不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響

馬紅娜　周飄蘋　陸　游　袁　野　侯迎梅　孫　蓬　丁立云　周歧存

(寧波大學海洋學院魚類營養(yǎng)研究室，寧波315211)

?

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響

馬紅娜周飄蘋陸游袁野侯迎梅孫蓬丁立云周歧存*

(寧波大學海洋學院魚類營養(yǎng)研究室，寧波315211)

本試驗旨在研究不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性、血清生化指標、糖原含量及消化酶活性等的影響。采用2×3雙因素試驗設(shè)計，其中脂肪設(shè)5%、10% 2個水平，葡萄糖設(shè)10%、20%、30% 3個水平，共配制6種試驗飼料。每種飼料設(shè)3個重復，每個重復放養(yǎng)平均體重為(14.79±0.13) g的大黃魚幼魚50尾。試驗期為8周。結(jié)果表明：飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚增重率(WGR)、特定生長率(SGR)和飼料效率(FE)的影響不顯著(P>0.05)。在飼料脂肪水平為5%時，WGR和SGR隨飼料葡萄糖水平增加而降低，30%葡萄糖組的WGR和SGR顯著低于10%葡萄糖組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚全魚水分和粗脂肪含量的影響顯著(P<0.05)，而對全魚粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響(P>0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚肝糖原、肌糖原含量有顯著影響(P<0.05)。在飼料脂肪水平為5%時，肝糖原含量隨飼料葡萄糖水平的升高而升高，而肌糖原含量隨著飼料葡萄糖水平的升高先升高后降低；在飼料脂肪水平為10%時，肝糖原含量隨飼料葡萄糖水平的升高先降低后升高，肌糖原含量隨著飼料葡萄糖水平的升高而升高。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚血清總蛋白(TP)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖含量及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性無顯著影響(P>0.05)；然而，在飼料脂肪水平相同時，血清葡萄糖含量隨飼料葡萄糖水平的升高而升高，30%葡萄糖組血清葡萄糖含量顯著高于10%葡萄糖組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚肝臟葡萄糖激酶(GK)、磷酸果糖激酶(PFK)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性有顯著影響(P<0.05)，而對丙酮酸激酶(PK)、1，6-二磷酸果糖酶(FBPase)、6-磷酸葡萄糖酶(G6Pase)活性無顯著影響(P>0.05)。在飼料脂肪水平為10%時，隨飼料葡萄糖水平的升高，肝臟GK、PFK活性升高，肝臟PEPCK活性先升高后降低。由結(jié)果可知，與飼料脂肪水平為10%時相比，在飼料脂肪水平為5%時，隨飼料葡萄糖的水平的升高，大黃魚能夠通過調(diào)節(jié)糖代謝關(guān)鍵酶活性及肝糖原含量來維持血糖含量的平衡，有效利用飼料中的葡萄糖。綜合本試驗結(jié)果，建議大黃魚幼魚階段飼料適宜的脂肪和糖水平分別為10%和20%。

大黃魚；葡萄糖；脂肪；生長性能；糖酵解關(guān)鍵酶；糖異生關(guān)鍵酶

大黃魚(PseudosciaenacroceaRichardson)隸屬于鱸形目(Perciformes)石首魚科(Sciaenidae)黃魚屬(Pseudosciaena)，為暖溫性近海中下層集群洄游性魚類，主要分布在我國黃海南部、東海、臺灣海峽及南海北部[1]，因其肉質(zhì)鮮美而深受人們喜愛，是我國傳統(tǒng)“海洋四大經(jīng)濟魚類”之一[2]，具有很高的經(jīng)濟價值。目前，大黃魚養(yǎng)殖在我國黃海南部、東海及臺灣海峽已經(jīng)形成規(guī)模。但目前大黃魚養(yǎng)殖中多采用冰鮮小雜魚投喂，人工配合飼料推廣緩慢，這主要是由于其各個生長階段營養(yǎng)需求數(shù)據(jù)庫不完善以及適口性好的配合飼料缺乏所致，從而成為制約大黃魚健康養(yǎng)殖的關(guān)鍵因素之一。

蛋白質(zhì)是魚類的必需營養(yǎng)物質(zhì)，但也是水產(chǎn)飼料中成本最高的部分。飼料中添加適量的非蛋白質(zhì)能量物質(zhì)(脂肪和糖類)能夠節(jié)約飼料蛋白質(zhì)，提高飼料利用率，進而降低飼料成本[3]。脂肪是一種重要的能源物質(zhì)，它既可以為魚類生長發(fā)育提供必需脂肪酸，同時還可促進魚體對脂溶性維生素的吸收和運輸[4]。據(jù)研究，飼料中適宜的脂肪水平可以提高飼料利用率，促進魚類生長，但脂肪水平過高則會增加魚體脂肪沉積，抑制魚類正常生長，還影響飼料的制粒和保存[5]。與蛋白質(zhì)相比，糖類是魚類飼料中的廉價能源物質(zhì)，飼料中適宜糖水平能夠減少蛋白質(zhì)供能，并減輕氮排泄對養(yǎng)殖水體造成的污染[3,6-8]。與脂肪相比，糖類具有相對廉價、來源較為廣泛的優(yōu)勢，飼料中添加適量的糖類還可以增加飼料的黏結(jié)性，有利于制粒[9]，但飼料糖水平過高不僅會抑制魚類的生長，降低飼料利用率，還會導致魚類抗病力弱、死亡率高[10-11]。研究表明，飼料中糖水平能夠調(diào)節(jié)糖代謝關(guān)鍵酶的活性和表達量，進而對血糖含量產(chǎn)生影響[12]，目前在大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[13]、舌齒鱸(Dicentrarchuslabrax)[14]、金頭鯛(Sparusaurata)[15]、花鱸(Lateolabraxjaponicus)[16]、歐洲鰻鱺(Anguillaanguilla)[17]、瓦氏黃顙魚(Pelteobagrusvachelli)[18]、鳡(Elopichthysbambusa)[19]和翹嘴紅鲌(ErythroculterilishaeformisBleeker)[11]等魚類中均有研究，研究這些酶活性及表達量的變化有助于了解魚類糖代謝機制。

