D型肉毒梭菌生物毒素防治青海田鼠的試驗(yàn)研究

李生慶 張西云 胡國(guó)元 范玉霞 劉生財(cái)李志寧 李秀平 王亭亭 黃 榮 劉懷新

(青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，西寧，810016)

D型肉毒梭菌生物毒素防治青海田鼠的試驗(yàn)研究

李生慶 張西云 胡國(guó)元 范玉霞 劉生財(cái)李志寧 李秀平 王亭亭 黃 榮 劉懷新

(青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，西寧，810016)

D型肉毒滅鼠劑；

(Qinghai Academy of Animal Sciences and Veterinary Medicine，Xining ，810016，China)

青藏高原草地具有涵養(yǎng)水源與全球氣候調(diào)節(jié)的重要作用，青藏高原草地應(yīng)以保護(hù)生態(tài)環(huán)境功能為主要目的，以生態(tài)保護(hù)發(fā)展戰(zhàn)略為優(yōu)先[1-2]。然而，近年來隨著生態(tài)環(huán)境的不斷改變，包括青海田鼠(Lasiopodomysfuscus)在內(nèi)的多種害鼠對(duì)高原牧區(qū)草地植被的破壞日趨嚴(yán)重。據(jù)統(tǒng)計(jì)，1987～1997年的10 a間鼠害面積的年增長(zhǎng)率達(dá)43.8%。據(jù)果洛州的實(shí)測(cè)資料，果洛州每公頃草地平均有青海田鼠1 450只，洞口4 500 個(gè)，對(duì)草地植被的破壞相當(dāng)嚴(yán)重[2]。

青海田鼠為嚙齒目(Rodentia)、倉(cāng)鼠科(Cricetidae)、毛足田鼠屬動(dòng)物，主要分布于青海、四川省，棲息于海拔3 700～ 4 800 m的草地中，為青藏高原特有種[3]。該鼠喜棲在疏叢型草地及灌叢草地等氣候溫和，土壤疏松，牧草比較豐茂，具有高山嵩草(Kobresiapygmaea)、蕨麻(Potentillaanserina)、白穎薹草(Carexduriuscularigescens)、香附子(Cyperusrotundus)的草地上，在沿河流域沼澤地帶呈連續(xù)性分布，而在山坡嵩草草甸、低矮小葉金露梅(Potentillaparvifolia)灌叢草甸中呈島狀分布[4]。該鼠在青海省內(nèi)主要分布于玉樹州、果洛州、海南州、海西州、海北州等地區(qū)[5]。

20世紀(jì)90年代，三江源地區(qū)的鼠害治理方法主要是化學(xué)和物理防治，即化學(xué)藥劑毒殺和人工捕殺?；瘜W(xué)藥物自60 年代以來，先后更換了三代藥物。早先使用的藥物毒性大，能引起動(dòng)物的二次中毒和積累中毒，從而破壞食物鏈[2]。鑒于此，青海省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院利用D型肉毒梭菌所產(chǎn)毒素成功研制了D型肉毒滅鼠劑。為了檢驗(yàn)該滅鼠制劑對(duì)青海田鼠的防治效果，我們進(jìn)行該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料

毒素：813批D型肉毒毒素，毒力1 000萬(wàn)MLD/mL(小白鼠靜注)

動(dòng)物：青海田鼠從剛察縣捕捉。

2 試驗(yàn)方法

2.1 灌胃半數(shù)致死量的測(cè)定

用霍恩氏法測(cè)定LD50，以每公斤體重設(shè)置21 500、46 400、100 000、215 000 MLD四個(gè)劑量組(毒素溶液配制成每毫升為1 075、2 300、5 000、10 750 MLD/mL)。每組灌服5只田鼠，以每20 g體重分別灌服430、930、2 000、4 300 MLD毒素量，喂燕麥和胡蘿卜，觀察5 d記錄死亡結(jié)果。

2.2 有選擇適口性的測(cè)定

取健康田鼠10只，平均體重28.2 g，不分雌雄，放入一鼠籠中，試驗(yàn)前喂胡蘿卜及燕麥。試驗(yàn)時(shí)取形狀大小相同的2個(gè)食盆，一個(gè)放含0.1% D型肉毒滅鼠劑的小麥，另一個(gè)食盆內(nèi)放無毒小麥(取常水10 mL加入100 g小麥中，反復(fù)攪拌，充分混勻后悶制24 h)，同時(shí)放入籠子中央，12 h稱剩余餌料量，并調(diào)換位置，48 h后改喂正常飼料(胡蘿卜及燕麥)，觀察記錄攝食量及死亡情況。

