乙型肝炎檢測的假陰性與假陽性結(jié)果原因研究

李國花，黃世杰，詹虎，白志敏，蘇銀鳳，陳鏡清，劉云高，曾建興

1.福建省晉江市醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建晉江362200；2.福建省晉江市疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，福建晉江362200

乙型肝炎檢測的假陰性與假陽性結(jié)果原因研究

李國花1，黃世杰1，詹虎2，白志敏1，蘇銀鳳1，陳鏡清1，劉云高1，曾建興1

1.福建省晉江市醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建晉江362200；2.福建省晉江市疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科，福建晉江362200

目的研究造成乙型肝炎檢測假陰性與假陽性結(jié)果的原因，以此提高乙型肝炎檢測的準(zhǔn)確率，避免假陰性與假陽性結(jié)果干擾，從而為乙型肝炎的臨床診斷提供準(zhǔn)確的依據(jù)。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)該院2014年6月—2016年6月接受檢查的700例乙肝患者進(jìn)行檢查，統(tǒng)計(jì)假陰性與假陽性情況，分析檢測結(jié)果的錯(cuò)誤原因。結(jié)果700例乙肝患者中，假性結(jié)果占16.0%，其中假陽性結(jié)果占6.0%，假陰性結(jié)果占10.0%；造成假陰性與假陽性結(jié)果的影響因素：檢驗(yàn)方法占19.6%、試劑占25.9%、實(shí)驗(yàn)室操作占39.3%、其他占15.2%，實(shí)驗(yàn)室操作的占比均高于試劑、檢驗(yàn)方法及其他（P＜0.05）。結(jié)論乙型肝炎檢測的假陰性與假陽性結(jié)果主要與檢查方法、試劑、實(shí)驗(yàn)室操作等因素有關(guān)，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室、臨床醫(yī)生及患者的密切配合，減少各因素對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，可有效提高乙型肝炎檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

乙型肝炎；酶聯(lián)免疫吸附法；假陰性；假陽性

臨床檢測乙型肝炎病毒表面抗原主要采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及膠體金免疫層析法［1］。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)操作簡單、技術(shù)可靠，靈敏度及特異性較高。目前，檢測病毒表面抗原的方法如電化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法、聚合酶鏈反應(yīng)、化學(xué)發(fā)光法等得到不斷改善，但酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)依然是檢測病毒表面抗原的可靠技術(shù)［2］。在臨床檢測工作中，部分未患病患者檢驗(yàn)結(jié)果呈陽性或患病患者檢驗(yàn)結(jié)果呈陰性，一定程度上給乙型肝炎的檢驗(yàn)帶來不必要的麻煩。因此，需要準(zhǔn)確鑒別乙型肝炎檢測的陽性與陰性結(jié)果。該研究以該院2014年6月—2016年6月接受檢查的700例乙肝患者為對(duì)象，對(duì)其假陰性與假陽性結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，并分析了造成假陰性與假陽性結(jié)果的原因，提出在檢查方法、試劑、實(shí)驗(yàn)室操作方面進(jìn)行改進(jìn)，可有效提高乙型肝炎檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。現(xiàn)就有關(guān)情況做如下報(bào)告。

1　資料與方法

1.1臨床資料

選取該院2014年6月—2016年6月接受檢查的乙肝患者共700例，其中男性368例，女性332例；年齡24～80歲，平均年齡（52.52±12.84）歲；病程1～7年，平均病程（3.14±0.32）年。

1.2方法

采用酶聯(lián)免疫吸附法對(duì)700例乙肝患者進(jìn)行檢查，乙型肝炎五項(xiàng)產(chǎn)品試劑盒，由英科新創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn)，采用伯樂酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測；采用英科新創(chuàng)科技有限公司提供的膠體金測試卡；對(duì)乙肝檢查患者的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行觀察，統(tǒng)計(jì)假陰性與假陽性情況，并對(duì)檢測結(jié)果的錯(cuò)誤原因進(jìn)行分析。

1.3判定標(biāo)準(zhǔn)

判定標(biāo)準(zhǔn)［3-4］：乙肝陽性結(jié)果0.1050≤A＜0.2100為疑似陽性，A≥0.2100為陽性，假陰性/（陰性+假陰性）為假陰性率，陽性/（陽性+假陽性）為假陽性率。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料用百分?jǐn)?shù)（%）表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

