高原鼢鼠對(duì)D型肉毒毒素的敏感性測(cè)定及小區(qū)防治試驗(yàn)

李生慶張同作張西云李志寧劉懷新林龔華

(1.青海畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，西寧，810016；2.中科院西北高原生物研究所，西寧，810001)

高原鼢鼠對(duì)D型肉毒毒素的敏感性測(cè)定及小區(qū)防治試驗(yàn)

李生慶張同作張西云李志寧劉懷新林龔華2

(1.青海畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，西寧，810016；2.中科院西北高原生物研究所，西寧，810001)

首次采用霍恩氏法測(cè)定了野生高原鼢鼠對(duì)D型肉毒梭菌毒素的敏感性，并以測(cè)得的LD50為依據(jù)，在野外開展了不同濃度D型肉毒毒素防治高原鼢鼠的小區(qū)防治試驗(yàn)。通過試驗(yàn)測(cè)得D型肉毒毒素對(duì)高原鼢鼠的半數(shù)致死量(LD50)為5 840 MLD/mL，(可信線為3 430-9 950 MLD小白鼠/kg體重)，高原鼢鼠對(duì)該毒素敏感，其敏感性與高原鼠兔基本一致。小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果表明D型肉毒顆粒毒餌防治效果最佳，平均防治效果為89.83 %。可以用于大面積高原鼢鼠鼠害防治。

高原鼢鼠；

高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)，因其長年生活于地下，視力嚴(yán)重退化，俗稱“瞎老鼠”，藏語稱為“塞隆”。高原鼢鼠是一種活躍在海拔2 800 m～4 300 m的耕地、草灘、森林和陽坡草場(chǎng)上，靠啃食草根、莖為生的高寒草甸草原特有鼠種。其穴洞、鼠道星羅棋布，所到之處草場(chǎng)、森林、退耕還林地多成了不毛之地[1]。據(jù)張生合報(bào)道，青海省鼢鼠危害面積1.09×104hm2，其中青南和環(huán)湖地區(qū)危害最嚴(yán)重，形成了大面積寸草不生的“黑土”，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。高原鼢鼠不僅掘翻土壤，埋沒牧草，而且地下洞連片成網(wǎng)，坍塌沖失后表土流失，造成新土裸露，形成大片裸地和禿斑地，通過對(duì)高原鼢鼠的大力防治，可有效保護(hù)草地生態(tài)環(huán)境，有利于草地生境的恢復(fù)和改善，遏制草地進(jìn)一步退化、沙化、“黑土灘”化，使草地生境趨于良性循環(huán)。

利用肉毒毒素進(jìn)行鼠害防治已成為當(dāng)前的一種趨勢(shì)，肉毒梭菌神經(jīng)毒素是由肉毒梭狀芽孢桿菌產(chǎn)生的，1 ng/kg即可致死的劇毒毒素蛋白[3]。這種毒素通過抑制神經(jīng)遞質(zhì)——乙酰膽堿的釋放，導(dǎo)致肌肉麻痹[4]。其中A-G血清型中，A、B、E、F、G，可導(dǎo)致人的肉毒中毒，C、D型主要引起鳥類和動(dòng)物的肉毒中毒[5]。D型肉毒毒素滅鼠劑就是利用D型肉毒梭菌所產(chǎn)毒素經(jīng)過過濾、除菌而成的一種大分子生物毒素蛋白滅鼠劑，具有無殘留，不污染環(huán)境，無二次中毒，不傷害鼠類天敵的特點(diǎn)。

多年來，青海省利用D型肉毒毒素在防治高原鼠兔和高原田鼠方面積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，防治技術(shù)日臻完善，但在高原鼢鼠防治方面，始終未能找到成功的防治方法和技術(shù)。本研究為應(yīng)用D型肉毒滅鼠劑有效地控制高原鼢鼠對(duì)農(nóng)業(yè)、林業(yè)及畜牧業(yè)的危害提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 高原鼢鼠對(duì)D型肉毒毒素的敏感性測(cè)定試驗(yàn)

