化學發(fā)光酶免疫分析法及酶聯(lián)免疫吸附法檢測抗-丙型肝炎病毒的對比研究*

辜 彥，王裕圯

(江蘇省灌南縣人民醫(yī)院檢驗科，江蘇連云港 222500)

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·臨床研究·

化學發(fā)光酶免疫分析法及酶聯(lián)免疫吸附法檢測抗-丙型肝炎病毒的對比研究*

辜 彥，王裕圯

(江蘇省灌南縣人民醫(yī)院檢驗科，江蘇連云港 222500)

目的 探討化學發(fā)光酶免疫分析法和酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測丙型肝炎病毒(HCV)抗體的效果。方法 選取2015年1～12月于該院治療的150例丙型肝炎患者，空腹抽取血液標本，分離血清后，采用2種方法檢測HCV相關(guān)抗體的5種丙型肝炎病毒標志物，并對檢出率及敏感性進行比較。結(jié)果 化學發(fā)光酶免疫分析法檢出陽性率(96.0%)高于ELISA法(91.3%)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，2種方法的總符合率達94.0%?；瘜W發(fā)光酶免疫分析法對AMA-M2抗體檢測陽性率為83.3%，3E抗體為81.9%，SP100抗體為43.8%，PML抗體為59.7%，GP210抗體為38.2%；ELISA法檢測AMA-M2抗體陽性率為64.2%，3E抗體為44.5%，SP100抗體為24.8%，PML抗體為35.0%，抗GP210抗體為26.3%。2種方法比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論 2種方法均能有效檢出丙型肝炎患者，化學發(fā)光酶免疫分析法檢出率更高，但仍存在漏檢，應(yīng)加強實驗室管理，盡可能提高診斷率。

化學發(fā)光酶免疫分析法； 酶聯(lián)免疫吸附法； 抗-丙型肝炎病毒； 對比研究

丙型肝炎病毒(HCV)是單股線性正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科丙肝病毒屬，傳播途徑一般為血液傳播，易出現(xiàn)急性丙型肝炎，臨床表現(xiàn)為惡心、右上腹疼痛等身體不適癥狀，伴有深色尿和黃疸[1-2]。多數(shù)HCV感染者在急性期癥狀消失后轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿窝祝匝逯胁《綬NA持續(xù)存在為特點，且易發(fā)展為肌纖維化和肝硬化，而肝硬化患者有可能發(fā)展為肝癌[3]。HCV檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、化學發(fā)光酶免疫分析法、核酸擴增試驗法等，由于ELISA具有較強的特異性與敏感性，臨床檢測最常用的是ELISA試劑盒[4]。化學發(fā)光技術(shù)近年來在病毒檢測領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，且在丙型肝炎病毒的檢測具有簡便、快速等優(yōu)點[5-6]?，F(xiàn)比較化學發(fā)光酶免疫分析法和ELISA法檢測HCV病毒相關(guān)抗體標志物的檢出率和敏感性。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～12月該院治療的150例丙型肝炎患者，男65例，女85例，年齡22～68歲，平均年齡為(46.35±12.48)歲。納入標準：經(jīng)病理檢測確診為丙型肝炎，年齡20～70歲；均排除其他傳染性疾病或者肝臟器質(zhì)性病變，血清標本采集符合要求；臨床資料完整；所有患者均知情同意。

1.2 方法 所有患者7：00～8：00時抽取空腹靜脈血5 mL，血標本加入肝素鈉抗凝，3 000 r/min離心15 min，分離血清，待檢測。(1)ELISA法：將標本嚴格按照試劑盒說明書進行操作，每個測試微孔板都設(shè)置陰性對照、陽性對照、空白對照。臨界值=陰性標本平均吸光度值+2×標準差。如果所測血清值大于或等于臨界值，則判定為陽性。(2)化學發(fā)光酶免疫分析：將標本按照試劑盒步驟進行檢測，并進行陽性判定。

1.3 儀器與試劑 使用芬蘭W-K3酶標儀，采用ELISA試劑盒檢測丙肝病毒標志物(上海科華生物工程股份有限公司)。鄭州安圖生物工程有限公司的LUMO半自動分析儀，化學發(fā)光酶免疫分析檢測試劑盒為鄭州安圖生物工程有限公司提供。