目前對大黃魚的蛋白質(zhì)、脂肪、氨基酸、飼料原料消化率和蛋白質(zhì)源替代等方面均有研究[1-2,20-24]，但有關(guān)糖類的研究較少。有鑒于此，本試驗設(shè)計2個脂肪水平(5%和10%)、3個葡萄糖水平(10%、20%和30%)，研究不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性、血清生化指標、糖原含量及消化酶活性等的影響，從而為大黃魚資源節(jié)約型配合飼料的研制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和理論參考。

1　材料與方法

1.1試驗設(shè)計與試驗飼料

本試驗采用2×3雙因素試驗設(shè)計，以飼料脂肪和葡萄糖水平為影響因素。以葡萄糖為糖源，魚粉和小麥蛋白粉為蛋白質(zhì)源，魚油、豆油和大豆卵磷脂為脂肪源，其中飼料脂肪水平分別為5%、10%，葡萄糖水平分別10%、20%、30%，共配制6種等氮飼料，即5/10、5/20、5/30、10/10、10/20、10/30，試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。按照表1配方將所有原料粉碎后過80目篩網(wǎng)，維生素和礦物質(zhì)預混料等微量組分采用逐級擴大法混合，再加入魚油、豆油和大豆卵磷脂以及水混合均勻，用雙螺桿擠條機(FⅡ-26，華南理工大學機械廠生產(chǎn))制成粒徑分別為2和4 mm的硬顆粒飼料，在烘箱中90 ℃熟化30 min，自然風干，飼料密封后保存在-20 ℃冰箱中備用。

1.2飼養(yǎng)管理

試驗用大黃魚魚苗購于象山港灣水產(chǎn)苗種有限公司，并在浙江省寧波市象山縣西滬港灣魚排進行試驗。正式試驗前，所有魚苗在大規(guī)格網(wǎng)箱(3.0 m×3.0 m×3.0 m)暫養(yǎng)2周，用普通商業(yè)飼料(健馬牌大黃魚飼料，福建天馬飼料有限公司產(chǎn)品)飽食投喂。暫養(yǎng)結(jié)束后，挑選體格健壯、規(guī)格一致、初重為(14.79±0.13) g的大黃魚魚苗900尾，隨機分配于18個小規(guī)格浮伐式網(wǎng)箱(1.5 m×1.5 m×2.0 m)中，每個網(wǎng)箱50尾，每種試驗飼料隨機投喂3個網(wǎng)箱的試驗魚，即每組3個重復，共6個組。試驗期為8周。試驗期間，每天飽食投喂2次(05:00和17:00)，海水溫度為26.5～31.5 ℃，鹽度為32～36 g/L，溶解氧濃度不低于7.0 mg/L。

1.3樣品采集與指標測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后饑餓24 h，將魚撈出，用丁香酚(1∶10 000)麻醉，稱重并記錄每個網(wǎng)箱的大黃魚尾數(shù)及總重，用于計算成活率(SR)、增重率(WGR)、特定生長率(SGR)和飼料效率(FE)。每個網(wǎng)箱隨機選取3尾魚作為全魚樣品，用于魚體常規(guī)營養(yǎng)成分分析。每個網(wǎng)箱再隨機取3尾魚稱重、量體長，取其肝臟、內(nèi)臟并稱重，用于計算肥滿度(CF)、肝體比(HSI)、臟體比(VSI)。每個網(wǎng)箱另取4尾魚，從尾部靜脈抽取血樣，注入1.5 mL離心管，靜置于4 ℃冰箱過夜，3 500 r/min離心8 min取上清制得血清，置于-80 ℃冰箱備用。將部分取過血的大黃魚肝臟、前腸(腸道組織前端1/3部分)剝離，放置于2 mL離心管中(取完立即放入液氮中)，用于檢測肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶[葡萄糖激酶(GK)、6-磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮磷酸激酶(PK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)、果糖-1.6-二磷酸酶(FBPase)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)]活性、肝糖原含量以及前腸淀粉酶和脂肪酶活性；取背部肌肉10 g左右，裝于密封袋中，用于檢測肌糖原含量。

表1　試驗飼料組成及營養(yǎng)水平(風干基礎(chǔ))

1)秘魯蒸汽魚粉粗蛋白質(zhì)含量為660 g/kg，粗脂肪含量為85 g/kg。The contents of crude protein and crude lipid of Peruvian steamed fish meal were 660 and 85 g/kg, respectively.

2)礦物質(zhì)預混料和維生素預混料參照Mai等[25]配制。Mineral premix and vitamin premix were prepared according to Mai, et al[25].

3)營養(yǎng)水平為實測值。Nutrient levels were measured values.