1.1.1 試驗(yàn)藥品

D型肉毒素顆粒毒餌(10萬MLD/g)、 D型肉毒毒素水劑(毒價(jià)：1000萬MLD/mL小白鼠靜注，批號(hào)：20151003批)，由青海畜牧獸醫(yī)科學(xué)院提供。

1.1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)用野生高原鼢鼠捕捉自青海省大通縣野外。在室內(nèi)馴養(yǎng)1周后使用。

1.1.3 試驗(yàn)方法

本試驗(yàn)采用國際通用的霍恩氏法測(cè)定高原鼢鼠對(duì)D型肉毒毒素的LD50，以每公斤體重灌服2 150 MLD、4 640 MLD、10 000 MLD、21 500 MLD的毒素量設(shè)置4個(gè)劑量組，每組5只動(dòng)物，每100 g體重灌服215、464、1 000、2 150 MLD的毒素，飼喂甘藍(lán)，觀察10 d，記錄死亡情況。

1.2 D型肉毒毒素防治高原鼢鼠的小區(qū)試驗(yàn)

1.2.1 小區(qū)試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)地位于青海省海南藏族自治州貴南縣塔秀鄉(xiāng)，地處西傾山與黃河之間(E100°13′～101°33′，N35°09′～36°08′)，總面積6 649.7 km2，隸屬于海南藏族自治州，約占全州總面積的14.45%，東與黃南藏族自治州澤庫縣為鄰，南與本州同德縣，西與興海縣和共和縣，北與貴德縣接壤。貴南縣屬高原大陸性氣候，冬長夏短，冬無嚴(yán)寒，夏無酷暑，適宜發(fā)展草原畜牧業(yè)。年平均氣溫為2.3℃，年極端最高氣溫31.8℃，年極端最低氣溫-29.2℃，年降水量為403.8 mm，年平均日照時(shí)數(shù)為2 907.8 h，年平均蒸發(fā)量為1 378.5 mm；氣溫低，日照長，輻射強(qiáng)，降水集中，雨熱同季，但降水不足，蒸發(fā)量大，屬典型的高原大陸性氣候；干旱、暴雨、冰雹、沙塵暴等氣象災(zāi)害頻繁。

1.2.2 樣方設(shè)計(jì)

試驗(yàn)設(shè)D型生物滅鼠劑A：D型肉毒毒素顆粒毒餌(2萬MLD/g)、B：0.10%D型肉毒毒素青稞毒餌、C：0.15%D型肉毒毒素青稞毒餌、D：0.20%D型肉

圖1 D型肉毒素殺滅高原鼢鼠小區(qū)試驗(yàn)樣方Fig.1 The draft of plot experiment about botulinum toxin type D kill the plateau zokor A：D型肉毒毒素顆粒毒餌(20 000 MLD/g) B：0.10%D型肉毒毒素青稞毒餌 C：0.15%D型肉毒毒素青稞毒餌D：0.20%D型肉毒毒素青稞毒餌 CK：空白對(duì)照黑色邊框?yàn)?0 m寬隔離帶A：Poison bait of Botulinum toxin type D(20 000 MLD/g)B：0.10%Density barley bait of botulinum toxin type D C：0.15%Density barley bait of botulinum toxin type D D：0.20%Density barley bait of botulinum toxin type D CK：blank controlisolation belt

毒毒素青稞毒餌4個(gè)梯度及CK：空白對(duì)照。每小區(qū)面積0.25 hm2(50 m ×50 m)重復(fù)3次，組間隨機(jī)排列，各濃度組兩兩隔開，并設(shè)標(biāo)志旗。中間設(shè)50 m寬的保護(hù)行，外圍設(shè)50 m寬保護(hù)行，在行間及外圍保護(hù)帶均以D型肉毒毒素顆粒毒餌進(jìn)行防治。

1.2.3 試驗(yàn)區(qū)鼠密度調(diào)查

以劃定的樣方為單位，試驗(yàn)開始前，將樣方內(nèi)所有新堆土堆鏟平，記錄數(shù)據(jù)；2 d后，再用紅筷子標(biāo)記新堆土堆數(shù)，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算該試驗(yàn)區(qū)內(nèi)鼠密度概況。

