豬場(chǎng)口蹄疫抗體血清學(xué)調(diào)查與分析

張改文，郝衛(wèi)芳，史新濤，李　赟

（太原市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山西 太原 030027）

豬場(chǎng)口蹄疫抗體血清學(xué)調(diào)查與分析

張改文，郝衛(wèi)芳，史新濤，李赟

（太原市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山西 太原 030027）

口蹄疫是偶蹄動(dòng)物感染口蹄疫病毒（FMDV）引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，黃牛、水牛、豬、駱駝、羊、鹿等動(dòng)物最易感。口蹄疫病毒分為O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3（即南非口蹄疫病毒1、2、3型）和Asia I（亞洲I型）7個(gè)血清型，各型之間幾乎沒(méi)有免疫保護(hù)力，感染了口蹄疫病毒某一血清型的動(dòng)物仍可感染其他血清型病毒而發(fā)病。近兩年，周圍規(guī)模化豬場(chǎng)O型口蹄疫免疫抗體合格，仍有口蹄疫疫情發(fā)生，為進(jìn)一步研究豬場(chǎng)口蹄疫疫病的發(fā)生原因，對(duì)28個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)進(jìn)行了口蹄疫病毒O型、A型和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體水平血清學(xué)調(diào)查，分析當(dāng)前豬場(chǎng)是否存在感染口蹄疫病毒野毒株，以及感染A型口蹄疫病毒的可能。FMDV的免疫是依賴T細(xì)胞和B細(xì)胞應(yīng)答，疫苗接種后主要誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，但FMDV中非結(jié)構(gòu)蛋白NSP相對(duì)保守，NSP是除了衣殼蛋白1A、1B、1C、1D和它們的前體蛋白之外的所有由病毒編碼但不參與病毒衣殼組成的蛋白，包括成熟蛋白L、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D以及它們的前體，它參與病毒的復(fù)制、多聚蛋白的裂解和病毒顆粒的組裝過(guò)程。

1　樣品與試劑

本市10個(gè)縣隨機(jī)選取了不同規(guī)模的豬場(chǎng)28個(gè)，其中500頭以下7個(gè)場(chǎng)，500～1 000頭之間7個(gè)場(chǎng)，1 000～3 000頭之間7個(gè)場(chǎng)，3 000頭以上7個(gè)場(chǎng)，隨機(jī)采集以上豬場(chǎng)血清樣品340份，進(jìn)行了口蹄疫O型、A型和非結(jié)構(gòu)蛋白（3ABC）抗體血清學(xué)檢測(cè)。

檢測(cè)試劑為市場(chǎng)上成熟的試劑盒，其中豬O型口蹄疫病毒抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自鄭州中道生物技術(shù)有限公司；口蹄疫A型液相阻斷ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所、口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體單抗阻斷ELISA試劑盒，購(gòu)自北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司；檢測(cè)儀器有：酶標(biāo)儀（Thermo MK3），自動(dòng)洗板機(jī)（Thermo MK2）等。

2　結(jié)果

2.1檢測(cè)結(jié)果3項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果如表1、圖1。4種不同規(guī)模豬場(chǎng)O型口蹄疫抗體陽(yáng)性率均達(dá)85%以上，A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率分別為10.8%、16.25%、30.8%、49%，非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)陽(yáng)性率分別為9.2%，13.75%、30%、24%。A型口蹄疫抗體陽(yáng)性場(chǎng)18個(gè)，占調(diào)查場(chǎng)的64.2%，非結(jié)構(gòu)蛋白陽(yáng)性場(chǎng)數(shù)20個(gè)，占調(diào)查場(chǎng)的71.4%。

28個(gè)豬場(chǎng)中O型口蹄疫免疫抗體合格的場(chǎng)25個(gè)；A型口蹄疫抗體陽(yáng)性場(chǎng)18個(gè)；非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性場(chǎng)20個(gè)。A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率高于非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率的場(chǎng)8個(gè)，非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率高于A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率的場(chǎng)4個(gè)，二者陽(yáng)性率相同的場(chǎng)2個(gè)；只A型抗體陽(yáng)性場(chǎng)4個(gè)；只非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性場(chǎng)6個(gè)；A型口蹄疫抗體和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體均為陰性場(chǎng)4個(gè)。