飼料和魚體常規(guī)營養(yǎng)成分的分析參照AOAC(1995)[26]的方法。其中，粗蛋白質(zhì)含量檢測采用凱氏定氮法；粗脂肪含量檢測采用索氏抽提法；水分含量檢測采用105 ℃烘干恒重法。血清生化指標[總蛋白(TP)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、葡萄糖、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)]送往寧波大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院利用全自動生化分析儀(日立7600-110，日本)進行檢測。肝糖原與肌糖原含量的檢測參照Hassid等[27]的化學分析法，使用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒檢測。腸道淀粉酶活性采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒檢測。腸道脂肪酶活性以及肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性采用上海喬杜生物科技公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒檢測。

1.4計算公式

增重率(%)=100×(Wt-W0)/W0；

特定生長率(%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t；

成活率(%)=100×Nt/N0；

肝體比(%)=100×Wh/W；

臟體比(%)=100×Wv/W；

肥滿度(g/cm3)=100×W/L3；

飼料效率=(Wt-W0)/F。

式中：W0為試驗魚初重(g)；Wt為試驗魚末重(g)；F為飼料攝入量(g)；t為試驗天數(shù)(d)；Nt為試驗結(jié)束時魚數(shù)量(尾)；N0為試驗開始時魚數(shù)量(尾)；W為體重(g)；L為體長(cm)；Wh為肝臟重(g)；Wv為內(nèi)臟重(g)。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，先以飼料脂肪和葡萄糖水平為影響因素進行雙因素方差分析(two-way ANOVA)，然后對相同脂肪水平的試驗組采用Duncan氏法進行多重比較，最后對相同葡萄糖水平的試驗組進行獨立樣本t檢驗(independent-samplesttest)，P<0.05表示差異顯著。數(shù)據(jù)采用平均值±標準差(mean±SD)表示。

2　結(jié)　果

2.1不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、形態(tài)學指標和飼料利用的影響

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、形態(tài)學指標和飼料利用的影響結(jié)果見表2。在飼料脂肪水平為5%時，30%葡萄糖組的末重、增重率和特定生長率顯著低于10%葡萄糖組(P<0.05)；在飼料脂肪水平為10%時，30%葡萄糖組的末重、增重率和特定生長率顯著低于10%和20%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平相同時，10%脂肪組的末重、增重率和特定生長率高于5%脂肪組，但差異不顯著(P>0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚的末重、增重率、特定生長率、成活率、肝體比、臟體比、肥滿度和飼料效率的影響不顯著(P>0.05)。

表2　不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚的生長性能、形態(tài)學指標和飼料利用的影響

同行數(shù)據(jù)肩標不同小寫字母表示同一脂肪水平下葡萄糖水平組間差異顯著(P<0.05)；同列數(shù)據(jù)肩標不同大寫字母表示同一葡萄糖水平下不同脂肪水平組間差異顯著(P<0.05)。下表同。

Values in the same row with different small letter superscripts indicated significant difference among different glucose level groups following the same lipid level (P<0.05); values in the same column with different capital letter superscripts indicated significant difference among different lipid level groups following the same glucose level (P<0.05). The same as below.

2.2不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的影響結(jié)果見表3。在飼料脂肪水平相同時，30%葡萄糖組全魚粗脂肪含量顯著低于10%和20%葡萄糖組(P<0.05)，而全魚水分含量在30%葡萄糖組最高，在飼料脂肪水平為5%時顯著高于10%葡萄糖組(P<0.05)，在飼料脂肪水平為10%時顯著高于20%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平相同時，10%脂肪組的全魚粗脂肪含量顯著高于5%脂肪組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚全魚水分和粗脂肪含量的影響顯著(P<0.05)，而對全魚粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響(P>0.05)。

表3　不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

2.3不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝糖原和肌糖原含量的影響

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝糖原和肌糖原含量的影響結(jié)果見表4。在飼料脂肪水平為5%時，肝糖原含量隨飼料葡萄糖水平的升高呈升高趨勢，10%葡萄糖組大黃魚肝糖原含量顯著低于20%和30%葡萄糖組(P<0.05)；在飼料脂肪水平為10%時，肝糖原含量隨飼料葡萄糖水平的升高先降低后升高，10%葡萄糖組的大黃魚肝糖原含量顯著高于20%和30%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平為10%時，10%脂肪組肝糖原含量顯著高于5%脂肪組(P<0.05)；而在飼料葡萄糖水平為20%或30%時，5%脂肪組肝糖原含量顯著高于10%脂肪組(P<0.05)。在飼料脂肪水平為5%時，肌糖原含量隨著飼料葡萄糖水平的升高先上升后降低，20%葡萄糖組大黃魚肌糖原含量顯著高于10%和30%葡萄糖組(P<0.05)；在飼料脂肪水平為10%時，肌糖原含量隨著飼料葡萄糖水平的升高而上升，30%葡萄糖組大黃魚肌糖原含量顯著高于10%和20%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平為10%或20%時，5%脂肪組肌糖原含量顯著高于10%脂肪組(P<0.05)；而在飼料葡萄糖水平為30%時，10%脂肪組肌糖原含量顯著高于5%脂肪組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚肝糖原、肌糖原含量有顯著影響(P<0.05)。

表4　不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝糖原和肌糖原含量的影響

2.4不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚血清生化指標的影響

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚血清生化指標的影響結(jié)果見表5。在飼料脂肪水平相同時，血清葡萄糖含量隨飼料葡萄糖水平的升高而升高，30%葡萄糖組血清葡萄糖含量顯著高于10%葡萄糖組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚血清TP、TC、TG、葡萄糖含量及ALT、AST活性無顯著影響(P>0.05)。

表5　不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚血清生化指標的影響

2.5不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚前腸消化酶活性的影響

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚前腸消化酶活性的影響結(jié)果見表6。在飼料脂肪水平相同時，前腸脂肪酶活性隨飼料葡萄糖水平的升高先升高后降低，以20%葡萄糖組前腸脂肪酶活性最高，顯著高于10%和30%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平相同時，10%脂肪組脂肪酶活性顯著高于5%脂肪組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚前腸脂肪酶活性有顯著影響(P<0.05)，而對淀粉酶活性無顯著影響(P>0.05)。

