阿爾茨海默病患者維醫(yī)異常體液質(zhì)與ApoE基因多態(tài)性關(guān)系的研究

富雪婷，王　堯,2，熱娜古麗·艾則孜，辛小紅，巴哈爾·哈德爾

(1新疆醫(yī)科大學(xué)研究生院，烏魯木齊　830011；2新疆伊犁州中醫(yī)醫(yī)院，新疆　伊寧　835000；新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬中醫(yī)醫(yī)院，魯木齊　830000,4中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊　830011)

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·維醫(yī)維藥·

阿爾茨海默病患者維醫(yī)異常體液質(zhì)與ApoE基因多態(tài)性關(guān)系的研究

富雪婷1，王堯1,2，熱娜古麗·艾則孜3，辛小紅4，巴哈爾·哈德爾4

(1新疆醫(yī)科大學(xué)研究生院，烏魯木齊830011；2新疆伊犁州中醫(yī)醫(yī)院，新疆伊寧835000；新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬中醫(yī)醫(yī)院，魯木齊830000,4中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊830011)

目的探討阿爾茨海默病患者維吾爾醫(yī)異常體液質(zhì)與ApoE基因型的關(guān)系，為預(yù)防阿爾茨海默病提供新思路。方法從新疆烏魯木齊市18所老年公寓中，篩選出202例阿爾茨海默病患者為病例組，按照維吾爾醫(yī)異常體液質(zhì)分為異常黑膽質(zhì)、異常黏液質(zhì)、異常膽液質(zhì)、異常血液質(zhì)，并以同期新疆烏魯木齊市老年公寓經(jīng)門診體檢的30例健康老人設(shè)為正常組，進行ApoE基因多態(tài)性的檢測。結(jié)果病例組及正常組ε3/3等位基因分布比例最高，且正常組ε3/3分布比例(73.4%)高于病例組(54.5%)；ε3/4、ε4等位基因分布差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論ε4等位基因是阿爾茨海默病的危險因素，異常黑膽質(zhì)型的阿爾茨海默病患者ApoEε4等位基因頻率高于其他3型。

阿爾茨海默?。痪S吾爾醫(yī)學(xué)；異常體液質(zhì)；ApoE基因多態(tài)性

維吾爾醫(yī)學(xué)(以下簡稱維醫(yī))古籍中雖沒有“癡呆”的病名，但是對“善忘”、“遺忘”的病因病機、癥狀體征防治等均有詳細(xì)的記載[1]。關(guān)于名稱有“阿麻開提”(呆病)、“尼斯揚”(善忘)等描述，其主要表現(xiàn)為記憶力減退或喪失、健忘、言行如同小孩，多見于高齡老人[2-7]。維醫(yī)的體液學(xué)說,包括膽液質(zhì)(saprahilit)、血液質(zhì)(kanhilit)、黏液質(zhì)(belghemhilit)和黑膽質(zhì)(savdahilit)[8]，異常體液學(xué)說是維醫(yī)疾病機制和診治疾病的主要特色之一，在維醫(yī)治療過程中起到不可替代的指導(dǎo)作用[9-10]。

老年性癡呆又稱阿爾茨海默病(Alzhmier’s disease,AD)，是一種漸進性神經(jīng)退化性疾病,以進行性記憶認(rèn)知障礙、人格改變?yōu)橹饕卣鱗11]。AD發(fā)病的具體機制較為復(fù)雜，有關(guān)研究顯示AD的發(fā)病與APP、PS-1、ApoE、A2M、MTHFR基因有關(guān)[12-13]。但大量研究表明，ApoEε4等位基因可能是散發(fā)型AD發(fā)生的危險因素，而未發(fā)現(xiàn)其他基因突變與AD有關(guān)，故借助新疆地域特色，本課題組探討AD的維醫(yī)異常體液質(zhì)分布規(guī)律與ApoE基因多態(tài)性的關(guān)系，為今后維醫(yī)結(jié)合西醫(yī)對AD治療及預(yù)防奠定一定的理論基礎(chǔ)。