1.2.4 毒餌配制

根據(jù)試驗(yàn)室內(nèi)D型肉毒滅鼠劑對(duì)高原鼢鼠的適口性試驗(yàn)，在D型肉毒毒素顆粒毒餌的基礎(chǔ)上做適當(dāng)調(diào)整，配制顆粒毒餌，用于高原鼢鼠的現(xiàn)地鼠害防治。

使用前，按濃度梯度將D型肉毒毒素用注射器吸出、注入80 mL自來水中，充分混勻；將青稞倒入塑料小盆中，把混勻的毒素均勻加入到餌料中，邊加邊拌制，使每一粒餌料都沾到毒素，拌制完畢后將毒餌裝入一塑料袋中，悶置12 h后待用(配制見表1)。

表1 不同濃度毒素餌料配制方法

Tab.1 The method of bait mixing with the different density toxin

1.2.5 投藥

采用有效洞投餌法，在標(biāo)有紅筷子的有效土堆處投放不同濃度的毒餌，根據(jù)有效洞探查、將投餌器深入到鼠道內(nèi)，通過投餌管將餌料投放于有效洞內(nèi)，每一洞投放餌料10～15粒，投放后用物塊將洞口封閉。投餌時(shí)將勞力每人間隔5 m左右排成一行邊走邊投餌，隊(duì)伍兩邊各派1人專做標(biāo)記，以防漏投和重投。在隔離帶同樣施餌，1 d內(nèi)投完。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)方法

防治前，采用新鮮土堆插旗計(jì)數(shù)法計(jì)算滅效。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 D型肉毒滅鼠劑對(duì)高原鼢鼠敏感性測(cè)定結(jié)果

試驗(yàn)測(cè)得，1003批D型肉毒毒素對(duì)高原鼢鼠的灌胃半數(shù)致死量LD50為5 840 MLD/kg體重，可信限為3 430～9 950 MLD(小白鼠)/kg體重。

表2 D型肉毒滅鼠劑對(duì)高原鼢鼠的灌胃半數(shù)致死量LD50測(cè)定

Tab.2 The LD50 about botulinum toxin type D to the plateau zokor

2.2 小區(qū)防治試驗(yàn)結(jié)果

D型肉毒毒素顆粒毒餌平均滅效為89.93%，0.10%、0.15%、0.20%D型肉毒毒素3個(gè)濃度組的平均滅效分別為80.6%、89.13%及87.73%，而對(duì)照組平均滅效為32.7%。小區(qū)試驗(yàn)結(jié)果表明，D型肉毒毒素顆粒毒餌滅效最好，其次為1.5% D型肉毒毒素水劑。

結(jié)論：結(jié)合上述D型肉毒毒素滅鼠劑對(duì)高原鼢鼠半數(shù)致死量(LD50)的測(cè)定以及小區(qū)防治試驗(yàn)，采用D型肉毒毒素顆粒毒餌(20 000 MLD/g)或采用0.15%濃度D型肉毒毒素拌制青稞毒餌，其滅鼠效果最佳，可用于大面積高原鼢鼠的鼠害防治。

3 討論與分析

3.1 高原鼢鼠、高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)及高原田鼠(Neodonirene)是青藏高原農(nóng)牧區(qū)危害最為嚴(yán)重的3種害獸，據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅青海省鼠害每年可消耗草地鮮草量108.49億kg，因挖掘洞坑損耗的鮮草量4.56億kg，按每公斤鮮草0.1元計(jì)價(jià)，每年僅新鮮牧草一項(xiàng)直接經(jīng)濟(jì)損失就是11.3億多元[6]。因此，無論是從生態(tài)系統(tǒng)安全還是從畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)角度上講，鼠害問題都是青藏高原發(fā)展的關(guān)鍵問題。而目前，在利用D型肉毒毒素防治高原鼠兔、高原田鼠方面已經(jīng)做了大量的試驗(yàn)研究，試驗(yàn)結(jié)果表明，利用D型肉毒毒素生物滅鼠劑防治上述害鼠既能保證較高的滅效(平均在90%以上)，又能避免環(huán)境污染、二次中毒等弊端。因此，本試驗(yàn)采用霍恩氏法測(cè)定了D型肉毒毒素對(duì)高原鼢鼠的灌胃半數(shù)致死量(LD50)，有試驗(yàn)結(jié)果得知其LD50為5 840 MLD/kg體重，其敏感性與高原鼠兔基本相當(dāng)(高原鼠兔LD50為5 010 MLD/kg體重)，因此本試驗(yàn)首先從理論上證明了D型肉毒毒素作為防治高原鼢鼠具有一定的可行性。