表6　不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚前腸消化酶活性的影響

2.6不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響

不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響結(jié)果見表7。在飼料脂肪水平為5%時，20%葡萄糖組大黃魚肝臟GK活性顯著低于30%葡萄糖組(P<0.05)；而在飼料脂肪水平為10%時，10%葡萄糖組大黃魚肝臟GK活性顯著低于20%和30%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平為20%或30%時，10%脂肪組大黃魚肝臟GK活性顯著高于5%脂肪組(P<0.05)。在飼料脂肪水平相同時，大黃魚肝臟PFK活性隨飼料葡萄糖水平的升高而升高，10%葡萄糖組大黃魚肝臟PFK活性顯著低于20%和30%葡萄糖組(P<0.05)；而在飼料葡萄糖水平相同時，10%脂肪組大黃魚肝臟PFK活性顯著高于5%脂肪組(P<0.05)。在飼料脂肪水平為5%時，30%葡萄糖組大黃魚肝臟PEPCK活性顯著高于10%和20%葡萄糖組(P<0.05)；而在飼料脂肪水平為10%時，20%葡萄糖組大黃魚肝臟PEPCK活性顯著高于10%葡萄糖組(P<0.05)。在飼料葡萄糖水平為10%或20%時，10%脂肪組大黃魚肝臟PEPCK活性顯著高于5%脂肪組(P<0.05)；而在飼料葡萄糖水平為30%時，5%脂肪組大黃魚肝臟PEPCK活性顯著高于10%脂肪組(P<0.05)。飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚肝臟GK、PFK和PEPCK活性有顯著影響(P<0.05)，而對PK、FBPase、G6Pase活性無顯著影響(P>0.05)。

表7　不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響

3　討　論

3.1不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚生長性能、形態(tài)學指標和飼料利用的影響

本研究結(jié)果表明飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚的成活率無顯著影響，在鳡[19]和建鯉[34]的研究中獲得了相似的結(jié)果。飼料中過高水平的葡萄糖尚未達到其最低的耐受限度，雖然導致生長性能的下降，但大黃魚尚未表現(xiàn)出致死的效應(yīng)。肝體比常被用于評價魚類的營養(yǎng)狀態(tài)，一般認為魚類攝食高水平糖類的飼料后會導致魚體肝臟脂肪的積累，從而引起肝體比的上升[39]，但在本試驗中發(fā)現(xiàn)，飼料葡萄糖水平對大黃魚的肝體比無顯著影響，這與在青魚[40]、條紋鱸(Moroulsatatilis)[41]上得到的結(jié)果相似，且王猛強等[42-43]研究表明葡萄糖和小麥淀粉均不會引起大黃魚肝體比的變化。究其原因，大黃魚對葡萄糖的利用能力較低，由葡萄糖合成脂肪并在肝臟中沉積的能力較低。

3.2不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的影響

飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚全魚水分和粗脂肪含量的影響顯著，而對粗蛋白質(zhì)含量無顯著影響。有研究表明魚體粗蛋白質(zhì)含量主要與魚體規(guī)格和所處的生長階段有關(guān)[44]，飼料糖水平對魚體的水分、粗蛋白質(zhì)和肌糖原含量沒有顯著影響[45-49]，對魚體粗脂肪含量的影響顯著，飼料糖類一定程度上可以轉(zhuǎn)化為魚體脂肪[50-51]。另一些研究發(fā)現(xiàn)，隨飼料糖類與脂肪比值的升高，非洲鲇(Clariasgariepinus)[45]和星斑川鰈(Platichthysstellatus)[48]等魚體粗脂肪含量降低，產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因主要是脂肪絕對攝入量的減少。本試驗中，在飼料脂肪水平相同時，魚體粗脂肪含量在飼料葡萄糖水平為10%與20%時差異不顯著，而在30%時顯著降低，與上述研究結(jié)果都不同。在飼料葡萄糖水平相同時， 10%脂肪組的魚體粗脂肪含量顯著高于5%脂肪組，表明當脂肪攝入較多時容易在大黃魚體內(nèi)沉積，這一結(jié)果與在黃顙魚(Pelteobagrusfulvidraco)[52]上得出的結(jié)果相似。本試驗結(jié)果表明，大黃魚對脂肪的利用能力要高于糖類(葡萄糖)，并將脂肪沉積于魚體中。

海外業(yè)務(wù)不僅為五建贏得了可觀的效益，也帶來了觀念的更新，而且為五建培養(yǎng)了一大批具有海外運作經(jīng)驗的專業(yè)人才。盡管在過程中有過巨大的挫折和沉痛的教訓，但五建人堅強地挺下來、走過去了。目前，海外項目施工已占五建營業(yè)收入占比超過53%，利潤占比超過70%。