1　資料與方法

1.1研究對象及分組選取于2014年3月-2015年5月新疆烏魯木齊市18所老年公寓AD患者202例(病例組)為研究對象，其中男性104例，女性98例，年齡在65～98歲，平均(76.20±7.99)歲。另將同期新疆烏魯木齊市30例體檢者列為正常組，其中男性13例，女性17例，年齡65～96歲，平均(79.60±8.20) 歲。AD西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn):主要參照美國精神病學(xué)會(APA)修訂的《精神障礙診斷與統(tǒng)計手冊》第4版(DSM-IV-R)老年性癡呆診斷標(biāo)準(zhǔn)[14]。維醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn):根據(jù)《維吾爾醫(yī)學(xué)診斷學(xué)》[10]制定,維醫(yī)異常體液質(zhì)分型標(biāo)準(zhǔn)參照《維吾爾醫(yī)體液論及其現(xiàn)代研究》[15]制定，將符合西醫(yī)及維醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)的AD患者納入。排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡<65歲、血管性癡呆、混合性癡呆以及其他的癡呆患者，伴有昏迷、失語、聽力障礙及其他不能配合的患者，有腦外傷、中毒、精神疾病等對智能影響比較明顯的患者或非自愿參與研究的患者。

1.2實驗方法在清晨空腹安靜狀態(tài)下，抽取研究對象外周靜脈血5 mL,EDTA-Na2 抗凝，采用天根公司提供的血液基因組DNA提取系統(tǒng)(0.1～20 mL)(非離心柱型)試劑盒，實驗步驟按照說明書進行，應(yīng)用2%瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)檢測DNA純度，再用核酸定量儀測定DNA濃度，進行聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴增，其反應(yīng)循環(huán)設(shè)置為：94℃ 3 min，94℃ 30 s,55℃ 30 s,72℃ 1 min,循環(huán)30次，72℃ 5 min；引物由華大基因公司提供(引物序列：上游引物:5′-AGGTCCAGGTTTCATTCTGC-3′，下游引物:5′-ATGCGAGAC-CTGGGACTGAGA-3′)，最后對目的基因直接測序，從而獲得ApoE基因的不同基因型(表1)?；蛐皖l率=基因型頻數(shù)/總例數(shù)。等位基因頻率采用平衡法：ε2=ε2/2+1/2(ε2/3+ε2/4)；ε3=ε3/3+1/2(ε2/3+ε3/4)；ε4=ε4/4+1/2(ε3/4+ε2/4)。

表1　ApoE基因型的確定方法

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料的組間比較用χ2檢驗。基因頻率用基因計數(shù)法計算，病例組與正常組的ApoE基因頻率及等位基因頻率之間的比較用χ2檢驗，維醫(yī)異常體液質(zhì)各個分型與ApoE基因多態(tài)性之間比較用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1病例組維醫(yī)異常體液質(zhì)分型分布按“維吾爾醫(yī)體液論及其現(xiàn)代研究”進行異常體液質(zhì)分型，維醫(yī)異常體液質(zhì)分布頻率為：異常黑膽質(zhì)>異常黏液質(zhì)>異常膽液質(zhì)>異常血液質(zhì)(表2)。

表2　202例AD患者維醫(yī)異常體液質(zhì)分型構(gòu)成比分布

2.2病例組及正常組的基因頻率及等位基因頻率的分布在病例組與正常組中均以ε3/3比例最高，其次是ε3/4、ε2/3,正常組中ε3/3頻率分布構(gòu)成比(73.4%)較病例組(54.5%)高；病例組ε3/4頻率分布構(gòu)成比(29.2%)明顯高于正常組(3.3%)，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，病例組ε2/3頻率分布構(gòu)成比(10.9%)低于正常組(13.3%)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；兩組比較中ε2/2、ε4/4、ε2/4分布很少，且差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；兩組ε4等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，ε2、ε3等位基因頻率分布差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；由此說明ε3/3及ε3等位基因是人體中常見基因型，而含有ε4等位基因患有AD可能性大，但證據(jù)尚不足，需進一步證明ε4等位基因與AD發(fā)病有關(guān)(表3)。