表3 不同濃度D型肉毒滅鼠劑對(duì)高原鼢鼠的滅殺效果(0.25 hm2)

Tab.3 The effect of different density botulinum toxin type D killing the plateau zokor(0.25 hm2)

注：A為顆粒毒餌，B為0.10%濃度組，C為0.15%濃度組，D為0.02%濃度組，CK為空白對(duì)照

Note：A：Poison bait，B：0.10%Density group，C：0.15%Density group，D：0.20%Density group，CK：Blank control

3.2 高原鼢鼠是一種嚙齒類野生動(dòng)物，其野外捕捉及試驗(yàn)室馴養(yǎng)十分困難，我們通過本次試驗(yàn)中高原鼢鼠的現(xiàn)場(chǎng)抓捕并結(jié)合高原鼢鼠的相關(guān)習(xí)性，專門研制了一種高原鼢鼠野外活體捕捉定位儀，該儀器大大地提高了活體高原鼢鼠的抓捕效率，節(jié)約人力，保證了試驗(yàn)用鼠的按時(shí)供給，該設(shè)備正在申請(qǐng)國家實(shí)用新型專利，并已受理。另外，高原鼢鼠在試驗(yàn)室馴養(yǎng)過程中，建議在飼養(yǎng)籠內(nèi)防治一定厚度的較濕潤的泥土，不僅保證了高原鼢鼠的生活環(huán)境沒有太大的改變，而且高原鼢鼠在泥土中不斷拱土，也能提高其運(yùn)動(dòng)活力。馴養(yǎng)期間，我們還利用本試驗(yàn)室自制的顆粒餌料進(jìn)行飼喂，適口性良好，大大改善了高原鼢鼠的營養(yǎng)狀況，在很大程度上降低了高原鼢鼠的自然死亡率，保證了試驗(yàn)數(shù)據(jù)的精確性。

3.3 據(jù)唐忠民等的研究報(bào)道[7]，一年中，高原鼢鼠有兩個(gè)活動(dòng)盛期，4～6月為第一活動(dòng)盛期，主要為尋求配偶、交配、產(chǎn)仔和哺乳行為。第二活動(dòng)盛期為9～10月底，用于建窩修巢儲(chǔ)備越冬食物。兩個(gè)活動(dòng)盛期即為危害盛期，推土造丘和啃食牧草對(duì)草原形成劇烈破壞，因此，對(duì)于高原鼢鼠的防治時(shí)間一定要選在高原鼢鼠活動(dòng)頻繁的季節(jié)，即4 月中下旬～5 月10 日前的交配高峰期和越冬前貯備食物的秋季-初冬時(shí)期。這兩個(gè)時(shí)期高原鼢鼠活動(dòng)時(shí)間長、范圍廣，是滅治高原鼢鼠的最佳時(shí)期。特別是交配高峰期時(shí)的滅治，基本上人為地切斷了高原鼢鼠的繁殖鏈，對(duì)高原鼢鼠防治起到事半功倍的作用。張同作等研究表明[8]，春季時(shí)候，高原鼢鼠經(jīng)過一個(gè)冬季的消耗，其洞內(nèi)貯存的食物已消耗殆盡，其體能極大的下降。因此在春季土地解凍之后，它迅速而頻繁地出外取食，借以補(bǔ)充體能并得以迅速恢復(fù)。而這個(gè)時(shí)候它所能夠攝取的食物非常有限，這就迫使高原鼢鼠必須通過更頻繁的活動(dòng)和更長距離的移動(dòng)來達(dá)成目的，因此，它被滅殺的幾率就更大。另外，因?yàn)榇杭菊蹈咴魇蠓敝掣叻迤?，它們追逐異性、交配等一系列的繁殖行為必然增加它們的活?dòng)量，因而導(dǎo)致它們被滅殺。而在秋季時(shí)節(jié)，高原鼢鼠的繁殖活動(dòng)已全部結(jié)束，體能也得到最大限度的恢復(fù)和發(fā)展，此時(shí)外界食物豐富，它們的活動(dòng)必然減少，因此被殺滅的幾率大大下降。在實(shí)際生產(chǎn)中，防治高原鼢鼠的季節(jié)應(yīng)以春季為先，此次小區(qū)防治試驗(yàn)我們選擇于5月上旬進(jìn)行藥物投放，滅鼠效果較理想。