700例乙肝患者中，檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤為112例，占16.0%。其中假陽性42例，占6.0%；假陰性70例，占10.0%。造成假陰性與假陽性結(jié)果的原因與檢驗(yàn)方法、試劑、實(shí)驗(yàn)室操作等相關(guān)，其中實(shí)驗(yàn)室操作的占比為39.3%，均高于試劑、檢驗(yàn)方法、其他的25.9%、19.6%、15.2%（χ2= 4.5723、10.3966、16.4232，P＜0.05），具體見表1。

表1　造成假陰性與假陽性結(jié)果的影響因素［n（%）］

3　討論

近年來，乙型肝炎病毒感染呈全球性分布趨勢，已成為臨床常見的傳染性疾病，可以通過血液及血液制品進(jìn)行傳播。有關(guān)調(diào)查顯示［5］：全球每年新發(fā)的乙型肝炎病毒感染病例約有5千萬，每年因乙型肝炎病毒感染而死亡的患者達(dá)100萬人。我國乙型肝炎病毒表面抗原陽性率占10%，提示我國乙型肝炎的發(fā)病率較高，并逐漸成為嚴(yán)重危害人們健康的傳染病之一［6］。乙型肝炎病毒感染后，影響患者病程和轉(zhuǎn)歸的因素較多，其疾病譜與病毒和人體免疫應(yīng)答作用的結(jié)果密切相關(guān)。所以，分析乙型肝炎檢驗(yàn)的假陽性與假陰性結(jié)果，對(duì)乙型肝炎檢測準(zhǔn)確性的提高具有重要意義。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是臨床檢驗(yàn)乙型肝炎病毒感染的主要方法，其操作簡便，敏感性高。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)所用的試劑主要有北京萬泰、美國雅培等，敏感度均為100%，特異性高達(dá)98.1%～99.8%，這些試劑可以批量進(jìn)行操作，但假陽性結(jié)果依然存在［7］。該組檢驗(yàn)結(jié)果錯(cuò)誤率占16.0%，假陽性率占6.0%，假陰性率占10.0%；造成假陰性與假陽性結(jié)果的因素包括檢驗(yàn)方法、試劑、實(shí)驗(yàn)室操作等，其中實(shí)驗(yàn)室操作的占比最高（P＜0.05）。研究表明［8-9］：影響酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測的因素較多，血細(xì)胞、標(biāo)本的狀態(tài)、洗板方式、加樣量、酶標(biāo)儀的使用、檢測時(shí)間以及血清分離等都會(huì)對(duì)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測的準(zhǔn)確性造成影響。與此同時(shí)，標(biāo)本充分離心與否也會(huì)造成假陽性結(jié)果發(fā)生。究其原因可能是上清液離心不充分，當(dāng)含有過氧化物酶細(xì)胞成分的血漿在反應(yīng)孔中進(jìn)行加樣時(shí)，因黏附于板條上而不易洗去，造成過氧化物產(chǎn)生酶樣作用，故出現(xiàn)假陽性結(jié)果［10］。另外，血清中的類風(fēng)濕因子同抗體結(jié)合會(huì)導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性，血清中補(bǔ)體與免疫球蛋白G的Fc段結(jié)合也會(huì)產(chǎn)生假陽性結(jié)果，標(biāo)本中免疫球蛋白聚合物吸附于塑料表面形成非特異性吸附，也是造成檢測結(jié)果為假陽性的一個(gè)原因。針對(duì)上述造成乙型肝炎檢驗(yàn)假陰性與假陽性結(jié)果的原因，該研究認(rèn)為可以采取如下措施進(jìn)行改進(jìn)，從而減少假陽性結(jié)果，進(jìn)一步提高乙型肝炎檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。具體措施為：①抗凝血標(biāo)本在使用過程中，如血標(biāo)本無法檢驗(yàn)，應(yīng)重新抽血進(jìn)行檢測；②試劑盒使用前平衡溫度至室溫；③抽血后置于溫水中，時(shí)間保持2 h，3000 r/min離心，完全沉淀紅細(xì)胞和纖維蛋白；④室溫放置標(biāo)本10 h后進(jìn)行檢測，確保血凝塊良好收縮，標(biāo)本中非特異性活性物質(zhì)失活，以此減少非特異性反應(yīng)現(xiàn)象；正確使用洗板機(jī)和酶標(biāo)儀并且保證使用中二者儀器的狀態(tài)是正常的。