3.3不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝糖原和肌糖原含量的影響

飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚的肝糖原和肌糖原含量有顯著影響。在飼料脂肪水平為5%時，肝糖原含量隨飼料葡萄糖水平的升高而顯著升高，這與在歐洲舌齒鱸[53]、虹鱒(Salmogairdneri)[54]上的研究結(jié)果相同，表明高葡萄糖水平顯著增加了肝糖原含量，而且本試驗中10%葡萄糖組飼料纖維素含量較高，纖維素會延緩葡萄糖的吸收[31]，導致10%葡萄糖組肝糖原含量明顯低于其他各組。在飼料脂肪水平為10%時，10%葡萄糖組肝糖原含量顯著高于20%和30%葡萄糖組，具體原因尚需要進一步探究。Moro等[55]的研究也認為，飼料中過多的糖類會轉(zhuǎn)化為糖原儲存在肝臟、肌肉中，導致肝糖原和肌糖原含量升高。本試驗中，在飼料葡萄糖水平為10%時，10%脂肪組大黃魚肝糖原含量顯著高于5%脂肪組；在飼料葡萄糖水平為20%或30%時，5%脂肪組肝糖原含量均顯著高于10%脂肪組。當糖源為糊精時，所得結(jié)果[52]與本試驗相似，這表明大黃魚利用糖的能力有限，當飼料低糖高脂時，魚體更容易利用脂肪分解產(chǎn)物就如進入糖代謝循環(huán)，形成肝糖原。

3.4不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚血清生化指標的影響

動物在正常生理狀態(tài)下能夠維持各項生理指標的動態(tài)穩(wěn)定，而血液組成成分的變化在一定程度上能夠反映動物此時的健康狀態(tài)[56]。魚類(尤其是肉食性魚類)對糖類的耐受性較差，攝食添加有糖類的飼料后血糖含量通常持續(xù)偏高[48,57]，且血糖含量與飼料糖類水平呈正相關(guān)[43]。本試驗中，當飼料脂肪水平為5%時，血清葡萄糖含量隨飼料葡萄糖水平的升高適應(yīng)性升高；當飼料脂肪水平為10%時，血清葡萄糖含量在飼料葡萄糖水平為10%與20%時差異不顯著，而在飼料葡萄糖水平為30%時則顯著升高，表明與飼料脂肪水平為10%時相比，在飼料脂肪水平為5%時，大黃魚能通過調(diào)節(jié)糖代謝及肝糖原含量來調(diào)節(jié)血糖含量平衡。

在飼料葡萄糖水平為30%時，10%脂肪組血清葡萄糖含量顯著高于5%脂肪組，這可能是由于飼料葡萄糖水平過高使得過多的葡萄糖轉(zhuǎn)化為脂肪，魚體血液中脂肪達到一定量時其又會對此轉(zhuǎn)化反應(yīng)進行反饋抑制造成的。在飼料葡萄糖水平為20%或30%時， 5%脂肪組肝臟AST活性顯著高于10%脂肪組，其中當肝臟受到損傷或壞死時，會引起血液中AST、ALT活性的升高[58-59]，表明飼料葡萄糖水平的升高對大黃魚肝功能有一定的負面影響，從而影響其生長。

飼料脂肪和葡萄糖水平的交互作用對大黃魚前腸脂肪酶活性有顯著影響，對淀粉酶活性無顯著影響。已有研究表明，淀粉酶活性主要由遺傳因素決定，飼料糖水平對其活性沒有顯著影響[60]。在飼料脂肪水平為5%時，大黃魚前腸脂肪酶活性隨飼料葡萄糖水平的升高先升高后降低，表明飼料中糖類對脂肪有一定的節(jié)約作用。在飼料葡萄糖水平相同時，10%脂肪組大黃魚前腸脂肪酶活性顯著高于5%脂肪組，這表明脂肪酶活性主要受到脂肪水平的影響，葡萄糖水平對脂肪酶活性的影響有限。

3.6不同脂肪和葡萄糖水平對大黃魚肝臟糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響

糖酵解和糖異生在生理功能上分別是糖的分解與合成，其中糖酵解是所有生物體內(nèi)葡萄糖代謝的唯一途徑[61]，糖異生是指將非糖物質(zhì)轉(zhuǎn)化成葡萄糖，主要在肝臟中進行，其關(guān)鍵酶有己糖激酶、GK、PFK、PK、G6Pase、FBPase和PEPCK。在本試驗中，在飼料脂肪水平相同時，肝臟GK、PFK活性隨飼料葡萄糖水平的升高而升高，表明葡萄糖水平升高使大黃魚糖酵解能力增強。飼料糖水平對肝臟G6Pase活性的影響還存在爭議，本試驗中飼料葡萄糖水平對大黃魚肝臟G6Pase活性無顯著影響，與對瓦氏黃顙魚[18]、大菱鲆[13]的研究結(jié)果相似。在飼料葡萄糖水平相同時，10%脂肪組的肝臟PFK活性顯著高于5%脂肪組，表明PFK活性也受飼料脂肪水平的影響，這與在金頭鯛[62]、虹鱒[63]上得出的結(jié)果不一致，其原因可能與試驗魚的種類不同相關(guān)。

4　結(jié)　論

在飼料脂肪水平為5%時，隨飼料葡萄糖水平的升高，大黃魚能夠通過調(diào)節(jié)糖代謝關(guān)鍵酶活性及肝糖原含量來維持血糖含量的平衡，有效利用飼料中的葡萄糖；而在飼料脂肪水平為10%時，隨飼料葡萄糖水平的升高，大黃魚不能有效調(diào)節(jié)糖代謝關(guān)鍵酶活性及肝糖原含量，對葡萄糖的利用能力降低。綜合本試驗結(jié)果，建議大黃魚幼魚階段飼料適宜的脂肪和糖水平分別為10%和20%。

[1]李會濤,麥康森,艾慶輝,等.大黃魚對幾種飼料蛋白原料消化率的研究[J].水生生物學報,2007,31(3):370-376.

[2]張帆.大黃魚(PseudosciaenacroceaR.)脂類營養(yǎng)生理和飼料替代蛋白源的研究[D].碩士學位論文.青島:中國海洋大學,2012.