2.3 無選擇適口性的測(cè)定

取健康田鼠20只，平均體重28.7 g，不分雌雄，隨機(jī)分為2組，每組10只。

第一組(毒餌組)：喂含有0.1% D型肉毒滅鼠劑的小麥，即取含2億MLD/瓶 D型肉毒毒素凍干劑1瓶，加水20 mL即成為1 000 MLD/mL D型肉毒滅鼠劑，吸取1 mL加入到99 mL水中充分混合，然后再吸取10 mL加入到100 g小麥中，充分混合均勻悶制24 h后飼喂。

第二組(無毒組)：取10 mL水加入到100 g小麥中，反復(fù)攪拌充分混勻悶制24 h后飼喂。

共飼喂48 h，在12、24、48 h分別稱剩余餌料1次，48 h后喂正常飼料，觀察10 d并記錄攝食量和死亡情況。

2.4 再遇適口性的測(cè)定

取健康青海田鼠10只，不分雌雄，平均體重28 g，隨機(jī)分為2組，每組10只。

第一組為再遇試驗(yàn)組，于2009年6月5日投給亞致死量D型肉毒滅鼠劑毒餌，亞致死量為1/4LD50。取形狀大小相同的2個(gè)食盆，每個(gè)放入亞致死量毒餌100 g，飼喂24 h后取出稱重，記錄消耗量并改喂正常飼料(胡蘿卜及燕麥)，3 d后，做再遇適口性試驗(yàn)。

第二組為對(duì)照組，正常飼喂。

3 d后，再遇組與對(duì)照組分別用含0.4% D型肉毒滅鼠劑的小麥毒餌和無毒小麥各100 g，取2個(gè)相同的食盆，分別放入0.4%的D型肉毒滅鼠劑的小麥毒餌及無毒小麥各100 g，每12 h稱重并調(diào)換位置，觀察記錄攝食量及死亡情況。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠灌胃試驗(yàn)

測(cè)得813批D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠的灌胃半數(shù)致死量(共3次)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列于表1、表2、表3中。

表1 D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠LD50測(cè)定(試驗(yàn)1)

Tab.1 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 1)

表2 D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠LD50測(cè)定(試驗(yàn)2)

Tab.2 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 2)

表3 D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠LD50測(cè)定(試驗(yàn)3)

Tab.3 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 3)

根據(jù)表1、表2、 表3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出以下結(jié)論。

試驗(yàn)1：LD50=5.01萬(wàn)MLD/kg體重(95%可信限為3.08～8.14萬(wàn)MLD/kg體重)；

試驗(yàn)2：LD50=5.11萬(wàn)MLD/kg體重(95%可信限為2.43～10.8萬(wàn)MLD/kg體重)；

試驗(yàn)3：LD50=6.81萬(wàn)MLD/kg體重(95%可信限為4.00～13.5萬(wàn)MLD/kg體重)。

上述結(jié)果表明D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠敏感。

3.2 青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑選擇適口性試驗(yàn)結(jié)果

青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑毒餌及無滅鼠劑餌料采食量的比較試驗(yàn)結(jié)果列于表4。

表4 選擇適口性試驗(yàn)結(jié)果

Tab.4 The result of choose palatability

注：表中72 h后為觀察期，記錄其死亡情況，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予正常飼喂，故餌料消耗標(biāo)記為“0”

研究結(jié)果表明：毒餌消耗量與無毒餌消耗量相比，攝食系數(shù)為0.92，表明青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑選擇適口性良好。

3.3 青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑無選擇適口性試驗(yàn)結(jié)果

采用青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑毒餌及無滅鼠劑餌料采食量的比較試驗(yàn)結(jié)果。

表5 無選擇適口性試驗(yàn)結(jié)果

Tab.5 The result of no choose palatability

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑無選擇適口性很好，攝食系數(shù)(毒餌組攝食量/對(duì)照組攝食量)為0.95。

3.4 青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑再遇適口性試驗(yàn)結(jié)果

表6 亞致死量毒餌攝食情況

Tab.6 Feeding coefficient of sublethal amount poison bait

表7 再遇試驗(yàn)攝食情況

Tab.7 Feeding coefficient of repeating palatability

注：表中48 h后為觀察期，記錄其死亡情況，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予正常飼喂，故餌料消耗標(biāo)記為“0”

表8 對(duì)照組攝食情況

Tab.8 Feeding coefficient of control group

注：表中48 h后為觀察期，記錄其死亡情況，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予正常飼喂，故餌料消耗標(biāo)記為“0”

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：再遇適口性攝食系數(shù)為1.15，對(duì)照攝食系數(shù)為0.94，表明再遇適口性良好，青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑再遇時(shí)無避食現(xiàn)象。

4 結(jié)論

通過以小麥做基餌在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)定青海田鼠對(duì)D 型肉毒滅鼠劑的敏感性、適口性和再遇適口性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：青海田鼠對(duì)D型肉毒滅鼠劑(小麥做基餌)敏感，有選擇適口性、無選擇適口性及再遇適口性均良好，D型肉毒滅鼠劑具備潛在的防治野外青海田鼠的能力。