由于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的操作簡單，準(zhǔn)確性高，使用方便，臨床中得到廣泛運(yùn)用。但酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)存在一定局限，主要是因?yàn)槊附Y(jié)合物及抗原濃度高、吸光度值大的情況下，乙肝患者或乙型肝炎病毒攜帶者會(huì)出現(xiàn)漏檢情況；酶結(jié)合物及抗原濃度低，吸光度值小的情況下，可產(chǎn)生假陰性結(jié)果。在乙型肝炎病毒感染的檢測中，一旦出現(xiàn)漏檢情況，除可能會(huì)延誤臨床診治最佳時(shí)機(jī)外，還會(huì)給血庫工作造成不必要的麻煩，如患者輸注漏檢的乙肝病毒核心抗體陽性、乙肝病毒e抗原陽性、乙型肝炎病毒陽性獻(xiàn)血者的血，可能會(huì)造成嚴(yán)重后果。所以，相關(guān)部門必須引起對(duì)血庫安全的高度重視，應(yīng)摒棄以往單項(xiàng)表面抗原檢查，對(duì)獻(xiàn)血人員進(jìn)行乙肝5項(xiàng)檢測，以確保萬無一失。針對(duì)乙型肝炎檢驗(yàn)出現(xiàn)假陽性與假陰性結(jié)果這一問題，建議從如下幾個(gè)方面展開檢驗(yàn)工作，以促使臨床檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性進(jìn)一步提高。具體為：①檢驗(yàn)人員必須對(duì)相關(guān)試劑和儀器進(jìn)行檢查，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致檢驗(yàn)假陽性與假陰性結(jié)果的發(fā)生；②實(shí)驗(yàn)室檢查前，應(yīng)對(duì)患者進(jìn)行檢查，認(rèn)真詢問病史及服藥情況；③督促患者遵守醫(yī)囑，檢查前做到停藥、空腹。檢驗(yàn)人員、臨床醫(yī)師及患者三方密切配合、共同努力，才能減少假陰性與假陽性結(jié)果，從而可為乙型肝炎的可靠診斷提供有利條件。

綜上所述，乙型肝炎檢驗(yàn)中產(chǎn)生假陽性與假陰性結(jié)果的原因較多，主要的影響因素包括檢查方法、試劑選擇、實(shí)驗(yàn)操作等諸多方面。臨床檢驗(yàn)工作中，必須根據(jù)乙型肝炎檢驗(yàn)假陽性與假陰性結(jié)果的影響因素，對(duì)有關(guān)問題進(jìn)行解決和處理，同時(shí)加強(qiáng)檢驗(yàn)人員、臨床醫(yī)師及患者的配合，減少假陰性與假陽性結(jié)果，才能有效提高乙型肝炎檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

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Research on Causes of False-negative and False-positive Results of Hepatitis B Test

LI Guo-hua1，HUANG Shi-jie1，ZHAN Hu2，BAI Zhi-min1，SU Yin-feng1，CHEN Jing-qing1，LIU Yun-gao1，ZENG Jian-xing1
1.Department of Clinical Laboratory，Jinjiang Hospital，Jinjiang，F(xiàn)ujian Province，362200 China；2.Department of Clinical Laboratory，Jinjiang Disease Control and Prevention Center，Jinjiang，F(xiàn)ujian Province，362200 China

Objective To research the causes of false-negative and false-positive results of hepatitis B test thus improving the accurate rate of hepatitis B test，avoid the interference of false-negative and false-positive results and providing the accurate basis for the clinical diagnosis of hepatitis B.Methods 700 cases of patients with hepatitis B in our hospital from June 2014 to June 2016 were examined by the enzyme linked immunosorbent assay，and the false-negative and false-positive conditions were counted and the mistake causes of test results were analyzed.Results In the 700 cases of patients with hepatitis B，the false results accounted for 16.0%，including 6.0%false-positive result and 10.0%false-negative result，and the influence factors of them were the test method（19.6%），reagent（25.9%），laboratory operation（39.3%）and others（15.2%），and the proportion of laboratory operation was higher than that of reagent，test method and others，P＜0.05.Conclusion The false-negative and false-positive results of hepatitis B test are mainly related to examination method，reagent and laboratory operation，and enhancing the close cooperation of laboratory，clinical doctors and patients and reducing the effect of various factors on test results can effectively improve the accuracy of test results of hepatitis B.

Hepatitis B；Enzyme linked immunosorbent assay；False-negative；False-positive

R47

A

1672-5654（2016）10（b）-0015-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.29.015

李國花（1986.6-），女，福建晉江人，本科，主管檢驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)工作。

（2016-07-15）