表3　病例組及正常組ApoE基因型及等位基因頻率的分布/例(%)

2.3維醫(yī)各個異常體液質(zhì)分型與含有ε4等位基因的相關(guān)性含有ε4等位基因的AD發(fā)病的相對危險度OR=5.495，進一步證明ε4等位基因是AD發(fā)病的一個危險因素，因此只需研究維醫(yī)異常體液質(zhì)各個分型與ε4等位基因的相關(guān)性即可。異常黑膽質(zhì)與含有ε4等位基因比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；而異常膽液質(zhì)、異常血液質(zhì)及異常黏液質(zhì)與含有ε4等位基因比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(表4)。

表4維醫(yī)各個異常體液質(zhì)分型與含有ε4等位基因的相關(guān)性/例

組別異常黑膽質(zhì)異常膽液質(zhì)異常血液質(zhì)異常黏液質(zhì)含有ε4等位基因27235不含ε4等位基因82252236χ2值6.5912.4790.7611.288P值0.010.1150.5810.256

3　討論

維醫(yī)古籍把AD描述為“阿麻開提”(呆病)及“尼斯揚”(善忘)等[3]，主要表現(xiàn)是思維力減退或喪失，原因是由于異常黑膽質(zhì)過積引起，或者異常黏液質(zhì)過剩積淤腦部所致[4],其中異常黑膽質(zhì)主要由于干寒性或干性過剩所致，異常黏液質(zhì)主要是由于濕性過剩所致，干性過剩者表現(xiàn)為近期記憶障礙；濕性過剩者表現(xiàn)為遠(yuǎn)期記憶障礙?！夺t(yī)學(xué)之目的》[6]認(rèn)為本病多由干寒性過剩、濕寒性過剩、干性過剩、熱性過剩以及膽液質(zhì)和血液質(zhì)過剩引發(fā)，或布哈拉提(腐敗之氣)犯前腦而誘發(fā)，其主要表現(xiàn)為干寒性過剩者見失眠、口鼻干燥、易忘舊事；濕寒性過剩者見嗜睡、口鼻流液、舌質(zhì)淡、苔白膩、易忘舊事、能記當(dāng)事，但遺忘速度較快；干性過剩者見視力和聽力正常，易忘舊事，不記當(dāng)事；熱性過剩者見遇事急躁，煩躁不安；膽液質(zhì)和血液質(zhì)過剩引發(fā)或布哈拉提(敗氣)犯前腦者，多見智力混亂、胡思亂想、視覺錯亂等。說明異常體液質(zhì)4種分型都與AD有著密切的關(guān)系。

維醫(yī)認(rèn)為不同類型異常體液質(zhì)可以導(dǎo)致不同疾病，故不同異常體液質(zhì)人群患病幾率也是不同的。無論是黏液質(zhì)、膽液質(zhì)、血液質(zhì)還是黑膽質(zhì),在強熱作用下“燃燒”，失去其正常生理功能最終都會形成異常黑膽質(zhì)，也就是說不同體液性疾病最終發(fā)展為異常黑膽質(zhì)。據(jù)調(diào)查表明，在多數(shù)復(fù)雜性疾病中，老年人的黑膽質(zhì)體液型的異常明顯高于中年人和青年人[16]。本實驗研究表明維醫(yī)異常體液質(zhì)各個分型的分布情況，異常黑膽質(zhì)(53.9%)>異常黏液質(zhì)(20.3%)>異常膽液質(zhì)(13.3%)>異常血液質(zhì)(12.4%),說明患AD的老年人群中，異常黑膽質(zhì)占大部分，證明異常黑膽質(zhì)與AD的發(fā)生有著密切的關(guān)系。