5 討論

5.1 高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)、高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)和青海田鼠是危害青海省草原的3種主要害鼠種類，多年來，青海省在防治高原鼠兔和高原鼢鼠方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，防治技術(shù)日臻完善，但在青海田鼠防治方面，始終未能找到成功的防治方法和技術(shù)。本試驗(yàn)通過D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠的半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定，青海田鼠喜食性餌料的篩選以及害鼠對(duì)D型肉毒毒素的適口性、再與適口性等試驗(yàn)，取得了現(xiàn)地滅鼠中所需的相關(guān)技術(shù)參數(shù)。

5.2 本試驗(yàn)中我們測(cè)得D型肉毒毒素對(duì)青海田鼠的灌胃半數(shù)致死量分別為5.01萬(wàn)MLD/kg體重，5.11萬(wàn)MLD/kg體重，6.81萬(wàn)MLD/kg體重，平均為5.64萬(wàn)MLD/kg體重，該數(shù)據(jù)與高原上另外兩種主要害鼠高原鼠兔的敏感性(5 010 MLD/kg體重)，高原鼢鼠相比較(5 840 MLD/kg體重)其敏感性相對(duì)較差，但仍然屬于敏感范圍，因此本實(shí)驗(yàn)首先從理論上證明了D型肉毒毒素作為防治高原鼢鼠具有一定的可行性。為進(jìn)一步證實(shí)藥物在現(xiàn)地鼠害防治中的使用效果，還需進(jìn)行小區(qū)滅鼠實(shí)驗(yàn)作為參考。

[1] 汪詩(shī)平.青海省“三江源”地區(qū)植被退化原因及其保護(hù)策略[J].草業(yè)學(xué)報(bào)，2003，12(6)：1-9.

[2] 周立志，李迪強(qiáng)，王秀磊，等.三江源自然保護(hù)區(qū)鼠害類型、現(xiàn)狀和防治策略[J].安徽大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2002，26(2)：87-96.

[3] 李德浩.青海經(jīng)濟(jì)動(dòng)物志[M].西寧：青海人民出版社，1989：689-691.

[4] 王祖鄖，羅松達(dá)衛(wèi)，于曉濤，等.青海省青海田鼠鼠疫自然疫源地的發(fā)現(xiàn)與研究[J].中國(guó)地方病學(xué)雜志，2004，23(1)：69-72.

[5] 張宇衛(wèi)，祁生源.青海省農(nóng)田主要害鼠種類調(diào)查報(bào)告[J].青海農(nóng)技推廣，2015(2)：15-17.

Type D botulinum rodenticide；

Research on Prevention and Control of QinghaiVoles by Type D Botulinum Rodenticide

Li Shengqing Zhang Xiyun Hu Guoyuan Fan Yuxia Liu ShengcaiLi Zhining Li Xiuping Wang Tingting Huang Rong Liu Huaixin

We used Horn’s method to measure the effect of type D botulinum rodenticide on Qinghai voles.The results showed that the gastricLD50was 50 100 MLD/kg body weight.The 95% confidence limit was 30 800-81 400 MLD/kg body weight.Qinghai voles proved sensitive to type D botulinum rodenticide.Type D botulinum rodenticide had good selective palatability to Qinghai voles with feeding coefficient 0.92.Selectiveness palatability was high with a feeding coefficient of 1.15.Repeat palatability was high with a feeding coefficient of 1.15.Type D botulinum rodenticide proved effective for control of Qinghai voles.

稿件運(yùn)行過程

2016-03-25

修回日期：2016-06-15

發(fā)表日期：2016-11-10

青海田鼠；

半數(shù)致死量；

再遇適口性

Qinghai voles ；

Median lethal dose；

Repeating palatability

Q958.1

A

2310-1490(2016)04-297-04

采用霍恩氏法測(cè)得D型肉毒梭菌毒素對(duì)青海田鼠的灌胃半數(shù)致死量LD50=5.01萬(wàn)MLD/kg體重，95%可信限為3.08～8.14萬(wàn)MLD/kg體重，表明D型肉毒滅鼠劑對(duì)青海田鼠敏感；實(shí)驗(yàn)以小麥做基餌，測(cè)得青海田鼠對(duì)小麥基餌的D型肉毒滅鼠劑有選擇適口性良好，攝食系數(shù)為0.92；無選擇適口性很好，攝食系數(shù)為1.15；再遇適口性良好，攝食系數(shù)為1.15。該項(xiàng)試驗(yàn)研究為利用D型肉毒梭菌生物毒素進(jìn)行大面積青海田鼠的防治提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

李生慶，男，36歲，博士研究生，副研究員；主要從事動(dòng)物疫病防治及生物毒素草地鼠害防治研究。E-mail：lsq.8008@163.com