn)中采用的奶粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中亞硝酸鹽和硝酸鹽的含量是經(jīng)過準(zhǔn)確定值的，具有量值準(zhǔn)確和可溯源的特點(diǎn)。從表2可以看出，本文建立的方法精密度較好，準(zhǔn)確性測(cè)定結(jié)果偏低，主要是由于奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽的回收率偏低，但與回收率測(cè)定結(jié)果一致。另外，統(tǒng)計(jì)分析相關(guān)奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量測(cè)定的文獻(xiàn)，其中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量測(cè)定結(jié)果差異較大，由于樣品前處理和分析測(cè)試方法不同，方法準(zhǔn)確性難以評(píng)估，對(duì)不同實(shí)驗(yàn)室測(cè)定的結(jié)果也很難進(jìn)行比對(duì)分析。但是，如果利用奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為質(zhì)控品進(jìn)行方法準(zhǔn)確性的評(píng)估，即使不同實(shí)驗(yàn)室采用不同的分析測(cè)試方法，或不同實(shí)驗(yàn)室采用相同的測(cè)試方法都可以進(jìn)行測(cè)試結(jié)果的比對(duì)。同時(shí)，利用奶粉基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可以確保奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的測(cè)量結(jié)果具有溯源性、可比性和準(zhǔn)確性。

2.7奶粉樣品的測(cè)定

對(duì)當(dāng)?shù)爻兴?gòu)的6種不同品牌的奶粉樣品進(jìn)行亞硝酸鹽和硝酸鹽含量的篩查，結(jié)果見表3。

由表3可以看出，6種奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽的含量均小于國(guó)標(biāo)GB 2762-2012《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中污染物限量》中規(guī)定的限值（2.00 mg/kg，以NaNO2計(jì)，或1.30 mg/kg，以NO2-計(jì)；100 mg/kg，以NaNO3計(jì)，或73.0 mg/kg，以NO3-計(jì)），其中一種品牌的奶粉未檢出亞硝酸鹽和硝酸鹽。對(duì)亞硝酸根離子，其中一種品牌奶粉的含量小于最低定量限（0.400 mg/kg），一種品牌奶粉的含量大于0.800 mg/kg，3種品牌奶粉的含量介于0.400 mg/kg～0.800 mg/kg之間；對(duì)硝酸根離子，其中一種品牌奶粉的含量小于最低定量限（4.00 mg/kg），一種品牌奶粉的含量大于8.00 mg/kg，3種品牌奶粉的含量介于4.00 mg/kg～8.00 mg/kg之間。同時(shí)也說明，如果采用國(guó)標(biāo)GB 5009.33-2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測(cè)定》方法（亞硝酸根和硝酸根離子的最低定量限分別為0.800 mg/kg和8.00 mg/kg），則本試驗(yàn)篩查的6種奶粉只有一種能夠匯報(bào)測(cè)定值，其他均小于最低定量限（＜LOQ）。鑒于亞硝酸鹽的強(qiáng)致毒性，其限量要求非常低，建立靈敏度高和準(zhǔn)確性好的檢測(cè)方法，對(duì)其產(chǎn)品質(zhì)量控制至關(guān)重要。

表3　奶粉樣品中亞硝酸鹽（以NO2-計(jì)）和硝酸鹽（以NO3-計(jì)）的含量（n=3，mg/kg）Table 3　Amounts of nitrite（count as NO2-）and nitrate（count as NO3-）in milk powder samples（n=3，mg/kg）

3　結(jié)論

本文建立了奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽含量測(cè)定的方法，在樣品前處理及定量分析中改進(jìn)了國(guó)標(biāo)方法，并且利用奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽成分分析基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為質(zhì)控品，用于樣品前處理過程及分析測(cè)試方法的可靠性和準(zhǔn)確性評(píng)估。同時(shí)，本文所建立的方法及與基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配合使用，可以確保測(cè)試結(jié)果的溯源性、可比性和準(zhǔn)確性，有助于生產(chǎn)企業(yè)、檢測(cè)及執(zhí)法部門對(duì)奶粉中亞硝酸鹽和硝酸鹽的含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并在相關(guān)行業(yè)建立相應(yīng)的量值傳遞體系，統(tǒng)一計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)保障食品安全具有重大意義。

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The Application of Matrix Reference Material of Nitrite and Nitrate in Milk Powder

WANG Zhi-cong，F(xiàn)ENG Xuan，YU Xiao-bo，SHA Yue-bing
（Zhejiang Province Institute of Metrology，Hangzhou 310018，Zhejiang，China）

An accurate method was developed for the analysis of nitrite and nitrate in milk powder，which using matrix reference material as quality control tool to evaluate the analytical method.Milk powder sample was sequence cleaned by low temperature-acid precipitation and sold phase extraction，and then analyzed by ion chromatography-conductivity detector.The results showed that nitrite and nitrate displayed good linear relationships over the range of 0.010 μg/mL-0.500 μg/mL（NO2-）and 0.100 μg/mL-5.00 μg/mL（NO3-），with correlation coefficients greater than 0.99.The quantitation limits of nitrite and nitrate in milk powder were 0.400 mg/kg and 4.00 mg/kg.The matrix effects of the method for nitrite and nitrate were 95.6%and 99.6%，and the addition recoveries based on matrix effect were 90.3%and 87.1%separately.The accuracies and precisions of the method were 90.5%/89.9%（NO2-/NO3-）and 2.1%/0.7%（NO2-/NO3-）when validated by milk powder matrix reference material.Also，the matrix reference material of nitrite and nitrate in milk powder can be used as quality control tool to evaluate the analytical method，to compare results among labs，to establish the value transferable system for nitrite and nitrate determination and monitor in milk powder industries，and to provide guarantee for quality control and safety evaluation of milk powder.

milk powder；nitrite；nitrate；milk powder matrix reference material

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.21.029

浙江省質(zhì)監(jiān)科研計(jì)劃項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)資助（20140210）

王智聰（1977—），男（漢），博士，研究方向：化學(xué)分析與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制。

2015-12-18