[3]MOHSENI M,HASSANI M H S,POURALI F H,et al.The optimum dietary carbohydrate/lipid ratio can spare protein in growing beluga,Husohuso[J].Journal of Applied Ichthyology,2011,27(2):775-780.

[4]WATANABE T,OHTA M,KITAJIMA C,et al.Improvement of dietary value of brine shrimpArtemiasalivafor fish larvae by feeding them on ω3 highly unsaturated fatty acids[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries,1982,48(12):1775-1782.

[5]TAN Q,XIE S,ZHU X,et al.Effect of dietary carbohydrate-to-lipid ratios on growth and feed utilization in Chinese longsnout catfish (LeiocassislongirostrisGünther)[J].Journal of Applied Ichthyology,2007,23(5):605-610.

[6]羅毅平,謝小軍.魚類利用碳水化合物的研究進展[J].中國水產(chǎn)科學,2010,17(2):381-390.

[7]黃鶴忠,丁磊,宋學宏,等.青魚和草魚葡萄糖耐量的比較研究[J].中國水產(chǎn)科學,2005,12(4):496-500.

[9]LI X F,WANG Y,LIU W B,et al.Effects of dietary carbohydrate/lipid ratios on growth performance,body composition and glucose metabolism of fingerling blunt snout breamMegalobramaamblycephala[J].Aquaculture Nutrition,2013,19(5):701-708.

[10]LI X F,LIU W B,LU K L,et al.Dietary carbohydrate/lipid ratios affect stress,oxidative status and non-specific immune responses of fingerling blunt snout bream,Megalobramaamblycephala[J].Fish & Shellfish Immunology,2012,33(2):316-323.

[11]戈賢平,劉波,謝駿,等.飼料中不同碳水化合物水平對翹嘴紅鲌生長及血液指標和糖代謝酶的影響[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報,2007,30(3):88-93.

[12]ENES P,PANSERAT S,KAUSHIK S,et al.Nutritional regulation of hepatic glucose metabolism in fish[J].Fish Physiology and Biochemistry,2009,35(3):519-539.

[13]聶琴,苗惠君,苗淑彥,等.不同糖源及糖水平對大菱鲆糖代謝酶活性的影響[J].水生生物學報,2013,37(3):425-433.

[14]ENES P,PANSERAT S,KAUSHIK S,et al.Effect of normal and waxy maize starch on growth,food utilization and hepatic glucose metabolism in European sea bass (Dicentrarchuslabrax) juveniles[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular & Integrative Physiology,2006,143(1):89-96.

[15]ENES P,PANSERAT S,KAUSHIK S,et al.Growth performance and metabolic utilization of diets with native and waxy maize starch by gilthead sea bream (Sparusaurata) juveniles[J].Aquaculture,2008,274(1):101-108.

[16]竇兵帥,梁萌青,鄭珂珂,等.飼料中碳水化合物水平對鱸魚生長、生理狀態(tài)參數(shù)及體組成的影響[J].漁業(yè)科學進展,2014,35(1):46-54.

[18]張世亮.飼料中糖結(jié)構(gòu)、糖水平及糖脂比對瓦氏黃顙魚幼魚生長及糖代謝的影響[D].碩士學位論文.青島:中國海洋大學,2011.

[19]周華.飼料碳水化合物水平對鳡幼魚生長、體成分及糖代謝酶活性的影響[D].碩士學位論文.武漢:華中農(nóng)業(yè)大學,2011.

[20]林淑琴.不同生長階段大黃魚的蛋白質(zhì)和蛋/能比營養(yǎng)研究[D].碩士學位論文.青島:中國海洋大學,2013.

[21]何志剛.大黃魚(PseudosciaenacroceaR.)和鱸魚(Lateolabraxjaponicus)蘇氨酸和苯丙氨酸營養(yǎng)生理研究[D].碩士學位論文.青島:中國海洋大學,2008.

[22]申屠基康.大黃魚對21種飼料原料表觀消化率及色氨酸營養(yǎng)需要研究[D].碩士學位論文.青島:中國海洋大學,2010.

[23]林利民,王秋榮,王志勇,等.不同家系大黃魚肌肉營養(yǎng)成分的比較[J].中國水產(chǎn)科學,2006,13(2):286-291.

[24]周飄蘋,金敏,吳文俊,等.不同養(yǎng)殖模式、投喂不同餌料及不同品系大黃魚營養(yǎng)成分比較[J].動物營養(yǎng)學報,2014,26(4):969-980.

[25]MAI K S,WAN J L,AI Q H,et al.Dietary methionine requirement of large yellow croaker,PseudosciaenacroceaR[J].Aquaculture,2006,253(1/2/3/4):564-572.

[26]AOAC.Official methods of analysis[S].16th ed.Arlington:AOAC International,1995.

[27]HASSID W Z,ABRAHAM S.Chemical procedures for analysis of polysaccharides[J].Methods in Enzymology,1957,3:34-50.

[28]王慶萍,方春林.魚類脂肪需求研究概述[J].江西水產(chǎn)科技,2010(4):7-9.

[29]李愛杰.水產(chǎn)動物營養(yǎng)與飼料學[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1996:44-45.

[30]DIAS J,ALVAREZ M J,DIEZ A,et al.Regulation of hepatic lipogenesis by dietary protein/energy in juvenile European sebass (Dicentrarchuslabrax)[J].Aquaculture,1998,161(1/2/3/4):169-186.

[31]NRC.Nutrient requirements of fish and shrimp[S].Washington,D.C.:National Academies Press,2011.

