CyclinD1、p16INK4在低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中的表達(dá)

強(qiáng)　賢, 范欽和, 唐正華, 張　琪

(1. 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 病理科, 江蘇 南京, 210029;2. 南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州婦幼保健院 病理科, 江蘇 常州, 213003;3. 南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫婦幼保健院 病理科, 江蘇 無錫, 214002)

?

CyclinD1、p16INK4在低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中的表達(dá)

強(qiáng)賢1, 2, 范欽和1, 唐正華2, 張琪3

(1. 南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 病理科, 江蘇 南京, 210029;2. 南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州婦幼保健院 病理科, 江蘇 常州, 213003;3. 南京醫(yī)科大學(xué)附屬無錫婦幼保健院 病理科, 江蘇 無錫, 214002)

目的探討低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤(LGESS)組織中CyclinD1、p16INK4的表達(dá)。方法采用免疫組織化學(xué)法檢測36例手術(shù)切除后經(jīng)病理確診的LGESS瘤組織中CyclinD1和p16INK4蛋白的表達(dá)，分析它們與臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果CyclinD1、p16在LGESS中的表達(dá)率分別為47%、39%, 且它們的表達(dá)與患者的年齡、是否絕經(jīng)、孕產(chǎn)次、腫瘤大小、肌層浸潤深度、是否脈管侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，但CyclinD1與臨床手術(shù)病理分期及LGESS預(yù)后有關(guān)(P<0.05)。結(jié)論CyclinD1陽性表達(dá)的低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤與腫瘤侵襲性的臨床行為有關(guān)。

低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤; CyclinD1; p16INK4; 免疫組織化學(xué); 預(yù)后

子宮內(nèi)膜間質(zhì)腫瘤是少見的起源于子宮的間葉性腫瘤，約占女性惡性腫瘤的0.2%[1]，其中低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤表現(xiàn)為具有低度惡性潛能的臨床過程，預(yù)后相對較好，少有復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。但仍有大量文獻(xiàn)[2]證實(shí)許多低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤患者在手術(shù)切除后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移或死亡。雖然大多數(shù)低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤患者確診后經(jīng)過手術(shù)治療，臨床分期為I期，即腫瘤局限于子宮內(nèi)，未侵及周圍組織，但幾年后有1/3的患者出現(xiàn)盆腔內(nèi)復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移。有文獻(xiàn)報(bào)道CyclinD1、p16INK4表達(dá)的低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤是一種新的亞型，代表該腫瘤的生物學(xué)行為更具侵襲性[3]。作者通過檢測CyclinD1、p16INK4在低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中的表達(dá)，分析其與腫瘤臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系，探討CyclinD1、p16INK4表達(dá)在低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤的預(yù)后評估中的意義，報(bào)告如下。

1　材料與方法

1.1臨床資料

選取南京醫(yī)科大學(xué)附屬常州婦幼保健院23例及無錫市婦幼保健院13例低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤組織標(biāo)本，均具有詳細(xì)生存期跟蹤隨訪資料，標(biāo)本為2003年7月—2013年6月手術(shù)切除后病理證實(shí)為低度惡性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤的存檔蠟塊。診斷由2位病理醫(yī)生重新閱片完成，診斷結(jié)果一致。36例患者，發(fā)病年齡 35～61歲，平均45歲，因不規(guī)則陰道出血或月經(jīng)改變作為首發(fā)癥狀，其余則因體檢發(fā)現(xiàn)。所有患者均在診斷后行全子宮、雙附件切除及盆腔淋巴結(jié)清掃手術(shù)，術(shù)前未行其他治療，包括激素治療及放化療。手術(shù)病理分期：I期(未侵出子宮體)25例，II期(累及宮旁或附件)10例，Ⅲ期(累及腹腔或淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移)1例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的病例為1例，其余均無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。見表1。

1.2主要試劑

鼠抗人CyclinD1、p16INK4單克隆抗體購自北京中杉金橋公司。

1.3免疫組化染色和判定標(biāo)準(zhǔn)

在美國羅氏公司BenchMarkXT全自動(dòng)免疫組織化學(xué)染色機(jī)上進(jìn)行。操作步驟均嚴(yán)格按照羅氏診斷優(yōu)化程序進(jìn)行?；具^程如下: 4 μm切片脫蠟, 3%H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活動(dòng)，抗原修復(fù)，滴加10%正常山羊血清封閉非特異染色后，順序加一抗、二抗室溫靜置1 h后, DAB染色，蘇木精對比染色，常規(guī)脫水、透明、封片，光鏡下觀察結(jié)果。選擇已知陽性染色的切片作陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。由2位醫(yī)生獨(dú)立判定結(jié)果。染色結(jié)果判定: CyclinD1以大于5%的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)棕黃色顆粒判定為陽性染色[4]。p16INK4以腫瘤細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)清晰棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)大于10%為陽性，小于10%為陰性[5]。