通過(guò)對(duì)免疫情況與檢測(cè)結(jié)果的綜合分析，免疫豬O型口蹄疫合成肽疫苗的13個(gè)豬場(chǎng)中，A型和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體均為陽(yáng)性場(chǎng)6個(gè)，只A型抗體陽(yáng)性場(chǎng)1個(gè)，只非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性場(chǎng)3個(gè)，二者抗體均為陰性場(chǎng)3個(gè)。免疫O型口蹄疫滅活疫苗的15個(gè)豬場(chǎng)中，A型和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體均為陽(yáng)性場(chǎng)9個(gè)，只A型抗體陽(yáng)性場(chǎng)2個(gè)，只非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性場(chǎng)2個(gè)，二者抗體均為陰性場(chǎng)2個(gè)。

2.2結(jié)果分析

2.2.1Rodriguez等［1］、Mackey等［2］、Brochi［3］、Bergerman等［4］、朱詠梅［5］通過(guò)對(duì)非結(jié)構(gòu)蛋白（3ABC）抗體的產(chǎn)生機(jī)理，野毒感染3ABC抗體檢測(cè)技術(shù)的建立，3ABC抗體檢測(cè)技術(shù)與其他抗體檢測(cè)技術(shù)的比較和臨床檢測(cè)試驗(yàn)應(yīng)用的研究，證明了非結(jié)構(gòu)蛋白（3ABC）抗體檢測(cè)技術(shù)仍是比較有效的區(qū)別口蹄疫免疫抗體和感染抗體的方法。因此，試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，28個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)中口蹄疫病毒大面積、大范圍存在，其中A型口蹄疫病毒潛伏感染和隱性感染的現(xiàn)象也較嚴(yán)重。

2.2.2豬O型口蹄疫屬于國(guó)家強(qiáng)制豬免疫的惟一口蹄疫疫苗。28個(gè)豬場(chǎng)O型口蹄疫免疫抗體整體合格率達(dá)91.5%，除3個(gè)場(chǎng)合格率為55%、65%、70%外，其余25個(gè)豬場(chǎng)合格率均在80%以上，說(shuō)明豬場(chǎng)O型口蹄疫免疫抗體水平很高，仍是防控豬口蹄疫疫病的重要措施。檢測(cè)結(jié)果顯示，O型口蹄疫免疫抗體不合格的3個(gè)豬場(chǎng)，口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)全為陽(yáng)性，其中2個(gè)場(chǎng)A型口蹄疫抗體檢測(cè)也為陽(yáng)性，表明3個(gè)豬場(chǎng)可能感染過(guò)或正感染口蹄疫病毒，影響了O型口蹄疫免疫抗體的產(chǎn)生；其中2個(gè)A型抗體陽(yáng)性場(chǎng)也不能排除其他口蹄疫亞型病毒感染的可能。

表1　4種規(guī)模豬場(chǎng)3種口蹄疫血清學(xué)抗體檢測(cè)結(jié)果

圖1　4種不同規(guī)模豬場(chǎng)3種口蹄疫抗體檢測(cè)陽(yáng)性率

2.2.3口蹄疫A型和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體均為陰性的5個(gè)場(chǎng)，占調(diào)查場(chǎng)的17.8%，其中免疫豬O型口蹄疫合成肽疫苗的場(chǎng)3個(gè)，免疫O型口蹄疫滅活疫苗的場(chǎng)2個(gè)，未發(fā)現(xiàn)不同疫苗免疫的差異。檢測(cè)結(jié)果表明，這5個(gè)場(chǎng)未發(fā)生口蹄疫病毒的感染。

2.2.4口蹄疫A型和非結(jié)構(gòu)蛋白抗體均為陽(yáng)性的14個(gè)場(chǎng)，豬場(chǎng)規(guī)模越大，A型口蹄疫陽(yáng)性率越高；非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)陽(yáng)性率隨著養(yǎng)殖規(guī)模的增大呈拋物線，1 000～3 000頭規(guī)模豬場(chǎng)陽(yáng)性率最高。14個(gè)場(chǎng)中A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率高于非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率的場(chǎng)8個(gè)，說(shuō)明A型口蹄疫病毒在豬場(chǎng)大范圍存在，其感染的概率大于其他口蹄疫亞型感染的概率。A型口蹄疫抗體陽(yáng)性率低于非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率的場(chǎng)4個(gè)，說(shuō)明豬場(chǎng)存在口蹄疫病毒感染的可能，但不能說(shuō)明全是A型口蹄疫感染。