[32]譚肖英,羅智,劉永堅.魚類對飼料中糖的利用研究進展[J].中國飼料,2007(6):19-23.

[33]AL-ASGAH N A,ALI A.Feeding of various carbohydrate sources on the growth performance and nutrient utilization in “Oreochromisniloticus”[J].Agribiological Research,1994,47(1):1-12.

[34]王菲,李向飛,李貴鋒,等.不同糖脂比對建鯉幼魚生長、體組成、消化及糖酵解能力的影響[J].水產(chǎn)學報,2015,39(9):1386-1394.

[35]COWEY C B,ADRON J W,BROWN D A,et al.Studies on the nutrition of marine flatfish.The metabolism of glucose by plaice (Pleuronectesplatessa) and the effect of dietary energy source on protein utilization in plaice[J].British Journal of Nutrition,1975,33(2):219-231.

[36]SHIMENO S,MING D C,TAKEDA M.Metabolic response to dietary carbohydrate to lipid ratios inOreochromisniloticus[J].Nippon Suisan Gakkaishi,1993,59(5):827-833.

[37]MOKOGINTA I,TAKEUCHI T,HADADI A,et al.Different capabilities in utilizing dietary carbohydrate by fingerling and subadult giant gouramyOsphronemusgouramy[J].Fisheries Science,2004,70(6):996-1002.

[38]ERFANULLAH E,JAFRI A K.Effect of dietary carbohydrate-to-lipid ratio on growth and body composition of walking catfish (Clariasbatrachus)[J].Aquaculture,1998,161(1/2/3/4):159-168.

[39]DENG D F,REFSTIE S,HUNG S S O.Glycemic and glycosuric responses in white sturgeon (Acipensertransmontanus) after oral administration of simple and complex carbohydrates[J].Aquaculture,2001,199(1/2):107-117.

[40]蔡春芳,陳立僑,葉元土,等.日糧糖種類和水平對青魚生長性能和生理指標的影響[J].動物營養(yǎng)學報,2009,21(2):212-218.

[42]王猛強,周飄蘋,黃文文,等.不同蛋白質(zhì)水平下葡萄糖添加水平對大黃魚生長性能、糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響[J].動物營養(yǎng)學報,2015,27(8):2431-2442.

[43]王猛強,黃文文,周飄蘋,等.不同蛋白質(zhì)和小麥淀粉水平對大黃魚生長性能、糖酵解和糖異生關(guān)鍵酶活性的影響[J].水產(chǎn)學報,2015,39(11):1690-1701.

[44]LANARI D,POLI B M,BALLESTRAZZI R,et al.The effects of dietary fat and NFE levels on growing European sea bass (DicentrarchuslabraxL.).Growth rate,body and fillet composition,carcass traits and nutrient retention efficiency[J].Aquaculture,1999,179(1/2/3/4):351-364.

[45]ALI M Z,JAUNCEY K.Optimal dietary carbohydrate to lipid ratio in African catfishClariasgariepinus(Burchell 1822)[J].Aquaculture International,2004,12(2):169-180.

[47]LEE S M,LEE J H.Effect of dietary glucose,dextrin and starch on growth and body composition of juvenile starry flounderPlatichthysstellatus[J].Fisheries Science,2004,70(1):53-58.

[48]FURUICHI M,YONE Y.Changes in activities of hepatic enzymes related to carbohydrate metabolism of fishes in glucose and insulin-glucose tolerance tests[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries,1982,48(3):463-466.

[49]LIN S C,LIOU C H,SHIAU S Y.Renal threshold for urinary glucose excretion by tilapia in response to orally administered carbohydrates and injected glucose[J].Fish Physiology and Biochemistry,2000,23(2):127-132.

[50]KESHAVANATH P,MANJAPPA K,GANGADHARA B.Evaluation of carbohydrate rich diets through common carp culture in manured tanks[J].Aquaculture Nutrition,2002,8(3):169-174.

[51]GAYE-SIESSEGGER J,FOCKEN V,BECKER K.Effect of dietary protein/carbohydrate ratio on activities of hepatic enzymes involved in the amino acid metabolism of Nile tilapia,Oreochromisniloticus(L.)[J].Fish Physiology and Biochemistry,2006,32(4):275-282.

[52]王麗娜,劉文斌,張春暖,等.飼料中非蛋白能源物質(zhì)對黃顙魚幼魚生長及生理生化指標的影響[J].南京農(nóng)業(yè)大學學報,2014,37(1):108-114.

[53]MOREIRA I S,PERES H,COUTO A,et al.Temperature and dietary carbohydrate level effects on performance and metabolic utilisation of diets in European sea bass (Dicentrarchuslabrax) juveniles[J].Aquaculture,2008,274(1):153-160.

[54]HILTON J W,ATKINSON J L.Response of rainbow trout (Salmogairdneri) to increased levels of available carbohydrate in practical trout diets[J].British Journal of Nutrition,1982,47(3):597-607.

[55]MORO G V,CAMILO R Y,MORAES G,et al.Dietary non-protein energy sources:growth,digestive enzyme activities and nutrient utilization by the catfish jundiá,Rhamdia quelen[J].Aquaculture Research,2010,41(3):394-400.

[56]DJANGMAH J S.The effects of feeding and starvation on copper in the blood and hepatopancreas,and on blood proteins ofCrangonvullgaris(Fabricius)[J].Comparative Biochemistry and Physiology,1970,32(4):709-731.

[57]HEMRE G I,MOMMSEN T P,KROGDAHL ?.Carbohydrates in fish nutrition:effects on growth,glucose metabolism and hepatic enzymes[J].Aquaculture Nutrition,2002,8(3):175-194.