表1　36例患者臨床病理特征[n(%)]

2　結(jié)　果

2.1CyclinD1、p16INK4在低度惡性子宮內(nèi)膜

間質(zhì)肉瘤中的表達(dá)

CyclinD1、p16INK4在子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中的陽性表達(dá)率分別為47%(17/36)，39%(14/36)，其中5例CyclinD1彌漫強(qiáng)表達(dá)，3例p16彌漫表達(dá)，陽性細(xì)胞數(shù)達(dá)60%以上，其余陽性細(xì)胞數(shù)為5～20%，多表達(dá)在血管周圍的腫瘤細(xì)胞。3例較早復(fù)發(fā)的病例均示CyclinD1彌漫強(qiáng)表達(dá)。

2.2CyclinD1、p16INK4與臨床病理學(xué)特征的

關(guān)系

患者的年齡、是否絕經(jīng)、孕產(chǎn)次、腫瘤大小、肌層浸潤深度、是否脈管侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與CyclinD1、p16INK4的表達(dá)均無明顯差異。但CyclinD1的表達(dá)與臨床手術(shù)病理分期有關(guān), 5例CyclinD1彌漫陽性表達(dá)的病例中，3例為Ⅱ期，1例為Ⅲ期，1例為Ⅰ期。而p16INK4與之無關(guān)。見表2。

表2　CyclinD1、p16與分期的關(guān)系

2.3CyclinD1與p16INK4表達(dá)的關(guān)系

本研究36例子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤標(biāo)本中，17例CyclinD1表達(dá)陽性，其中12例p16同時(shí)表達(dá)陽性，而22例p16表達(dá)陰性中，17例CyclinD1表達(dá)陰性。二者表達(dá)呈正相關(guān)性。

2.4CyclinD1、p16INK4與預(yù)后的關(guān)系

全部病例獲得隨訪，時(shí)間為60個(gè)月。本組36例患者中，15例復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)率為41.7%，復(fù)發(fā)時(shí)間為 4～60個(gè)月，中位復(fù)發(fā)時(shí)間29個(gè)月，最早復(fù)發(fā)的3例分別是手術(shù)后4個(gè)月、7個(gè)月、11個(gè)月，其余患者均在初治后1年半以上復(fù)發(fā)。復(fù)發(fā)部位均在盆腔內(nèi)(包括盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移)，無死亡病例。復(fù)發(fā)后行手術(shù)切除，輔助放化療，目前情況良好。

15例復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移病例中，12例示CyclinD1表達(dá)陽性，3例示CyclinD1表達(dá)陰性，提示CyclinD1與復(fù)發(fā)有相關(guān)性。p16與復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性。12例兩者共同表達(dá)的病例中，6例發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。見表3。

表3　CyclinD1、p16與預(yù)后的關(guān)系

3　討　論

傳統(tǒng)上，將ESS分為低級別子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤(LGESS)和高級別子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤(HGESS), 而2003版WHO分類認(rèn)為HGESS缺乏特異性分化，并且組織學(xué)不同于子宮內(nèi)膜間質(zhì)，故將其命名為未分化肉瘤。Shuichi K等[6]將ESS分為3組進(jìn)行研究，即低級別子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤(LGESS), 不伴核多形的未分化子宮內(nèi)膜肉瘤(UES-U)和伴有核多形的未分化子宮內(nèi)膜肉瘤(UES-P), 主要依據(jù)腫瘤細(xì)胞是否出現(xiàn)明顯的不典型性及多形性、腫瘤性壞死為基礎(chǔ)。但是，近來認(rèn)為只有LGESS才是子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤，包括傳統(tǒng)意義的LGESS和大部分的UES-U, 因?yàn)橛醒芯縖7]認(rèn)為這兩者具有相同的分子免疫表型。而HGESS被認(rèn)為是未分化的子宮肉瘤即UES-P, 因?yàn)樗鼰o論從腫瘤細(xì)胞的形態(tài)學(xué)或分子生物學(xué)均不顯示子宮內(nèi)膜間質(zhì)的分化證據(jù)，且無激素受體的表達(dá)。而本文診斷的LGESS均在一定程度上顯示子宮內(nèi)膜間質(zhì)分化的特點(diǎn)，腫瘤細(xì)胞類似正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，細(xì)胞大小形態(tài)較一致，無明顯核異型或伴有輕-中度異型，常見腫瘤細(xì)胞圍繞螺旋小動(dòng)脈樣結(jié)構(gòu)呈漩渦狀生長，部分病例局灶區(qū)域出現(xiàn)明顯核異型，核增大，染色質(zhì)增多，可見小核仁，但核大小相對一致。核分裂相多小于4個(gè)/10HPF, 個(gè)別病例核分裂相>10個(gè)/10HPF。腫瘤細(xì)胞呈巢狀或島狀增生，不規(guī)則狀浸潤子宮肌壁間。其中1例灶區(qū)可見腫瘤性壞死，有輕到中度異型性，但腫瘤細(xì)胞具有一致性，能找到螺旋小動(dòng)脈樣結(jié)構(gòu)，免疫組化顯示激素受體陽性，CD10陽性或局灶陽性。但UES-P和瘤細(xì)胞呈現(xiàn)重度異型的那部分UES-U仍劃分到HGESS中。因此，可能會將之前診斷為HGESS的一部分病例納入作者診斷的LGESS中。