2.2.528個(gè)調(diào)查豬場(chǎng)中，非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性場(chǎng)有20個(gè)，占調(diào)查場(chǎng)的71.4%，A型抗體陽(yáng)性場(chǎng)有18個(gè)，占調(diào)查場(chǎng)的64.3%，調(diào)查警示規(guī)?；i場(chǎng)口蹄疫病毒大范圍存在，其中A型口蹄疫病毒存在和感染的可能性較大，需要引起豬場(chǎng)的高度重視，做好相應(yīng)的預(yù)防措施。

3　討論

該項(xiàng)調(diào)查中采集的豬群主要為育肥豬，年齡均2歲以下，而且只有個(gè)別豬場(chǎng)進(jìn)行過(guò)A型口蹄疫免疫，其余豬場(chǎng)均未進(jìn)行A型口蹄疫免疫，因此，整體調(diào)查分析，A型口蹄疫病毒在部分豬場(chǎng)潛伏存在，雖未引起口蹄疫疫情的暴發(fā)，但需要引起豬場(chǎng)的高度重視，應(yīng)盡早制定相應(yīng)的應(yīng)對(duì)措施來(lái)應(yīng)對(duì)A型口蹄疫疫情暴發(fā)和蔓延。

對(duì)未免疫A型豬口蹄疫的種豬場(chǎng)和規(guī)?；i場(chǎng)，開(kāi)展一次豬A型口蹄疫血清學(xué)抗體篩查，對(duì)陽(yáng)性樣品進(jìn)一步進(jìn)行A型口蹄疫病原學(xué)確診，來(lái)凈化和防控A型口蹄疫病毒的潛在威脅。對(duì)免疫A型口蹄疫疫苗的豬場(chǎng)進(jìn)行免疫抗體水平的跟蹤監(jiān)測(cè)，同時(shí)進(jìn)行非結(jié)構(gòu)蛋白（3ABC）抗體的檢測(cè)，排除口蹄疫其他血清型病毒的感染。

經(jīng)過(guò)調(diào)查分析，基層動(dòng)物疫病檢測(cè)機(jī)構(gòu)日常檢測(cè)需加大檢測(cè)力度。豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)，不能單一地檢測(cè)口蹄疫O型免疫抗體，要結(jié)合口蹄疫血清學(xué)其他檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行綜合檢測(cè)，辨別抗體是免疫抗體還是感染抗體。此外，A型抗體陽(yáng)性率隨著豬場(chǎng)規(guī)模擴(kuò)大陽(yáng)性率升高，預(yù)示A型口蹄疫病毒在豬群中大面積存在，需加以重視；而A型口蹄疫在豬場(chǎng)是否納入強(qiáng)制免疫計(jì)劃，仍需進(jìn)一步研究論證。

［1］Rodriguez A，Dopazo J，Saiz J C，et al.Immunogenicity of nonstructural proteins of foot-and-mouth disease virus：differences between infected and vaccinated swine［J］.Arch Virol，1994，136（1/2）：123-131.

［2］Mackey D K J，F(xiàn)orsyth M A，Davies P R，et al.Differentiating infection from vaccination in foot-and-mouth disease by the detection of antibodies to the non-structural protein 3D，3AB and 3ABC in ELISA using antigens expressed in baculovirus［J］.Arch-Virol，1998，143：1461-1476.

［3］Brocchi E，de Diego M I，Berlinzani A，et al.Diagnostic potential of Mab based ELISA for antibodies to non-structural roteins of foot-and-mouth disease virus to differentiate nfection from vaccination［J］.Vet Q，1998，20（S）：20-24.

［4］Bergmann I E，de Mello P A，Nneitzet E，et al.Diagnosis of persistent a phthovirus infection and its differentiation from vaccination response in cattle by use of enzyme linked immunoelectrotransfer blot assay［J］.Arch Virol，2000，145：473-489.

［5］朱詠梅，朱來(lái)華，鄭小龍，等.口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白研究進(jìn)展［J］.中國(guó)動(dòng)物檢疫，2011，28（5）：83-86.

S852.65+1

B

0529-6005（2016）04-0068-02

2015-08-28

張改文（1958-），男，高級(jí)畜牧師，本科，主要從事動(dòng)物疫病預(yù)防及疫情控制，E-mail：haowflijia@163.com