目前對于AD發(fā)病的病因病機尚不明確，有研究顯示AD發(fā)病與ApoE基因型有著密切聯(lián)系[17]。人類ApoE基因主要有ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4等位基因，分別編碼ApoEε2、ApoEε3、ApoEε4蛋白,產(chǎn)生6 種表型:純合子ε2/2、ε3/3、ε4/4，雜合子ε2/3、ε2/4、ε3/4[18]。ApoEε4等位基因已確認(rèn)是散發(fā)型和遲發(fā)型AD最顯著的風(fēng)險基因，并且AD患者中ApoEε4等位基因攜帶者占65%～80%[17,19]。在AD的研究中，著重研究ApoEε4 等位基因[20]。在晚發(fā)的AD家族中，不伴有ApoEε4的發(fā)生AD的危險性為20%，含ApoEε4雜合子的這種危險性增加到45%，而有ApoEε4純合子增加到90%[21-23]，再次證明ApoEε4等位基因是AD的危險因素。本研究結(jié)果顯示病例組ε4、ε3/4基因頻率與正常組相比有差異性，尤以病例組明顯，而ε3/3及ε3等位基因是人體常見型，可以通過確定基因型來輔助AD的診斷。本研究結(jié)果顯示，異常黑膽質(zhì)與含有ε4等位基因差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，證明異常黑膽質(zhì)患者中含有ε4等位基因可作為AD發(fā)生的危險因素。而異常黏液質(zhì)與含有ε4等位基因差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，考慮是由于異常黏液質(zhì)樣本量不足所致，今后需加大樣本量進一步論證異常黏液質(zhì)、ε4等位基因與AD的關(guān)系。

本研究再次論證ε4等位基因與AD的密切關(guān)系，同時提出異常黑膽質(zhì)中含有ε4等位基因的人群更易患AD，為阿爾茨海默病患者的早期預(yù)防提供指導(dǎo)方向，為健康人群今后可能的病變提供早期干預(yù)預(yù)防基礎(chǔ)。

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(本文編輯楊晨晨)

Study on the relationship between the syndrome types of Alzheimer′s disease in Uyghur medicine and ApoE gene polymorphism

FU Xueting1，WANG Yao1,2，Renaguli Aizezi3，XIN Xiaohong4，Bahar Hader4

(1Graduate School of Xinjiang Medical University,Urumqi 830011,Cina；2Xinjiang Yili Chinese Medicine Hospital，Xinjiang Yining 835000,China；3Fourth Affiliated Traditional Chinese Hospital，Urumqi 830000，China;4College of Traditional Chinese Medicine,Xinjiang Medical University，Urumqi 830011,China)

ObjectiveThe relationship between the syndrome types of Alzheimer′s disease in Uyghur medicine and ApoE gene polymorphism were investigated to provide new ideas for the treatment and prevention of alzheimer′s disease in the future.Methods202 cases of alzheimer′s patients came from 18 elderly apartments in Urumqi city,Xinjiang Uygur Autonomous Region as case group.According to Uyghur medicine,they were differentiated as abnormal savda,abnormal phlegm,bile abnormal mass,abnormal blood quality.At the same time,30 healthy elderly people lived in the apartments for aged in Urumqi,Xinjiang Uygur Autonomous Region were diagnosed as normal group.The ApoE gene polymorphism was tested.ResultsThe proportion of ε3/3 was the highest in case group and normal group,and the distribution ratio of ε3/3 in the normal group was 73.4%,which is higher than that in the normal group (54.5%).The distribution of ε3/4 and ε4 allele was statistically significant (P<0.05).ConclusionThe ε4 allele is a risk factor of Alzheimer′s disease.The allele frequency of ApoEε4 in Alzheimer′s disease patients with abnormal black bile is higher than that of other three types.

Alzheimer′s disease; Uyghur medicine; ApoE gene polymorphism

國家自然科學(xué)基金(81260563)

富雪婷(1991-)，女，在讀碩士，研究方向：中醫(yī)學(xué)與維吾爾醫(yī)學(xué)對老年性癡呆辨證分型研究。

巴哈爾·哈德爾，女(維吾爾族)，教授，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)學(xué)與維吾爾醫(yī)學(xué)對老年性癡呆辨證分型研究，E-mail：1301885416@qq．com。

R749.16

A

1009-5551(2016)11-1471-04

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.11.031

2016-05-27]