[58]ZHOU Q C,WANG Y L,WANG H L,et al.Dietary threonine requirements of juvenile Pacific white shrimp,Litopenaeusvannamei[J].Aquaculture,2013,392-395:142-147.

[59]周玉,郭文場,楊振國,等.魚類血液學指標研究的進展[J].上海水產(chǎn)大學學報,2001,10(2):163-165.

[60]UGOLEV A M,EGOROVA V V,KUZ’MINA V V,et al.Comparative-molecular characterization of membrane digestion in fish and mammals[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part B:Comparative Biochemistry,1983,76(3):627-635.

[61]COWEY C B,WALTON M J.Intermediary metabolism[M]//HALVER E.Fish nutrition.New York:Academic Press,1989:259-329.

[62]CASERAS A,METN I,VIVES C,et al.Nutritional regulation of glucose-6-phosphatase gene expression in liver of the gilthead sea bream (Sparusaurata)[J].British journal of nutrition,2002,88(6):607-614.

[63]PANSERAT S,CAPILLA E,GUTIERREZ J,et al.Glucokinase is highly induced and glucose-6-phosphatase poorly repressed in liver of rainbow trout (Oncorhynchusmykiss) by a single meal with glucose[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part B:Biochemistry and Molecular Biology,2001,128(2):275-283.

(責任編輯菅景穎)

Effects of Different Lipid and Glucose Levels on Growth Performance, Hepatic Glycolysis and Gluconeogenic Key Enzyme Activities of Large Yellow Croaker(LarmichthyscroceaRichardson)

MA HongnaZHOU PiaopingLU YouYUAN YeHOU YingmeiUN PengDING LiyunZHOU Qicun*

(Laboratory of Fish Nutrition, School of Marine Science, Ningbo University, Ningbo 315211, China)

An 8-week feeding trial was conducted to evaluate the effects of different lipid and glucose levels on growth performance, hepatic glycolysis and gluconeogenic key enzyme activities, serum biochemical indices, glycogen contents and digestive enzyme activities etc. of large yellow croaker. Six experimental diets were formulated to contain two lipid levels (5% and 10%) and three glucose levels (10%, 20% and 30%) using 2×3 double-factor experimental design. Each diet was randomly assigned to 3 replicates of 50 juvenile large yellow croakers with the initial body weight of (14.79±0.13) g. The results showed that weight gain rate (WGR), specific growth rate (SGR) and feed efficiency (FE) were not significantly affected by the interaction of dietary lipid and glucose levels (P>0.05). When the dietary lipid level was 5%, the WGR and SGR were decreased with the increase of dietary glucose level, which in 30% glucose group were significantly lower than those in 10% glucose group (P<0.05). The interaction of dietary lipid and glucose levels had significant effects on the contents of crude lipid and moisture of whole body (P<0.05), but had no significant effects on the content of crude protein of whole body (P>0.05). The contents of hepatic glycogen and muscle glycogen were significantly affected by the interaction of dietary lipid and glucose levels (P<0.05). When the dietary lipid level was 5%, hepatic glycogen content was increased with the dietary glucose level increasing, while the muscle glycogen content was firstly increased and then down. But when the dietary lipid level was 10%, hepatic glycogen content was firstly increased and then decreased with the dietary glucose level increasing, while the muscle glycogen content was increased. The interaction of dietary lipid and glucose levels did not have significant effects on the contents of total protein, total cholesterol, triglyceride, glucose and the activities of alanine aminotransferase and aspartate transaminase in serum of large yellow croaker (P>0.05). However, when the dietary lipid level was the same, serum glucose content had an increase trend with dietary glucose level increasing, and that in 30% glucose group was significantly higher than that in 10% glucose group (P<0.05). Hepatic glucokinase, phosphofructokinase and phosphoenolpyruvate carboxy kinase activities were significantly affected by the interaction of dietary lipid and glucose levels (P<0.05), while there were no significant effects on pyruvate kinase, glucose-6-phosphatase and fructose-1,6-bisphosphatase activities (P>0.05). When the dietary lipid level was 10%, the hepatic glucokinase and phosphofructokinase activities were increased with dietary glucose level increasing, while the hepatic phosphoenolpyruvate carboxy activity was firstly increased and then decreased. These results demonstrate that, compared with the dietary 10% lipid level, when the dietary lipid level is 5%, large yellow croaker has the ability to maintain the balance of blood glucose content by adjusting hepatic glycogen contents, glucose metabolism key enzyme activities and effectively utilizes glucose in diets with the dietary glucose level increasing. The results of present study indicate that the optimal requirements of lipid and carbohydrate for large yellow croaker in the larval stage are recommended to be 10% and 20%, respectively.[ChineseJournalofAnimalNutrition, 2016, 28(10)：3110-3122]

large yellow croaker (LarmichthyscroceaRichardson); glucose; lipid; growth performance; glycolysis key enzymes; gluconeogenic key enzymes

, professor, E-mail: zhouqicun@nbu.edu.cn

10.3969/j.issn.1006-267x.2016.10.013

2016-04-05

國家自然科學基金項目(31272670)；寧波市農(nóng)業(yè)科技攻關(guān)重大項目(2012C10025)；國家科技部星火重大計劃項目(2014GA701001)；浙江省重中之重一級學科(水產(chǎn))開放基金項目

馬紅娜(1994—)，女，山西臨汾人，碩士研究生，從事水生動物營養(yǎng)與飼料研究。E-mail: 121848841@qq.com

周歧存，教授，博士生導師，E-mail: zhouqicun@nbu.edu.cn

S963

A

1006-267X(2016)10-3110-13