3.4 高原鼢鼠相較于高原鼠兔及高原田鼠，最大的特點(diǎn)在于它常年生活在地表之下，無法準(zhǔn)確判斷其具體的生活區(qū)域，那么利肉毒毒素滅鼠劑進(jìn)行高原鼢鼠的大面積鼠害防治，防效高低的關(guān)鍵是能否準(zhǔn)確的找到有效的鼠道，并將毒餌投放于害鼠活動(dòng)的洞道內(nèi)，這樣才能保證害鼠采食到毒餌。因此，一般是根據(jù)新鮮土丘與新鮮土丘之間的連線來判斷高原鼢鼠的鼠道走向，在此連線的土堆附近，可用投餌探棒進(jìn)行鼠道探查，探棒深入土層5～10 cm后，阻力若突然減少，即為洞道，可投放毒餌。在進(jìn)行鼢鼠活體抓捕時(shí)，也可用鐵鏟鏟開洞道，觀察洞道上高原鼢鼠挖掘時(shí)，鼻吻拱土留下的半月形的吻印，吻印深的一方或洞道壁草根指向的一方就是高原鼢鼠離開主巢，外出活動(dòng)的方向，只要把抓捕器安放在這個(gè)方向的洞道口，外出活動(dòng)后回巢的高原鼢鼠即被捕捉。

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Sensitivity Analysis of Plateau Zokor Myospalax baileyi toD-type Botulinum Toxin

Li Shengqing1Zhang Tongzuo2Zhang Xiyun1Li Zhining1Liu Huaixin1Lin Gonghua2

(1.Qinghai Academy of Veterinary and Animal Science，Xining，810016，China；2.Northwest Plateau Institute of Biology，Chinese Academy of Science，Xining，810001，China)

We adopted the Horn method to determine the sensitivity of wild plateau zokorMyospalaxbaileyito the D-type botulinum toxin.Then based on measured LD50，we carried out a control experiment using different concentrations of D-type botulinum toxin to kill the plateau zokor.We determined the the median lethal dose(LD50)of D-type botulinum toxin for plateau zokor was 5 840 MLD/mL，(credible limits is 3 430-9 950 / MLD kg weight).Plateau zokor proved sensitive to the poison，and the sensitivity was similar to that of plateau pikaOchotonacurzoniae.Plot experiment results showed that the pellet of D-type botulinum toxin was most effective with average effect of 89.8%.This method can be used for controlling damage caused by plateau zokor in large areas.

Plateau zokor；

稿件運(yùn)行過程

2015-10-28

修回日期：2015-11-04

發(fā)表日期：2016-02-10

Q958.2

A

2310-1490(2016)01-20-05

敏感性；

D型肉毒毒素；

小區(qū)試驗(yàn)

Sensitivity；

Botulinum toxin type D；

Plot experiment

李生慶，男，36歲，在讀博士，副研究員；主要從事高原動(dòng)物疫病診斷與防治及D型肉毒滅鼠劑的研制與應(yīng)用工作。