本研究結(jié)果顯示, CyclinD1、p16在LGESS中的表達(dá)率分別為47%、39%，且它們的表達(dá)與患者的年齡、是否絕經(jīng)、孕產(chǎn)次、腫瘤大小、肌層浸潤深度、是否脈管侵犯、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無相關(guān)性，但CyclinD1表達(dá)與LGESS臨床手術(shù)病理分期和預(yù)后有關(guān)，而p16與手術(shù)分期和預(yù)后無關(guān)。提示CyclinD1會使腫瘤細(xì)胞的生長能力發(fā)生改變。進(jìn)一步分析他們與預(yù)后的關(guān)系發(fā)現(xiàn)CyclinD1與預(yù)后不良有關(guān)，容易發(fā)生復(fù)發(fā)，因此CyclinD1可以作為潛在的生物學(xué)標(biāo)志物，成為LGESS預(yù)后評估與指導(dǎo)治療的重要指標(biāo)。通常作者認(rèn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移提示預(yù)后不好，但CyclinD1的表達(dá)與預(yù)后有關(guān)，卻與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，這可能與作者收集的病例有關(guān)，收集的病例中發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的只有1例，且這1例顯示CyclinD1、p16陽性表達(dá)。Shuichi K[8]研究結(jié)果顯示CyclinD1在LGESS中表達(dá)率只有5%，在UES-U中表達(dá)率高達(dá)85%，這可能與LGESS診斷標(biāo)準(zhǔn)不一樣有關(guān)。本文p16表達(dá)率與Park JY[9]的研究結(jié)果一致，并且病例選擇標(biāo)準(zhǔn)一致，均顯示p16與預(yù)后無關(guān)。

CyclinD1和p16均屬于G1周期重要調(diào)節(jié)蛋白，研究[10]表明, CyclinD1是一種癌基因產(chǎn)物，在不同組織起源的多種腫瘤中過度表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。而p16則為一種抑癌基因，有抑制細(xì)胞增殖的作用。認(rèn)為兩者均陽性表達(dá)的腫瘤中，其導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的原因可能與CyclinD1蛋白表達(dá)超過p16蛋白的生物效應(yīng)而使Rb蛋白處于持久磷酸化狀態(tài)有關(guān)，從而使Rb蛋白對細(xì)胞生長的抑制效應(yīng)失活。本研究結(jié)果顯示兩者的表達(dá)具有相關(guān)性，可能是CyclinD1表達(dá)的明顯增加促使與之相拮抗的p16表達(dá)增加。但兩者共同表達(dá)的病例中，僅有6例發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，提示p16可能削弱CyclinD1的作用，而CyclinD1的單獨(dú)作用與預(yù)后關(guān)系更大。近來，關(guān)于CyclinD1在子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中表達(dá)已有報(bào)道，尤其在UES-U中呈現(xiàn)高表達(dá)。有報(bào)道[11]顯示CyclinD1是伴YWHAE-FAM22基因重排子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤的一種診斷性免疫標(biāo)記物，而伴YWHAE-FAM22基因重排的子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤是一種預(yù)后較差的腫瘤亞型。而Bharat R報(bào)道了CyclinD1和p16陽性表達(dá)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤，認(rèn)為它是一個(gè)新的亞型，更具有侵襲性和不良預(yù)后，指出在低級別子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤中CyclinD1和p16陽性表達(dá)與侵襲性臨床行為有密切關(guān)系。p16也常表達(dá)在UES中，提示腫瘤更具侵襲行為[12]。這與作者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。CyclinD1在UES-P中幾乎不表達(dá)，因此認(rèn)為UES-P不屬于子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤，而應(yīng)歸為子宮未分化肉瘤。所以認(rèn)為將CyclinD1也作為鑒別子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤及未分化肉瘤的重要免疫指標(biāo)。

[1]Nam J H. Surgical treatment of uterine sarcoma[J]. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol, 2011, 25(6): 751-60.