1.4 觀察指標 記錄并比較2種方法對SP100抗體、3E抗體、GP210抗體、線粒體抗體M2亞型(AMA-M2抗體)、早幼粒細胞性白血病(PML)抗體的檢出情況。

1.5 統(tǒng)計學處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料使用t檢驗，計數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示，應(yīng)用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 2種方法檢測抗-HCV的結(jié)果比較 化學發(fā)光酶免疫分析法檢出抗-HCV陽性144例(96%)；ELISA法檢出抗-HCV陽性137例(91.3%)。2種方法比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，2種方法的總符合率達94.0%。見表1。

表1 2種方法檢測抗-HCV的結(jié)果比較(n)

2.2 2種方法檢測相關(guān)抗體的結(jié)果比較 化學發(fā)光酶免疫分析法檢測AMA-M2抗體陽性率為83.3%，3E抗體為81.9%，SP100抗體為43.8%，PML抗體為59.7%，GP210抗體為38.2%；ELISA法檢測AMA-M2抗體陽性率為64.2%，3E抗體為44.5%，SP100抗體為24.8%，PML抗體為35.0%，GP210抗體為26.3%。2種方法比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2種方法對相關(guān)抗體檢測結(jié)果比較[n(%)]

注：與ELISA法比較，*P<0.05。

3 討 論

丙型肝炎呈全球性流行，各國平均有3%的人群攜帶HCV，成年人居多，大約50.0%發(fā)展成慢性肝炎，其中約20.0%發(fā)展為肝硬化[7]。有研究報道，慢性丙型肝炎肝細胞損害的主要機制是HCV導致細胞發(fā)生異常的細胞凋亡[8-10]。目前探討慢性病毒性肝炎細胞凋亡機制中對Fas-Fas配體系統(tǒng)研究較多。Fas(CD95)是腫瘤壞死家族的一種膜蛋白質(zhì)，通過與其配體FasL(CD95L)介導細胞凋亡?；罨疌D8和Th1輔助T細胞是Fas的主要表達場所。Fas存在于多種細胞表面，但免疫組織化學分析檢測正常肝組織，發(fā)現(xiàn)無Fas表達或者表達程度很低[11-12]。相比之下，F(xiàn)as表達在慢性感染患者中顯著上調(diào)，尤其在浸潤淋巴細胞附近。HCV感染過程中發(fā)現(xiàn)CD95及其配體CD95L上調(diào)[13]。因此，肝組織中Fas抗原的表達水平變化，結(jié)合化學發(fā)光酶免疫分析法檢測抗體陽性率可作為丙型肝炎的輔助診斷及預(yù)后評估指標。

目前臨床診斷丙型肝炎最廣泛的方法是ELISA法，人工加樣，檢測快捷，操作簡單，檢出率較高。采用ELISA法進行復(fù)查，重復(fù)性較差，敏感性不高。同時試劑盒質(zhì)量、儀器校準、工藝差別等因素均能影響ELISA法檢測結(jié)果，穩(wěn)定性較差[8]。化學發(fā)光酶免疫分析是近年來在病毒檢測領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，其原理同ELISA法，但酶反應(yīng)底物為發(fā)光劑，酶免疫反應(yīng)物中酶的濃度決定了化學發(fā)光的強度，具有檢測敏感性高、檢測方便、價格低廉、標志物有效期長等特點[9]。本研究結(jié)果表明，化學發(fā)光酶免疫分析法檢測3E抗體、SP100抗體、AMA-M2體、GP210抗體、PML抗體陽性率，均高于ELISA法，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。但仍存在一定的漏檢率，原因為檢測過程中，工作曲線會隨時間發(fā)生一定的漂移，可能會對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，臨床使用該種方法檢測時，應(yīng)加以重視，確保檢測結(jié)果的準確性。

綜上所述，與ELISA法比較，化學發(fā)光酶免疫分析法在丙型肝炎中的應(yīng)用具有抗體檢測陽性率更高，相關(guān)抗體檢測的敏感性更好的優(yōu)勢，有助于丙型肝炎控制和患者治療，值得臨床推廣及應(yīng)用。

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江蘇省連云港市衛(wèi)生局科研課題(1337)。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.036

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1673-4130(2016)20-2891-02

2016-03-11

2016-05-25)