[2]Park J Y, Kim D Y, Kim JH, et al. The impact of tumor correlation during surgery on the outcomes of patients with apparently early low-grade endometrial stromal sarcoma of the uterus[J]. Ann Surg Oncol, 2011, 18(12): 3453-61.

[3]Rekhi B1, Motghare P. Cyclin D1 and p16INK4 positive endometrial stromal sarcoma: a case report with new insights[J]. Indian J Pathol Microbiol, 2014, 57(4): 606-8.

[4]Saito T1, Oda Y, Tanaka K, et al. beta-catenin nuclear expression correlates with cyclin D1 overexpression in sporadic desmoid tumours[J]. J Pathol, 2001, 195(2): 222-8.

[5]Park J Y1, Kim K R, Nam J H. Immunohistochemical analysis for therapeutic targets and prognostic markers in low-grade endometrial stromal sarcoma[J]. Int J Gynecol Cancer, 2013, 23(1): 81-9.

[6]Popiolek D1, Yee H, Levine P. MIB1 as a possible predictor of recurrence in low-grade endometrial stromal sarcoma of the uterus[J]. Gynecol Oncol, 2003, 90(2): 353-7.

[7]Kurihara S1, Oda Y, Ohishi Y, et al. Endometrial stromal sarcomas and related high-grade sarcomas: immunohistochemical and molecular genetic study of 31 cases[J]. Am J Surg Pathol, 2008, 32(8): 1228-38.

[8] Kurihara S1, Oda Y, Ohishi Y, et al. Coincident expression of beta-catenin and cyclin D1 in endometrial stromal tumors and related high-grade sarcomas[J]. Mod Pathol, 2010, 23(2): 225-34.

[9]Park J Y1, Kim K R, Nam J H. Immunohistochemical analysis for therapeutic targets and prognostic markers in low-grade endometrial stromal sarcoma[J]. Int J Gynecol Cancer, 2013, 23(1): 81-9.

[10]Ewen M E1, Lamb J. The activities of cyclin D1 that drive tumorigenesis[J]. Trends Mol Med, 2004, 10(4): 158-62.

[11]Lee C H1, Ali R H, Rouzbahman M, et al. Cyclin D1 as a diagnostic immunomarker for endometrial stromal sarcoma with YWHAE-FAM22 rearrangement[J]. Am J Surg Pathol, 2012, 36(10): 1562-70.

[12]Ivy Chew, Esther O. Endometrial Stromal Sarcomas: A Review of potential prognostic factors[J]. Adv Anat Pathol, 2010, 17(2): 113-121.

Expression of CyclinD1, p16INK4 proteins in low-gradeendometrial stromal sarcoma

QIANG Xian1, 2, FAN Qinhe1, TANG Zhenghua2, ZHANG Qi3

(1.DepartmentofPathology,TheFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing,Jiangsu, 210029; 2.DepartmentofPathology,ChangzhouMaternalandChildHealthCareHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Changzhou,Jiangsu, 213003; 3.DepartmentofPathology,WuxiMaternalandChildHealthCareHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity,Wuxi,Jiangsu, 214002)

ObjectiveTo explore the expression of CyclinD1, p16INK4 proteins in low-grade endometrial stromal sarcoma tissues. MethodsThe expression of CyclinD1, p16INK4 proteins in 36 cases of LGESS was detected by immunohistochemical method. The correlations between the two proteins, clinicopathological factors and the prognosis were analyzed. ResultsExpression rates of CyclinD1, p16INK4 proteins in LGESS were 47%, 39% respectively, and there were no significant correlations between the expression of the two proteins and age, menopause, parity, tumor size, depth of myometrial invasion, lymphovascular space invasion and lymph node metastasis. CyclinD1 protein expression was associated with FIGO stage and the prognosis of LGESS (P<0.05). ConclusionThe positive expression of CyclinD1 in LGESS might be associated with clinical aggressive behavior of tumor.

low-grade endometrial stromal sarcoma; CyclinD1; p16INK4; immunohistochemical method; prognosis

2016-06-05

范欽和, E-mail: fanqinhe@aliyun.com

R 737.33

A

1672-2353(2016)19-061-04DOI: 10.7619/jcmp.201619018